猪德尔塔冠状病毒N蛋白单克隆抗体2D7的制备与生物学特性鉴定

作     者：张宁 赵平 刘思雨 赵硕 陈忠伟 何颖 欧阳康 卢冰霞 蒋家霞 郭旋 林昌华 赵武 黄伟坚 秦毅斌 赵凌 

作者机构：广西职业技术学院 广西桂垦牧业有限公司 广西大学动物科学技术学院 广西壮族自治区兽医研究所/广西兽医生物技术重点实验室/农业农村部中国(广西)-东盟跨境动物疫病防控重点实验室 华中农业大学农业微生物学国家重点实验室 广西农垦永新畜牧集团西江有限公司 广西农垦永新畜牧集团金光有限公司 

出 版 物：《中国动物传染病学报》 (Chinese Journal of Animal Infectious Diseases)

年 卷 期：2022年

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：南宁市优秀青年科技人才项目(RC20190102) 南宁市科学研究与技术开发计划项目(20222043) 贵港市科学研究与技术开发计划项目(桂科计2117003) 玉林市科学研究与技术开发计划项目(玉市科20220515,20220516) 广西农业科技自筹经费项目(Z202223,Z202225) 广西兽医生物技术重点实验室开放基金(22-035-32-B-01,22-035-32-B-02) 广西基本科研业务费专项(桂科专项22-4,桂科专项22-3) 桂职院133号221103 

主　　题：猪德尔塔冠状病毒 N蛋白 单克隆抗体 

摘      要：为获得猪德尔塔冠状病毒(porcine deltacoronavirus，PDCoV)N蛋白的特异性单克隆抗体(Monoclonal antibody，McAb)，本研究利用RT-PCR方法扩增PDCoV-N基因，构建表达质粒，转化BL21感受态细胞获得重组大肠杆菌，诱导表达后获得PDCoV-N重组蛋白，将其进行纯化后再免疫小鼠，制备针对PDCoV-N蛋白的McAb，并进行了抗体的效价测定、免疫荧光(IFA)、Western blotting、亚类的鉴定、McAb特异性的鉴定。结果，成功构建pCold II-PDCoV-N重组原核表达质粒，SDS-PAGE显示重组N蛋白成功表达，分子质量约为38 kDa；经小鼠免疫、细胞融合、亚克隆筛选获得一株分泌PDCoV-N蛋白抗体的阳性杂交瘤细胞株；制备的腹水经间接ELISA方法测定抗体的效价为2.048×10。IFA、Western blotting试验表明该McAb可以与PDCoV-N蛋白及全病毒特异性结合，亚类鉴定其亚型为IgG1，轻链为κ链。该McAb只与PDCoV反应，而与其它猪肠道病毒无交叉反应，表明本研究制备的McAb具有良好的特异性。本研究成功制备了PDCoV-N蛋白的McAb，为进一步研究PDCoV的生物学特性和诊断试剂的开发提供技术支持。