猪Lck蛋白在猪圆环病毒2型体外复制过程中的作用

作     者：刘伟姣 何庆 蒋一凡 曹思雨 张时瑞 吕佳璐 龙娉 杨凌宸 周川 王乃东 LIU Weijiao;HE Qing;JIANG Yifan;CAO Siyu;ZHANG Shirui;L Jialu;LONG Ping;YANG Lingchen;ZHOU Chuan;WANG Naidong

作者机构：湖南农业大学动物医学院、兽用蛋白质工程疫苗湖南省重点实验室、兽用疫苗逆向创制湖南省工程研究中心长沙410128 湖南农业大学动物医学院长沙410128 

出 版 物：《畜牧兽医学报》 (ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA)

年 卷 期：2024年第55卷第12期

页      面：5751-5761页

核心收录：

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：湖南省自然科学基金面上项目(2022JJ30298) 湖南省技术攻关“揭榜挂帅”项目(2021NK1030) 湖南省大学生创新创业训练计划一般项目(S202310537036) 

主　　题：PCV2 Capsid Lck SH3结构域 病毒复制 

摘      要：为了鉴定猪圆环病毒2型(PCV2)侵染细胞建立感染的重要宿主因子,本文分析在PK-15细胞中猪淋巴细胞特异性酪氨酸激酶Lck表达及活性对PCV2感染复制的影响,确定Lck是调控PCV2感染复制的新靶点。首先,本研究基于猪Lck结构特性和序列保守性分析,选取Lck SH3结构域为免疫原基因序列,利用原核表达目的蛋白制备小鼠抗猪Lck的多克隆抗体。然后,通过Western blot检测PCV2感染PK-15和3D4/21细胞后对Lck表达及活性的影响。最后,在PK-15细胞中利用瞬时转染过表达或Lck特异性抑制剂(A770041),通过Western blot和荧光定量PCR(RT-qPCR)检测猪Lck表达和磷酸化对PCV2复制的影响。结果显示,成功制备了鼠源性抗猪Lck的多克隆抗体。在PCV2感染PK-15和3D4/21细胞早期阶段,Lck表达水平未见明显变化,但Lck磷酸化水平显著上调。过表达Lck可显著上调PCV2 Cap蛋白表达及病毒拷贝数,而采用A770041抑制Lck磷酸化水平后,可显著下调PCV2 Cap蛋白表达、病毒拷贝数和病毒滴度,这些结果表明Lck正调控PCV2的感染复制,为发现PCV2感染的新分子机制奠定重要基础。