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中华耳科学杂志 2016年第1期14卷 32-36页

作者：王驰柳柯赵立东候琨施磊杨仕明宁博江苏省徐州市中心医院耳鼻咽喉科江苏221009 解放军总医院耳鼻咽喉头颈外科解放军耳鼻咽喉研究所北京100853 中国医科大学附属第一医院耳鼻咽喉头颈外科沈阳110001

目的研究年龄相关性听力损失过程中听力阈值变化与耳蜗内毛细胞带状突触标记物数量之间的关系。方法应用C57BL/6J小鼠进行本研究。在本研究中,对鼠龄为1、2、4、6和12个月的C57BL/6J小鼠分别进行ABR阈值检测分析(Click&Tone burst)。对... 详细信息

目的研究年龄相关性听力损失过程中听力阈值变化与耳蜗内毛细胞带状突触标记物数量之间的关系。方法应用C57BL/6J小鼠进行本研究。在本研究中,对鼠龄为1、2、4、6和12个月的C57BL/6J小鼠分别进行ABR阈值检测分析(Click&Tone burst)。对被检测小鼠的耳蜗基底膜标本进行突触前特异蛋白RIBEYE/Ctbp2进行免疫荧光标记,采用激光共聚焦观察结合三维重建的方法来计数突触标记物(RIBEYE/Ctbp2)的数量并进行统计学分析。结果小鼠的ABR阈值从鼠龄4个月时开始出现显著抬高(P2个月时抬高更加明显。在频率分布上,这种阈值的抬高在高频区域(8KHz&16KHz)表现的最为明显。同时,本研究发现标记物的数量和ABR阈值的变化呈现一致性的改变:突触标记物数量也在4个月时开始出现减少(P<0.05),且随着鼠龄的增加数量减少更加明显。这种数量减少的表现在高频区域(8KHz&16KHz)表现得尤为显著(P<0.01)。在听力减退的早期阶段(鼠龄4-6个月),小鼠毛细胞,尤其是内毛细胞数量并未现明显的减少。结论老年性听力损失和耳蜗带状突触的数量改变密切相关,突触数量的减少可能是导致年龄相关性听力损失的一个重要因素。

关键词：老年性聋 C57小鼠耳蜗带状突触 RIBEYE/Ctbp2 内毛细胞

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LOWER DOSE OF AMINOGLYCOSIDE OTOTOXIC EXPOSURE CAUSES PRESYNAPTIC ALTERATIONS ASSOICATED WITH HEARING LOSS

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Journal of Otology 2014年第1期9卷 36-42页

作者： LIU Ke WANG Xiaoyu LI Sijun TANG Siquan XU Yice WANG Xuefeng SUN Jianhe YANG Weiyan YANG Shiming Department of Otolaryngology-Head and Neck Surgery PLA General Hospital PLA Institute of Otolaryngology Department of Otolaryngology-Head and Neck Surgery the Affiliated Hospital North SiChuan Medical College Department of Otolaryngology-Head and Neck Surgery the First Affiliated Hospital Liaoning Medical University

Objective To study presynaptic alternations of cochlear ribbons arising from aminoglycoside ototoxic stimuli in C57BL/6J mice. Methods Animals were injected with low dose gentamicin (100 mg/kg/day) for 14 days, From the 14th to 28th days, the mice were maintained free of gentamicin treatment. Immunohisto-chemistry labeling was employed to trace ribeye, a major presynaptic componment of ribbon synapses. RIBEYE/Ctbp2 expression levels were assessed and compared with hearing threshold shifts. Auditory func-tion was assessed by auditory brainstem responses. The stereocilia of outer hair cells (OHCs) and IHCs was examined by scanning electron microscopy (SEM). Results Hearing thresholds were elevated with peak hearing loss observed on the 7th day after gentamicin exposure, followed by improvement after the 7th day. RIBEYE/Ctbp2 expression directly correlated with observed hearing threshold shifts. Strikingly, we did not see any obvious changes in stereocilia in both OHCs and IHCs until the 28th day. Mild changes in stereocil-ia were only observed in OHCs on the 28th day. Conclusions These findings indicate that presynapse co-chlear ribbons, rather than stereocilia, may be sensitive to aminoglycoside ototoxic exposure in mice cochle-ae. A pattern of RIBEYE/Ctbp2 expression changes seems to parallel hearing threshold shifts and suggests presynaptic response properties to lower dosage of aminoglycoside ototoxic stimuli.

关键词： Inner Hair Cells Ribbon Synapse Aminoglycoside Ototoxicity RIBEYE/Ctbp2 Stereocilia

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C57BL/6J小鼠耳蜗内毛细胞传入神经突触的免疫学标记观察及其意义

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中华耳科学杂志 2010年第4期8卷 456-460页

作者：施磊赵宁陈丽平商秀丽徐义策王雪峰柳柯中国医科大学附属第一医院耳鼻咽喉-头颈外科沈阳110001 辽宁医学院附属第一医院耳鼻咽喉-头颈外科锦州121001 中国人民解放军总医院耳鼻咽喉-头颈外科中国人民解放军总医院耳鼻咽喉研究所北京100853

目的探讨小鼠耳蜗内毛细胞传入神经突触的免疫学标记特点及其应用方法。方法在成年的C57BL/6J小鼠上剥取新鲜的耳蜗基底膜标本,灌洗及漂洗处理之后分别使用ctbp2(C-terminal binding protein 2,C末端结合蛋白2;1∶200),GluR 2/3(glutama... 详细信息

目的探讨小鼠耳蜗内毛细胞传入神经突触的免疫学标记特点及其应用方法。方法在成年的C57BL/6J小鼠上剥取新鲜的耳蜗基底膜标本,灌洗及漂洗处理之后分别使用ctbp2(C-terminal binding protein 2,C末端结合蛋白2;1∶200),GluR 2/3(glutamate receptor2/3,AMPA receptor subunit 2/3,谷氨酸受体亚单位2/3;1∶200)和Dapi(4',6-Diamidino-2-phenylindole,4',6-二脒基-2-苯基吲哚)染色剂对内毛细胞突触的前膜特异结构ribeye、突触后膜的谷氨酸受体以及细胞核进行单独、双重和三重免疫标记,并利用激光共聚焦显微镜能够连续扫描和叠加图像的特性,观察耳蜗内毛细胞带状突触的表达、空间分布情况以及与内、外毛细胞之间的位置关系。结果单独应用ctbp2可以清晰显示内毛细胞突触前膜所标记的结构,结合使用抗体GluR2/3进行免疫双标则可以完整显示内毛细胞突触前后膜的相关蛋白,而结合应用Dapi细胞核染色的方法可以明确标记其存在的位置以及和内、外毛细胞之间的关系,如果在此基础上加上激光共聚焦显微镜下的平光图像,则会使标记结果更加清晰、客观和准确。结论本方法可以准确显示耳蜗内毛细胞带状突触的表达、空间分布情况以及与内外毛细胞之间的位置关系,如果在实验中合理应用多重免疫荧光标记方法,将会对不同生理和病理条件下深入研究耳蜗内毛细胞突触的可塑性及其在听力变化中的作用具有重要的价值。

关键词：内毛细胞传入神经突触 RIBEYE/Ctbp2 免疫标记激光共聚焦显微镜

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