分子伴侣对白喉毒素无毒突变体CRM197重组蛋白在大肠杆菌中可溶性表达的促进作用

作     者：杨梦婷 李晓晓 林晨 刘明靓 陈叶梓 赵云 刘朝奇 Mengting Yang;Xiaoxiao Li;Chen Lin;Mingjing Liu;Yezi Chen;Yun Zhao;Chaoqi Liu

作者机构：三峡大学医学院肿瘤微环境与免疫治疗湖北省重点实验室湖北宜昌443002 三峡大学医学院湖北宜昌443002 

出 版 物：《生物工程学报》 (Chinese Journal of Biotechnology)

年 卷 期：2021年第37卷第4期

页      面：1368-1375页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 0831[工学-生物医学工程（可授工学、理学、医学学位）] 07[理学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 071007[理学-遗传学] 0836[工学-生物工程] 

基　　金：国家自然科学基金(Nos.81473461 81673675)资助。 

主　　题：白喉毒素突变体蛋白 原核表达 分子伴侣 可溶性蛋白 

摘      要：为了获得有活性的白喉毒素突变体蛋白(Cross-reactingmaterial197,CRM197),本研究利用分子伴侣pG-KJE8与重组质粒pET28a-CRM197在大肠杆菌原核表达系统中进行共表达,来促进目的蛋白的正确折叠,进而提高CRM197蛋白的可溶性表达。将质粒转化至大肠杆菌后并诱导其表达目的蛋白,再通过SDS-PAGE胶染色、Western blotting等技术对所得蛋白进行检测分析。结果发现:利用体外重组技术成功得到了pET28a-CRM197重组蛋白原核表达质粒,且CRM197重组蛋白在原核表达系统中主要以包涵体形式表达;通过探索和优化,确定了诱导蛋白的最佳浓度和温度,当加入终浓度为1.0 mmol/L IPTG、0.5 mg/mL L-阿拉伯糖、5.0 ng/mL四环素,在20℃条件下诱导16h时,目的蛋白的可溶性表达得到显著提高;可溶性表达的CRM197重组蛋白可以与CRM197一抗发生特异性结合,免疫反应性良好。因此,研究发现分子伴侣pG-KJE8可以促进CRM197重组蛋白在大肠杆菌中以可溶性形式表达,且能很好地与CRM197一抗发生特异性结合,证实CRM197重组蛋白具有良好的免疫反应性,为CRM197蛋白的工业化生产及应用奠定了一定的基础。