碳酸酐酶9对低氧诱导未足月胎儿视网膜微血管内皮细胞增殖影响的研究

作     者：罗先琼 范弯弯 王宁 陈娟 马健 Luo Xianqiong;Fan Wanwan;Wang Ning;Chen Juan;Ma Jian

作者机构：广东省妇幼保健院遗传代谢与内分泌科广州511442 广州医科大学研究生院广州510180 广东省妇幼保健院转化医学中心广州511442 

出 版 物：《中华新生儿科杂志（中英文）》 (Chinese Journal of Neonatology)

年 卷 期：2024年第39卷第1期

页      面：38-44页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100211[医学-妇产科学] 10[医学] 

基　　金：广东省自然科学基金项目(2019A1515011417) 广东省高水平医院建设专项(ynkt2021-2216) 

主　　题：早产儿视网膜病 碳酸酐酶9 视网膜微血管内皮细胞 低氧 细胞增殖 

摘      要：目的探讨碳酸酐酶9(carbonic anhydrase 9,CA9)对低氧诱导未足月胎儿视网膜微血管内皮细胞(retinal microvascular endothelial cell,RMEC)增殖的影响。方法获取广东省妇幼保健院自然流产未足月胎儿眼球,分离视网膜并得到RMEC,使用CD34进行内皮细胞鉴定。将得到的胎儿RMEC及购买的成人RMEC置于常氧及低氧培养箱(1%O_(2)+5%CO_(2)+94%N2)培养,使用实时荧光定量聚合酶链反应及蛋白质印迹法检测CA9的差异表达。使用小干扰RNA技术敲降CA9基因后,CCK-8法检测细胞增殖情况,加入CA9抑制剂U-104后CCK-8法检测细胞活率。结果成功提取原代RMEC,第三代细胞CD34免疫荧光染色阳性细胞计数近100%。未足月胎儿及成人RMEC低氧组CA9 mRNA表达量均高于常氧组(胎儿67.80±10.31比1.00±0.04,P0.001;成人1.72±0.22比1.00±0.02,P=0.014);蛋白质印迹法检测可见未足月胎儿RMEC低氧组CA9表达量明显升高,与CA9 mRNA表达量相对应。在未足月胎儿RMEC转染siCA920 nM时,敲降效率可达95%(P0.001)。CCK-8法检测敲降CA9基因48 h后对未足月胎儿RMEC增殖的影响,可见siCA9组OD值低于阴性对照siNC组(0.57±0.05比0.90±0.03,P0.001)。加入100μM CA9抑制剂U-104,低氧+100μM U-104组未足月胎儿RMEC细胞活率低于低氧组(99.16%±3.82%比119.10%±1.72%,P=0.002)。结论在低氧诱导模型中,CA9在成人及未足月胎儿的RMEC表达不同,抑制CA9可抑制未足月胎儿RMEC增殖。