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2株溶藻弧菌烈性噬菌体的分离鉴定及其生物学特性

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水产学报 2022年第5期46卷 870-884页

作者：乔欢陈海徐旭凌丛郁刘墨何四龙费文斌黄杰胡怿林菲吉乐科生物科技有限公司

为寻找并丰富溶藻弧菌噬菌体资源，实验以溶藻弧菌VAHN1为宿主菌，采用双层平板法从海南虾塘水样及福建海产品样本中分离溶藻弧菌噬菌体。通过透射电镜、限制性内切酶及构建发育树等方法对所获溶藻弧菌噬菌体进行分类鉴定；同时分析其... 详细信息

为寻找并丰富溶藻弧菌噬菌体资源，实验以溶藻弧菌VAHN1为宿主菌，采用双层平板法从海南虾塘水样及福建海产品样本中分离溶藻弧菌噬菌体。通过透射电镜、限制性内切酶及构建发育树等方法对所获溶藻弧菌噬菌体进行分类鉴定；同时分析其生理生化性能。结果显示，本研究分离获得2株溶藻弧菌噬菌体VAP9与VAP21，其噬菌斑均清晰透亮，直径约1.5～2.0 mm。2株噬菌体核酸均为双链DNA，于透射电镜下可见其头部均呈正二十面体结构，2株噬菌体均属肌尾噬菌体科。噬菌体VAP9与VAP21对理化环境具有良好的耐受性；VAP9最适pH为6～8,VAP21最适pH为7～11;2株噬菌体可耐受通用杀菌浓度的过氧乙酸，且对氯仿与乙醚不敏感，同时对紫外线具有一定耐受性。2株噬菌体的最佳感染复数均为0.001，对供试溶藻弧菌的裂解率达95.2%，可裂解部分副溶血性弧菌，但无法裂解除溶藻弧菌与副溶血性弧菌外的弧菌属、葡萄球菌属、假单胞菌属等其他种属的供试细菌。噬菌体VAP9与VAP21可高效抑制溶藻弧菌VAHN1的生长，且2株噬菌体的混合制剂对溶藻弧菌的抑制效果优于单株噬菌体。将噬菌体VAP9及VAP21保守蛋白序列于NCBI数据库上比对，发现2株噬菌体与其他噬菌体间同源性较低，因此噬菌体VAP9及VAP21很可能为2株新发现的肌尾科噬菌体。

关键词：溶藻弧菌噬菌体分离生物学特性微生态抗菌剂

人源白细胞介素(h-IL2)基因克隆及原核表达的研究

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华北农学报 2011年第B12期26卷 5-8页

作者：刘钦松张丛丛刘孟刚许彤山东博奥克生物科技有限公司山东聊城252000

构建人源白介素(h-IL2)基因的表达载体,并尝试在原核细胞中诱导表达,以用于进一步重组蛋白纯化和抗体生产。以h-IL2基因为模板,采用PCR技术扩增h-IL2基因,连接到pMD-18T载体中构建克隆载体,转化到感受态DH5α,提取质粒PCR、双酶切验证... 详细信息

构建人源白介素(h-IL2)基因的表达载体,并尝试在原核细胞中诱导表达,以用于进一步重组蛋白纯化和抗体生产。以h-IL2基因为模板,采用PCR技术扩增h-IL2基因,连接到pMD-18T载体中构建克隆载体,转化到感受态DH5α,提取质粒PCR、双酶切验证连接成功,经DNA测序鉴定基因序列与GenBank数据库收录h-IL2基因(NM_000586.3)序列一致;再将h-IL2基因插入到pGEX-4T-1构建表达载体,转化至感受态BL21(DE3),筛选阳性克隆IPTG诱导。SDS-PAGE验证成功表达融合蛋白GST-IL2。

关键词：白细胞介素基因克隆原核表达

人乳头状瘤假病毒中和抗体滴度和ELISA法测定的小鼠血清抗体滴度的相关性研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2009年第11期29卷 1049-1054页

作者：雷建强沈琼张高峡上海泽润生物科技有限公司 201203

目的探讨两种不同的报告基因纽扣珊瑚绿色荧光蛋白（Zoanthus *** fluorescent protein，ZsGreen）和分泌性碱性磷酸酶（secreted alkaline phosphatase，SEAP）测量的人乳头状瘤假病毒中和滴度之间的相关性，以及中和滴度和抗体滴度的... 详细信息

目的探讨两种不同的报告基因纽扣珊瑚绿色荧光蛋白（Zoanthus *** fluorescent protein，ZsGreen）和分泌性碱性磷酸酶（secreted alkaline phosphatase，SEAP）测量的人乳头状瘤假病毒中和滴度之间的相关性，以及中和滴度和抗体滴度的相关性。方法将密码子优化的人乳头状瘤病毒（HPV）衣壳蛋白L1、12基因表达质粒和报告基因质粒共转染293FT细胞，48h后收集细胞裂解上清，柱层析纯化假病毒，对假病毒滴度进行测定。采集免疫过候选HPV疫苗和Gardasil疫苗的小鼠血清，测量血清的中和滴度和抗体滴度。结果经统计分析，这两种报告基因系统的假病毒检测的中和滴度结果高度相关（Spearman相关系数r=0．760），而且中和滴度和抗体滴度的相关度很高（Spearman相关系数r=0．577和0．741）。结论两种不同的报告基因ZsGreen和SEAP测量的HPV假病毒中和滴度之间，以及中和滴度和ELISA测定的抗体滴度之间高度相关，揭示了部分HPV疫苗预防病毒入侵的机制，为快速准确鉴定HPV-16和HPV-18候选疫苗的免疫保护效果奠定了基础。

关键词：假病毒纽扣珊瑚绿色荧光蛋白分泌性碱性磷酸酶中和抗体滴度

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黄土边坡微生物矿化加固及植被恢复试验

水土保持研究 2025年第1期32卷 227-234+242页

作者：雷磊王良樊成虎刘子瑞宋洋薛倩楠田堪良段金贵国网陕西省电力有限公司电力科学研究院国网(西安)环保技术中心有限公司国网陕西省电力有限公司国网陕西省电力有限公司安康水力发电公司国网陕西省电力有限公司西安供电公司西北农林科技大学水土保持研究所中国科学院水利部水土保持研究所黄河水利委员会西峰水土保持科学试验站

[目的]研究黄土边坡微生物矿化加固及植被恢复，为黄土边坡的加固及坡面土壤侵蚀防治提供新方法和新技术。[方法]采用微生物诱导碳酸钙沉淀(Microbially Induced Calcite Precipitation, MICP)技术对黄土边坡进行矿化加固处理，并在固... 详细信息

[目的]研究黄土边坡微生物矿化加固及植被恢复，为黄土边坡的加固及坡面土壤侵蚀防治提供新方法和新技术。[方法]采用微生物诱导碳酸钙沉淀(Microbially Induced Calcite Precipitation, MICP)技术对黄土边坡进行矿化加固处理，并在固化黄土边坡上进行植被恢复，利用扫描电子显微镜(SEM)和光学显微镜，从微观角度探究MICP技术对黄土边坡矿化加固的作用机制，并统计分析了固化黄土边坡的植被恢复效果。[结果]采用MICP技术对黄土边坡进行固化处理后，在坡面上生成的固化层将松散且相邻的土壤颗粒胶结在一起，使黄土坡面形成一个整体，固化层最大厚度为0.23 cm,平均厚度为0.21 cm;固化黄土边坡恢复植被后第60天，A1,A2,B1,B2,A1B1,A2B2各区域内植被成活率比A0,B0,A0B0各区域分别显著提高26.66%,20%,37.5%,25%,33.33%,25%(p<0.05),第60天后，各区域内植被的成活率均差异显著，而且固化后加保水剂的A1,B1,A1B1各区域内植被的成活率最高；固化后加保水剂的B1和A1B1区域内紫穗槐高度和地径的生长变化量最大，且固化后加保水剂的A1,B1,A1B1各区域内麦冬草和紫穗槐的生长状况最好。[结论]采用MIC技术可以有效固化黄土坡面，与植被恢复技术相结合，既能防治土壤侵蚀，又能恢复生态环境。这种综合防治措施为黄土边坡水土流失防治与生态修复提供了良好的技术支持。

关键词：黄土边坡微生物矿化加固技术植被恢复边坡防护

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西兰花苗中萝卜硫素合成的调控手段研究进展

食品科学 2025年第1期46卷 210-217页

作者：李翠方胜赵忠良刘海杰中国农业大学食品科学与营养工程学院北京100083 江苏新希望生态科技有限公司江苏徐州221150

萝卜硫素(sulforaphane,SFN)具有抗肿瘤、抗炎、抗氧化、减轻肥胖等多种生物学活性,在西兰花苗中含量最高,使西兰花苗在保健食品和药品开发方面具有广阔的应用前景。本文首先综述SFN在西兰花苗中的合成及降解过程,重点讨论在西兰花苗生... 详细信息

萝卜硫素(sulforaphane,SFN)具有抗肿瘤、抗炎、抗氧化、减轻肥胖等多种生物学活性,在西兰花苗中含量最高,使西兰花苗在保健食品和药品开发方面具有广阔的应用前景。本文首先综述SFN在西兰花苗中的合成及降解过程,重点讨论在西兰花苗生长阶段采用不同处理手段对SFN及其合成相关因子含量的影响,并对其作用机理进行总结分析,最后提出目前还存在的问题及对未来研究方向的展望,为提高植物源食品功能性的相关研究提供一定参考。

关键词：西兰花苗硫代葡萄糖苷萝卜硫素生成机理调控

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工业菌种改良述评

工业微生物 2004年第1期34卷 39-51页

作者：雷肇祖钱志良章健上海新立工业微生物科技有限公司上海200233

微生物菌种是发酵工业的基础。菌种筛选和持续不断的改良贯彻于发酵过程始终。传统的 (经典的 )诱变 -筛选仍是目前最实用的常规技术 ;以基因工程为核心的现代生物技术正越来越显示出其在菌种改良上的魅力。

关键词：菌种选育遗传操作发酵改良

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批式发酵法生产乳酸的几个重要因素

工业微生物 2008年第3期38卷 56-61页

作者：劳含章钱志良王健孙建荣上海新立工业微生物科技有限公司上海200231

乳酸是一种重要的有机酸,在各个行业中均有广泛的应用,它作为生物可降解聚乳酸的原料尤其令人关注。本文对提高乳酸发酵生产中的几个重要因素如菌种、原料。

关键词：微生物菌种乳酸生产批式发酵工艺

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牡丹花酶解肽的理化性质及促进皮肤健康功效

食品工业科技 2024年第22期45卷 314-321页

作者：曾贝贝吕静鲁杏茹智文博李带根厦门元之道生物科技有限公司福建厦门361100

为进一步促进牡丹花的开发利用,本研究以酶解的牡丹花酶解肽为研究对象,分析了其分子量分布与氨基酸组成,通过测定体外酪氨酸酶抑制率、抗糖化活性、透明质酸酶抑制率以及抗氧化活性研究其促进皮肤健康的功效,并进一步利用斑马鱼黑色素... 详细信息

为进一步促进牡丹花的开发利用,本研究以酶解的牡丹花酶解肽为研究对象,分析了其分子量分布与氨基酸组成,通过测定体外酪氨酸酶抑制率、抗糖化活性、透明质酸酶抑制率以及抗氧化活性研究其促进皮肤健康的功效,并进一步利用斑马鱼黑色素沉积模型进行验证。结果表明,牡丹花酶解肽是由15种氨基酸组成的平均分子量为644 Da的小分子肽,当浓度为10 mg/mL时,体外酪氨酸酶抑制率为88.96%,晚期糖基化终末产物(AGEs)抑制率为90.50%,透明质酸酶抑制率为60.43%,DPPH自由基清除率和羟自由基清除率分别为74.77%和94.74%。同时,斑马鱼模型的结果表明牡丹花酶解肽可有效抑制斑马鱼头部黑色素沉积,当样品浓度为1000μg/mL时,黑色素抑制率达到40.59%。总之,体内外研究结果初步证明牡丹花酶解肽具有良好的促进皮肤健康的潜力。

关键词：牡丹花酶解肽美白功效皮肤健康抗氧化斑马鱼

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基于PK15细胞的猪圆环病毒2型全悬浮培养工艺

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中国农业科学 2021年第6期54卷 1280-1287页

作者：王嘉琪董育红姜菊玲钱建宁魏文涛宋国亮焦金波关新新姬郭彪张业炘甘肃健顺生物科技有限公司洛阳惠中生物技术有限公司

【目的】筛选1株适合PCV2病毒生产的悬浮细胞株,摸索PCV2悬浮生产工艺(病毒种毒来源、MOI及收获时间),为大规模悬浮培养技术制备疫苗提供试验依据。【方法】使用有限稀释法对PK15原细胞稀释后接种于96孔板,每2 d观察细胞生长和形态,待细... 详细信息

【目的】筛选1株适合PCV2病毒生产的悬浮细胞株,摸索PCV2悬浮生产工艺(病毒种毒来源、MOI及收获时间),为大规模悬浮培养技术制备疫苗提供试验依据。【方法】使用有限稀释法对PK15原细胞稀释后接种于96孔板,每2 d观察细胞生长和形态,待细胞90%长满后,将细胞从96孔板陆续扩至24孔板、12孔板、6孔板,最后到方瓶,筛选3株可贴壁生长的、形态较好的PK15克隆。3株克隆(PK15-1C8、2F11、1E5)按照1×10~6细胞/m L的密度,直接接种在PK15的无血清培养基中,并置于37℃,5%二氧化碳,120 r/min的摇床培养箱中继续培养,每天监测细胞密度和活率,每3 d传代,使细胞逐渐适应悬浮环境,驯化为可全悬浮、无血清培养的悬浮细胞株;细胞传代稳定并建库后,接种PCV2病毒,通过对比3株悬浮克隆细胞培养PCV2病毒含量的差异,筛选1株克隆细胞,用于生产PCV2;针对不同种毒(来源于贴壁细胞或悬浮细胞),摸索感染MOI(0.1、0.2、0.5)及收获时间(48、72、96、120h),确定PCV2最佳生产工艺。【结果】(1)贴壁细胞置于无血清培养基中,适应至第2代时细胞即可呈悬浮生长,连续传至11代,细胞生长稳定,按照1×10~6/mL接种细胞,细胞生长72h时细胞密度可达到10×10~6/mL,活率在95%以上,倍增时间为20h左右;(2)3株悬浮细胞使用相同条件,分别接种PCV2病毒后,PK15-1C8克隆细胞的病毒含量可达到106.4TCID50/mL,克隆PK15-2F11(105.5TCID50/mL)、PK15-1E5(105.6TCID50/mL),3株克隆细胞病毒含量均高于原克隆(104.7TCID50/mL),但PK15-1C8克隆细胞的病毒含量更高且更稳定,确定为后续研究用细胞;(3)使用贴壁细胞来源的种毒(106.4TCID50/mL)感染PK15-1C8克隆细胞后,最优工艺为接毒时细胞密度1×10~6/mL,以0.1MOI接毒,接毒后72h收获,最高病毒含量为106.5TCID50/mL。以来源于悬浮细胞的种毒(106.3TCID50/mL)感染细胞后,病毒含量较贴壁细胞来源种毒更高,最高可达107.3TCID50/mL,其最优工艺为接毒时细胞密度1×10~6/mL,以0.2MOI接毒,接毒后72h收获。【结论】通过对PK15细胞进行单克隆筛选,驯化悬浮、3株悬浮细胞接种PCV2后病毒含量的对比,确定一株病毒含量最高的悬浮细胞,并以此悬浮细胞为基础进行PCV2生产工艺摸索,建立了全悬浮无血清培养的PK15-1C8细胞增殖PCV2工艺,该工艺首次使用悬浮细胞扩增PCV2病毒为种毒进行接毒,最高病毒含量可达107.3TCID50/mL,可用于工厂化疫苗生产。

关键词： PK15细胞猪圆环病毒2型克隆筛选悬浮培养