人乳头瘤病毒16型L1-E7c嵌合基因的构建表达及免疫学效应的研究

作     者：刘朝奇 许雪梅 徐建青 李昆 司静懿 刘世德 LIU Chao-qi;XU Xue-mei;XU Jian-qing;LI Kun;SI Jing-yi;LIU Shi-de

作者机构：三峡大学分子生物学研究所湖北宜昌443003 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所北京100005 

出 版 物：《免疫学杂志》 (Immunological Journal)

年 卷 期：2008年第24卷第3期

页      面：254-258页

核心收录：

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(39680011) 

主　　题：人乳头瘤病毒16型 L1 E7 蛋白表达 免疫原性 

摘      要：目的构建人乳头瘤病毒16型(HPV16) L1-E7c嵌合基因并表达融合蛋白,以期获得防治HPV16感染及相关肿瘤的疫苗。方法以HPV16型的中国人野毒株为模板,利用PCR克隆技术制备HPV16 L1-E7c嵌合基因,并转入原核表达载体pET28a(+),获得pET28a(+)-L1-E7c表达质粒。以Western blot方法鉴定融合蛋白与HPV16L1和E7抗体的特异性结合。应用蛋白纯化仪纯化HPV16 L1-E7c融合蛋白,经过复性后,电镜观察病毒样颗粒(cVLP)的形态结构。纯化的蛋白免疫动物,测定疫苗抗肿瘤的细胞免疫及抗体产生情况。结果经过序列分析和酶切鉴定表明成功构建了HPV16 L1-E7c嵌合基因,并在大肠杆菌中可高效表达L1-E7c融合蛋白。此融合蛋白具有HPV16 L1和E7的抗原性,纯化的蛋白复性后可形成嵌合病毒样颗粒(cVLP),纯化的蛋白免疫动物后,产生特异性细胞和体液免疫反应,具有抗肿瘤活性。结论构建的嵌合基因HPV16 L1-E7c可有效表达HPV16 L1-E7c重组蛋白并形成cVLP。此蛋白在动物实验中具有疫苗的免疫保护作用,为HPV16疫苗的研究奠定了实验基础。