纳米颗粒展示猪圆环病毒3型Cap抗原表位的免疫效果评价

作     者：李欢欢 梁严予 岳亚男 刘亚婷 白小飞 陈赵媛 王彦伟 黄玉欣 逄文强 田克恭 LI Huanhuan;LIANG Yanyu;YUE Ya'nan;LIU Yating;BAI Xiaofei;CHEN Zhaoyuan;WANG Yanwei;HUANG Yuxin;PANG Wenqiang;TIAN Kegong

作者机构：国家兽用药品工程技术研究中心河南洛阳471000 普莱柯生物工程股份有限公司河南洛阳471000 

出 版 物：《中国兽医杂志》 (Chinese Journal of Veterinary Medicine)

年 卷 期：2024年第60卷第7期

页      面：1-8页

学科分类：090603[农学-临床兽医学] 07[理学] 070205[理学-凝聚态物理] 08[工学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 080501[工学-材料物理与化学] 0805[工学-材料科学与工程（可授工学、理学学位）] 0702[理学-物理学] 

基　　金：郑洛新国家自主创新示范区创新引领型产业集群专项(201200211200) 

主　　题：猪圆环病毒3型(PCV3) 表位筛选 纳米颗粒 

摘      要：为了验证纳米颗粒展示圆环病毒3型(PCV3)衣壳蛋白(Cap)串联表位的免疫效果,本试验通过多肽的点杂交和酶联免疫斑点法(ELISPOT)筛选B细胞表位和T细胞表位,通过SpyCatcher/SpyTag(SpyCatcher和SpyTag均为纤维连接蛋白FbaB的结构域,可自发形成异肽键)将表位串联并展示于E2pCD(纳米颗粒展示平台)表面,应用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和透射电子显微镜(TEM)分别检测蛋白的表达情况和颗粒组装情况,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)和流式细胞术分别检测纳米颗粒展示PCV3 Cap抗原表位免疫后猪血清PCV3抗体水平和外周血T淋巴细胞增殖水平。结果显示,共筛选出3个B细胞表位[P10:73~87aa(ETAISFEYYKILKMK)、P21:161~175aa(QSLFFFSRPTPWLNT)、P26:201~214aa(YGTKEVWIRYKSVL)]和3个T细胞表位[P20:153~167aa(GTTSAHPGQSLFFFS)、P21:161~175aa(QSLFFFSRPTPWLNT)、P24:185~199aa(LLWSIYVPEKTGMTD)]。SDS-PAGE检测结果显示,SpyCatcher-E2pCD、PCV3 Cap(P10-P20~P26)-SpyTag和SpyCatcher-E2pCD-PCV3 Cap(P10-P20~P26)-SpyTag分子量分别为40、16和55kDa。通过TEM可以检测到SpyCatcher-E2pCD和SpyCatcher-E2pCD-PCV3 Cap(P10-P20~P26)-SpyTag均形成直径约22 nm的纳米颗粒。免疫效果评价结果显示,免疫后21 d时,SpyCatcher-E2pCD-PCV3 Cap(P10-P20~P26)-SpyTag免疫猪产生的特异性抗体水平以及CD4^(+)、CD8^(+)和CD4^(+)CD8^(+)淋巴细胞比例均极显著高于PCV3 Cap(P10-P20~P26)-SpyTag(P0.001)。结果表明,通过SpyCatcher-E2pCD展示PCV3 Cap串联表位具有较好的免疫效果,可以为PCV3候选疫苗的研制提供借鉴。