猪肠病毒G型3C蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

作     者：罗允燕 黄诗婷 曾德平 洪大林 米雪 陈樱 韦祖樟 黄伟坚 欧阳康 LUO Yun-yan;HUANG Shi-ting;ZENG De-ping;HONG Da-lin;MI Xue;CHEN Ying;WEI Zu-zhang;HUANG Wei-jian;OUYANG Kang

作者机构：广西大学动物科学技术学院动物疫病预防与控制重点实验室广西南宁530005 广西壮族自治区兽用生物制品工程研究中心广西南宁530005 广西畜禽繁育与疾病防控重点实验室广西南宁530005 

出 版 物：《中国兽医科学》 (Chinese Veterinary Science)

年 卷 期：2023年第53卷第1期

页      面：71-77页

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：广西自然科学基金资助项目(2021GXNSFAA196067) 大学生创新创业训练计划项目(202210593870) 广西兽医生物技术重点实验室开放基金项目(22-035-32-B-03) 

主　　题：猪肠病毒G型 3C蛋白 原核表达 多克隆抗体 

摘      要：为制备猪肠病毒G型(EV-G)非结构蛋白3C的多克隆抗体,本研究参考EV-G分离株CH/17GXQZ/2017的序列设计带有酶切位点的引物扩增3C全基因,通过RT-PCR扩增,将其克隆至原核表达载体pET-32a,构建重组质粒pET-32a-EVG-3C。将重组质粒转化至BL21(DE3)细胞中,通过对诱导条件(诱导温度、IPTG浓度以及诱导时间)的筛选,获得重组3C蛋白的最优表达条件。将表达纯化后的3C蛋白通过皮下注射的方式免疫新西兰大白兔,制备3C蛋白多克隆抗体,通过间接ELISA测定效价,并利用间接免疫荧光试验及Western-blot进行验证。结果显示,表达的3C蛋白主要以包涵体的形式存在,相对分子质量约为38.8 ku;经间接ELISA方法测定,制备的EV-G兔抗效价达到1∶8192000;间接免疫荧光试验和Western-blot结果显示,制备的多克隆抗体能与EV-G特异性结合,具有良好的免疫原性和反应性。本研究为EV-G的诊断以及3C蛋白的功能研究提供了参考。