检索结果-南通市图书馆

绵羊源哺乳动物正呼肠孤病毒的分离鉴定及全基因组分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

畜牧兽医学报 2024年

作者：李霞何艺蔡旭航罗润波郭容利索朗斯珠毛立李彬西藏农牧学院江苏省农业科学院兽医研究所/农业农村部兽用生物制品工程技术重点实验室阜康市城关镇农业(畜牧业)发展服务中心西北农林科技大学

为了解绵羊源哺乳动物正呼肠孤病毒（mammalian orthoreovirus， MRV）的生物学特性及全基因组特征，本研究从绵羊腹泻病料中分离了一株MRV，命名为MRV-XJ23株，经RT-PCR、电镜观察和间接免疫荧光试验（IFA）鉴定后，扩增病毒全基因组... 详细信息

为了解绵羊源哺乳动物正呼肠孤病毒（mammalian orthoreovirus， MRV）的生物学特性及全基因组特征，本研究从绵羊腹泻病料中分离了一株MRV，命名为MRV-XJ23株，经RT-PCR、电镜观察和间接免疫荧光试验（IFA）鉴定后，扩增病毒全基因组进行同源性及遗传进化分析。研究结果表明，MRV-XJ23分离株可在MDBK细胞稳定传代，产生特异的细胞病变，病毒滴度为106TCID50·mL-1。MRV感染细胞经IFA检测可观察到特异荧光，电镜可观察到直径约70 nm的无囊膜病毒粒子。经RT-PCR扩增和测序获得MRV全基因组，该毒株共10个节段，全长23 534 bp。序列对比及遗传进化分析结果显示，MRV-XJ23株为MRV-1血清型，其在韩国蝙蝠源BatMRV2/SNU1/Korea/2021毒株基础上，与日本的人源Homo sapiens/Osaka2005株L3、M2、S4基因、印度牛源C/bovine/Indiana/MRV00304/2014株S1基因重配，形成一株新的MRV。本研究首次从腹泻绵羊肛拭子中分离获得一株MRV-1型重配毒株，证明绵羊可感染MRV，拓宽了病毒感染宿主谱，且感染毒株为蝙蝠源、人源和牛源MRV重配毒株，证明这些毒株跨物种感染后发生了复杂的重配。本研究揭示了MRV在各物种中循环传播对公共卫生的风险，提升了深入研究MRV在绵羊乃至家畜中的流行病学、重配规律和致病性的重要性。

关键词：哺乳动物正呼肠孤病毒绵羊分离鉴定重配进化分析

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

江苏省羊肠道病毒感染的流行病学调查

中国兽医学报 2024年第6期44卷 1140-1147页

作者：蔡旭航李文良李基棕李思远毛立许信刚李彬西北农林科技大学动物医学院陕西杨凌712100 江苏省农业科学院兽医研究所农业农村部兽用生物制品工程技术重点实验室江苏南京210014

羊肠道病毒(caprine enterovirus,CEV)是新发现的感染山羊的重要腹泻病病原之一。为了解CEV在江苏省部分地区羊群中的流行情况,从江苏省8县市采集了410份羊粪便样品,包括腹泻样品212份、非腹泻样品198份。通过RT-PCR方法检出CEV阳性127... 详细信息

羊肠道病毒(caprine enterovirus,CEV)是新发现的感染山羊的重要腹泻病病原之一。为了解CEV在江苏省部分地区羊群中的流行情况,从江苏省8县市采集了410份羊粪便样品,包括腹泻样品212份、非腹泻样品198份。通过RT-PCR方法检出CEV阳性127份,各地阳性率差异较大,分布在12.50%~62.50%,总阳性率则高达30.98%,分析腹泻和非腹泻样品阳性率,发现CEV是导致山羊腹泻的重要病原之一。对获得的CEV毒株VP1序列同源性和遗传进化分析表明,江苏省流行的CEV亚型包括EV-G5、G7、G21、G22和G23,其中G21~G23均为新的亚型。同源性分析表明,检测毒株的5′-UTR、VP1和2AB序列与CEV-JL14等国内参考毒株的同源性分别为71.8%~95.8%、56.9%~95.0%和77.9%~98.4%,其中HaiMen-SJH株的5′-UTR和2AB序列与其他参考序列差异较大,在遗传进化关系中形成独立分支。根据流调结果,CEV感染在江苏省各地区广泛存在,是造成山羊腹泻的重要病因之一,不同地区流行毒株及流行情况均存在差异。本研究丰富了我国CEV的流行病学资料,为针对性地防控羊新发肠道病毒感染提供了理论依据。

关键词：羊肠道病毒腹泻流行病学调查进化分析

竹鼠源产纤维素酶枯草芽孢杆菌的生物学特性研究及安全性初步评价

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国畜牧杂志 2024年第3期60卷 201-206页

作者：陈童锦悦覃绍敏韦珏刘金凤陈凤莲许力士梁晶兰干球吴健敏广西大学动物科学技术学院广西南宁530004 广西壮族自治区兽医研究所农业农村部中国(广西)-东盟跨境动物疫病防控重点实验室广西兽医生物技术重点实验室广西南宁530001

本试验旨在对竹鼠肠内容物中分离出的3株产纤维素酶枯草芽孢杆菌进行生物学特性研究和安全性评价。对3株受试菌进行生长曲线测定、抗生素敏感性试验、耐药基因检测、小鼠体内安全性试验以及耐酸、耐胆盐、自凝聚性、疏水性等特性测定。... 详细信息

本试验旨在对竹鼠肠内容物中分离出的3株产纤维素酶枯草芽孢杆菌进行生物学特性研究和安全性评价。对3株受试菌进行生长曲线测定、抗生素敏感性试验、耐药基因检测、小鼠体内安全性试验以及耐酸、耐胆盐、自凝聚性、疏水性等特性测定。结果表明:(1) GL-4、GL-5、GL-8 3株受试菌均生长快,1.5 h即可进入对数生长期、5 h即可达到最大生长量;(2)抗逆性强:3株受试菌在pH2.5的条件下存活率均达到65%以上、在胆盐浓度0.3%和0.5%的环境下仍能继续存活增殖;(3)自凝聚及疏水能力好:孵育到24 h,3株菌的自凝聚率均达到85%以上,GL-5和GL-8的疏水率均高于40%;(4) 3株受试菌对大部分抗生素敏感,对小鼠无毒副作用。GL-4、GL-5、GL-8 3株受试菌均具有优良的生物学特性,且安全性好,可作为畜禽微生态制剂良好的益生菌候选菌株。

关键词：枯草芽孢杆菌生物学特性安全性评价

同方期刊数据库博看期刊评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

纤维二糖水解酶在乳酸乳球菌中的表达

云南畜牧兽医 2024年第1期 1-4页

作者：黄凯何启杰陈樱欧阳康黄伟坚彭昊韦祖樟李军广西兽医研究所广西兽医生物技术重点实验室广西南宁530005 广西大学动物科学技术学院动物传染病与分子免疫学实验室广西南宁530005 农业农村部中国(广西)-东盟跨境动物疫病防控重点实验室广西南宁530005

为在乳酸乳球菌中表达纤维二糖水解酶II(CBH II)基因,对绿色木霉(***)CBH II基因序列进行密码子优化和合成,通过PCR及T4 DNA连接酶将人工合成的序列插入到表达载体pNZ8148中,获得重组质粒pNZ8148-CBH II,重组质粒经双酶切及测序鉴定正确... 详细信息

为在乳酸乳球菌中表达纤维二糖水解酶II(CBH II)基因,对绿色木霉(***)CBH II基因序列进行密码子优化和合成,通过PCR及T4 DNA连接酶将人工合成的序列插入到表达载体pNZ8148中,获得重组质粒pNZ8148-CBH II,重组质粒经双酶切及测序鉴定正确后,将正确的重组质粒通过电击转化进入乳酸菌NZ3900感受态细胞,通过选择性抗生素氯霉素筛选阳性克隆,放大培养后使用终浓度为20 ng/mL的Nisin进行诱导表达,诱导后的菌液经SDS-PAGE鉴定,有符合预期大小的条带,说明CBH II基因在乳酸乳球菌NZ3900中表达。研究为乳酸乳球菌的改造及开发临床应用奠定基础。

关键词：纤维二糖水解酶克隆乳酸乳球菌表达

猪急性腹泻综合征冠状病毒S蛋白多克隆抗体的制备及在检测该病毒感染中的应用

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国预防兽医学报 2024年第5期46卷 499-504页

作者：刘大凯韩郁茹张记宇张燎原冯廷帅杨小曼曾苗苗时洪艳秦毅斌石达冯力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物疫病防控全国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069 广西兽医研究所广西兽医生物技术重点实验室广西南宁530001

为制备猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)纤突蛋白(S)的多克隆抗体(PAb),本研究经PCR扩增SADS-Co V S蛋白S1亚基C端结构域(S1-CTD)基因片段(384 bp),并将其克隆至原核表达载体p GEX-6p-1中,构建重组质粒p GEX-6p-1-S1-CTD,经双酶切和... 详细信息

为制备猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)纤突蛋白(S)的多克隆抗体(PAb),本研究经PCR扩增SADS-Co V S蛋白S1亚基C端结构域(S1-CTD)基因片段(384 bp),并将其克隆至原核表达载体p GEX-6p-1中,构建重组质粒p GEX-6p-1-S1-CTD,经双酶切和测序鉴定正确后,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,利用IPTG诱导表达,通过western blot鉴定重组S1-CTD蛋白(rS1-CTD)的表达及反应原性。结果显示,r S1-CTD以包涵体的形式表达,在40 ku处出现特异性条带。诱导表达后的r S1-CTD经不同浓度尿素重悬并超声离心,SDS-PAGE检测后切胶纯化,得到纯化的重组蛋白。利用BCA试剂盒测得蛋白的浓度为33μg/m L。将该重组蛋白乳化后经3次免疫新西兰大白兔,并在3免一周后采血,分离血清获得S1-CTD蛋白PAb。将SADS-Co V感染Vero E6细胞24 h后,以获得的兔PAb为一抗,分别采用western blot和间接免疫荧光试验(IFA)检测该PAb的反应原性。Western blot结果显示,在约250 ku处出现特异性条带,而阴性对照组无该条带;IFA结果显示,SADS-Co V感染的细胞中出现绿色荧光,而阴性对照细胞无绿色荧光。将SADS-Co V感染仔猪的回肠组织制备病理切片,以制备的PAb为一抗,通过免疫组织化学(IHC)检测SADS-Co V的抗原。结果显示,该组织切片中出现棕色阳性信号,而阴性对照仔猪回肠组织切片则无该棕色信号。表明该PAb可与感染SADS-Co V的仔猪回肠组织中的相应抗原发生特异性免疫反应。综上所述,本实验制备的S1-CTD蛋白PAb具有良好的反应原性和免疫原性,可以用于western blot、IFA、IHC检测体内外SADS-Co V的感染,为后续SADS-Co V检测方法的建立及S蛋白生物学功能的研究奠定基础。

关键词：猪急性腹泻综合征冠状病毒 S蛋白原核表达多克隆抗体初步应用

猪急性腹泻综合征冠状病毒诱导细胞自噬并增强病毒复制的研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国预防兽医学报 2024年第1期46卷 61-69页

作者：曾苗苗刘大凯张记宇张燎原冯廷帅杨小曼时洪艳张鑫陈建飞石达冯力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室/猪消化道传染病创新团队黑龙江哈尔滨150069

为研究猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)感染细胞是否诱导自噬及自噬对病毒复制的影响,本研究将SADS-CoV(MOI 0.1)接种Vero E6细胞培养36 h后,经透射电子显微镜观察可见,SADS-CoV感染的细胞中出现了包裹胞浆的自噬体样双层膜结构,证... 详细信息

为研究猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)感染细胞是否诱导自噬及自噬对病毒复制的影响,本研究将SADS-CoV(MOI 0.1)接种Vero E6细胞培养36 h后,经透射电子显微镜观察可见,SADS-CoV感染的细胞中出现了包裹胞浆的自噬体样双层膜结构,证实SADS-CoV可以诱导Vero E6细胞发生自噬。构建pEGFP-LC3的真核表达质粒并经双酶切及测序鉴定正确后转染Vero E6细胞,24 h后以SADS-CoV感染,24 h后经激光共聚焦显微镜观察可见,与阴性对照组细胞相比,感染SADS-CoV的细胞出现绿色荧光的点状聚集。进一步将SADS-CoV(MOI 0.1)感染Vero E6细胞不同时间后通过western blot检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ和p62表达水平的变化,结果显示,与阴性对照组相比,SADS-CoV感染组LC3-Ⅱ的表达水平升高,LC3-Ⅱ/GAPDH比值呈上升趋势,而p62蛋白表达水平则显著降低(P<0.05),表明SADS-CoV感染能够诱导Vero E6细胞产生完整的自噬应答。为了探究自噬对病毒复制的影响,本研究分别采用自噬抑制剂3-MA和自噬诱导剂Rapamycin处理Vero E6细胞后以SADS-CoV感染,于感染后不同时间收获细胞,通过western blot和病毒滴度(TCID_(50))测定检测SADS-CoV N蛋白表达水平的变化。结果显示,与仅感染病毒的对照组相比,采用3-MA处理Vero E6细胞后SADS-CoV N蛋白的表达水平及TCID_(50)均显著降低(P<0.05),而采用Rapamycin处理后SADS-CoV N蛋白的表达水平及TCID_(50)则均显著升高(P<0.05)。针对ATG5基因设计3条特异性的ATG5 si RNA(siATG5-1/2/3),将干扰效率较好的siATG5-1转染Vero E6细胞后再以SADS-CoV感染,24 h后检测病毒滴度并利用western blot检测SADS-CoV N蛋白表达水平的变化。结果显示,与未转染siATG5的3组阴性细胞相比,转染细胞中SADS-CoV N蛋白的表达水平及病毒滴度均显著降低(P<0.05)。本研究首次表明SADS-CoV感染可以诱导宿主细胞自噬并促进病毒的复制,该结果为深入研究SADS-CoV感染与其致病机理以及防控该病毒的感染奠定了基础。

关键词：猪急性腹泻综合征冠状病毒自噬病毒复制 LC3-Ⅱ

猪急性腹泻综合征冠状病毒S1蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国预防兽医学报 2024年第6期46卷 608-613页

作者：杨小曼时洪艳张燎原张鑫张记宇刘大凯冯廷帅曾苗苗陈建飞石达冯力中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室/猪消化道传染病创新团队黑龙江哈尔滨150069

为建立猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)S1蛋白抗体的间接ELISA检测方法,本研究通过构建重组真核分泌型表达质粒p CAGGS-S1-His并转染HEK293F悬浮细胞进行可溶性表达S1蛋白。转染重组质粒5 d后的细胞上清利用HisTrapTMExcel亲和层析... 详细信息

为建立猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)S1蛋白抗体的间接ELISA检测方法,本研究通过构建重组真核分泌型表达质粒p CAGGS-S1-His并转染HEK293F悬浮细胞进行可溶性表达S1蛋白。转染重组质粒5 d后的细胞上清利用HisTrapTMExcel亲和层析柱纯化,浓缩后的蛋白经SDS-PAGE、western blot鉴定显示获得了分子量约为130 ku且大于理论大小的重组S1蛋白,表明该蛋白为分泌表达且具有良好的翻译后修饰。利用获得的重组S1蛋白作为包被抗原,通过优化反应条件,初步建立了SADS-CoV S1蛋白抗体的间接ELISA检测方法。该方法与猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)、猪轮状病毒(PoRV)和猪圆环病毒2型(PCV2)阳性血清均无交叉反应,仅与SADS-CoV阳性血清反应,表明该方法特异性较强;该方法检测SADS-CoV阳性血清,当稀释至1:3 200时仍为阳性,表明该方法具有较高的敏感性;对4份阳性血清的批内和批间重复性试验的变异系数均小于10%,表明该方法具有良好的重复性和稳定性;利用该方法和间接免疫荧光试验(IFA)对50份临床样品检测,结果显示该间接ELISA检测到9份阳性样品,41份阴性样品;IFA检出5份阳性样品,45份阴性样品,二者的总符合率为92%。综上表明,本研究建立的间接ELISA检测方法能够特异、灵敏地检测SADS-CoV S1蛋白抗体,可以用于SADS-CoV灭活疫苗的免疫效果评价以及该病原的血清学流行病学调查和免疫水平监测,为SADS-CoV所致疫病的鉴别诊断和防控奠定基础。

关键词：猪急性腹泻综合征冠状病毒 S1蛋白间接ELISA方法抗体检测

新型阿卡斑病毒NSs蛋白生物信息学分析及多克隆抗体制备

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国畜牧兽医 2024年第5期51卷 2015-2026页

作者：蔡畅陈赫威宋瑞鹏覃绍敏刘金凤秦树英孙倩陈童锦悦欧长波刘兴友马玲吴健敏广西壮族自治区兽医研究所广西兽医生物技术重点实验室南宁530001 河南科技学院动物科技学院新乡453003 农业农村部(广西)-东盟跨境动物疫病防控重点实验室南宁530001 广西大学动物科学技术学院南宁530004 新乡学院生命科学与基础医学学院新乡453003

【目的】对新型阿卡斑病毒(Akabane virus,AKAV)非结构蛋白(non-structura,NSs)进行生物信息学分析,进而制备抗多克隆抗体,为新型AKAV检测及功能研究提供必要材料。【方法】使用蛋白生物信息学在线分析网站,对新型AKAV NSs蛋白进行系统... 详细信息

【目的】对新型阿卡斑病毒(Akabane virus,AKAV)非结构蛋白(non-structura,NSs)进行生物信息学分析,进而制备抗多克隆抗体,为新型AKAV检测及功能研究提供必要材料。【方法】使用蛋白生物信息学在线分析网站,对新型AKAV NSs蛋白进行系统分析。克隆NSs全长基因,利用大肠杆菌表达系统表达NSs重组蛋白,优化蛋白诱导条件并分析重组蛋白的可溶性;收获破碎菌体,经8 mol/L尿素变性、Ni 2+-NTA亲和层析纯化、透析及浓缩后进行SDS-PAGE、Western blotting鉴定;将纯化的重组NSs蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体;应用间接ELISA、Western blotting和间接免疫荧光试验(IFA)测定多克隆抗体效价及特异反应性。【结果】生物信息学分析表明,NSs蛋白由91个氨基酸残基构成,等电点为12.10,属于碱性蛋白,不稳定指数约为79.04,平均亲水性为指数为―0.059,为不稳定的亲水蛋白;无跨膜区和信号肽,属于非分泌蛋白。试验成功构建了NSs蛋白原核表达载体pET-32a-NSs,经SDS-PAGE和Western blotting鉴定显示,成功表达重组NSs蛋白,分子质量为29.3 ku,主要以包涵体形式存在,与生物信息学分析结果一致;制备的多克隆抗体效价可达1∶16384000,Western blotting和IFA结果表明所制备抗体能够与NSs蛋白发生特异性反应,具有较好的特异性。【结论】试验成功获得纯化的新型AKAV NSs蛋白,该蛋白具有较好的免疫原性;制备获得效价高、特异性好的多克隆抗体,为后续新型AKAV疫苗开发、检测及NSs蛋白功能研究提供了基础。

关键词：新型阿卡斑病毒(AKAV) NSs蛋白生物信息学原核表达多克隆抗体

维普期刊数据库博看期刊

适用于RPA-LFD技术检测对虾肝胰腺DNA样品的快速制备试剂研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

渔业科学进展 2024年第4期45卷 166-174页

作者：姚梦丽白昌明王崇明辛鲁生中国水产科学研究院黄海水产研究所青岛海洋科技中心海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室农业农村部海水养殖病害防治重点实验室青岛市海水养殖流行病学与生物安保重点实验室山东青岛266071 广西农产资源化学与生物技术重点实验室广西玉林537000 中国海洋大学水产学院山东青岛266003

为摆脱常规核酸样品提取步骤繁琐、耗时等问题,实现真正的现场快速检测,本研究致力于研制和优化一种对虾肝胰腺中DNA样品的核酸快速制备试剂,即核酸释放剂,适用于重组酶聚合酶扩增技术(recombinasepolymeraseamplication,RPA)与侧向流... 详细信息

为摆脱常规核酸样品提取步骤繁琐、耗时等问题,实现真正的现场快速检测,本研究致力于研制和优化一种对虾肝胰腺中DNA样品的核酸快速制备试剂,即核酸释放剂,适用于重组酶聚合酶扩增技术(recombinasepolymeraseamplication,RPA)与侧向流层析试纸条技术(lateralflow dipstick, LFD)结合的RPA-LFD技术检测。实验优选20~100 mmol/L Tris-HCl、50~250 mmol/L KCl、0.01%~0.10%十二烷基硫酸锂(LDS)、0.5%~2.0%聚乙二醇辛基苯基醚(TritonX-100)、1~5mmol/L乙二胺四乙酸二钠(EGTA2Na)、0.5~5.0 mmol/L牛血清白蛋白(BSA)、1~5 mg/mL明胶、0.01%~0.10%海藻糖、1%~5%甜菜碱等配制成核酸释放剂。以对虾肝肠孢虫(Enterocytozoonhepatopenaei,EHP)阳性样本和阴性样本对核酸释放剂各组分间配比进行优化,采集绿豆大小的对虾肝胰腺组织加入100μL核酸释放剂,100℃加热3 min,取上清液进行RPA-LFD反应,测试各组分不同浓度配比;并以对虾急性肝胰腺坏死病(acute hepatopancreatic necrosis disease, AHPND)阳性样品及阴性样品作为检测模板对优化后核酸释放剂再次验证。结果显示,核酸释放剂的各组分最佳配比为100 mmol/L Tris-HCl、100 mmol/L KCl、0.02%LDS、0.5%Triton X-100、1 mmol/L EGTA2Na、0.05%海藻糖、1 mg/mL明胶、0.5 mmol/L BSA、2%甜菜碱。RPA-LFD方法检测可显著区分阳性和阴性样品。本研究优化的核酸释放剂,适用于RPA-LFD检测对虾肝胰腺病原DNA样品的制备,有效避免了常规DNA样品繁琐、耗时的制备步骤,极大地提高了核酸水平病原检测效率。

关键词：核酸释放剂重组酶聚合酶扩增(RPA) 侧流层析试纸条(LFD) 虾肝胰腺病原快速检测

维普期刊数据库博看期刊