人白介素24融合载体的构建、突变纠正和表达优化

作     者：范秋丽 宋德贵 FAN Qiuli;SONG Degui

作者机构：广西师范大学生命科学学院广西桂林541006 

出 版 物：《广西师范大学学报（自然科学版）》 (Journal of Guangxi Normal University:Natural Science Edition)

年 卷 期：2016年第34卷第1期

页      面：150-155页

学科分类：0710[理学-生物学] 071010[理学-生物化学与分子生物学] 081704[工学-应用化学] 07[理学] 08[工学] 0817[工学-化学工程与技术] 

基　　金："桂科重"研究项目(14121003-3-1) 

主　　题：大肠杆菌 人白介素24 原核表达 二次PCR 融合蛋白 

摘      要：以武汉大学病毒学国家重点实验室保存的白介素24(IL-24)为模板,构建原核表达载体pET28a-IL-24,转化大肠杆菌DH5α,挑取单克隆,测序结果显示:在IL-24第18位A→G,21位C→T,412位G→A,18位和21位的突变没有使该位上的氨基酸发生改变,而412位的突变导致了该位点上的氨基酸发生改变——由丙氨酸A变为苏氨酸T。通过设计突变引物,二次PCR将其纠正,转化大肠杆菌BL21。通过改变诱导剂IPTG的浓度、诱导时间和诱导温度摸索最佳诱导条件,SDS-PAGE、Western blot检测显示有融合蛋白6hisIL-24表达。结果表明:通过二次PCR成功构建了IL-24原核表达载体,表达产物主要以包涵体的形式存在,最佳诱导温度为28℃,最佳诱导剂浓度为1mmol/L,最佳诱导时间是8h。