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沉默CDC20基因通过抑制Wnt/β-连环蛋白信号通路对子宫内膜癌细胞增殖和细胞周期的影响

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吉林大学学报（医学版） 2024年第5期50卷 1305-1312页

作者：刘春静杨钰杰赵薇刘丽晶王娜齐齐哈尔医学院附属第三医院妇一科黑龙江齐齐哈尔161000

目的:探讨细胞分裂周期蛋白20 (CDC20)对子宫内膜癌(EC)细胞增殖和细胞周期的影响,并阐明其作用机制。方法:实时荧光定量PCR (RT-qPCR)和Western blotting法检测人子宫内膜基质T-HESC细胞和人EC细胞(KLE、RL95-2、ZJB-ENC1和ECC-1细胞)... 详细信息

目的:探讨细胞分裂周期蛋白20 (CDC20)对子宫内膜癌(EC)细胞增殖和细胞周期的影响,并阐明其作用机制。方法:实时荧光定量PCR (RT-qPCR)和Western blotting法检测人子宫内膜基质T-HESC细胞和人EC细胞(KLE、RL95-2、ZJB-ENC1和ECC-1细胞)中CDC20 mRNA及蛋白表达水平,选择RL95-2细胞用于后续实验。将CDC20 shRNA干扰慢病毒转染至RL95-2细胞中,分为对照组、sh-NC组(感染阴性对照慢病毒)、sh-CDC20组(感染CDC20 shRNA干扰慢病毒)、sh-NC+SM04690组(感染阴性对照慢病毒后,加入64 nmol·L^(-1) Wnt/β-连环蛋白信号通路抑制剂SM04690干预48h)和sh-CDC20+SM04690组(感染CDC20shRNA干扰慢病毒后,加入64 nmol·L^(-1) SM04690干预48 h)。RT-qPCR法和Western blotting法检测不同细胞中CDC20 mRNA和蛋白表达水平,CCK-8法检测各组细胞增殖活性,BrdU法检测各组细胞中BrdU阳性细胞百分率,流式细胞术检测各组G2/M期细胞百分率,Western blotting法检测各组细胞中β-连环蛋白、c-Myc和细胞周期素D1蛋白表达水平。结果:与T-HESC细胞比较,KLE、RL95-2、ZJB-ENC1和ECC-1细胞中CDC20 mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P<0.05),其中RL95-2细胞中CDC20 mRNA和蛋白表达水平最高。与sh-NC组比较,sh-CDC20组和sh-NC+SM04690组细胞增殖活性和BrdU阳性细胞百分率明显降低(P<0.05),G2/M期细胞百分率明显升高(P<0.05),细胞中β-连环蛋白、c-Myc和细胞周期素D1蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。与sh-CDC20组比较,sh-CDC20+SM04690组细胞增殖活性和BrdU阳性细胞百分率明显降低(P<0.05),G2/M期细胞百分率明显升高(P<0.05),细胞中β-连环蛋白、c-Myc和细胞周期素D1蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论:EC细胞中CDC20呈高表达,沉默CDC20可能通过调控Wnt/β-连环蛋白信号转导诱导RL95-2细胞G2/M期阻滞,抑制细胞增殖。

关键词：子宫内膜癌细胞分裂周期蛋白20 细胞周期细胞增殖 Wnt/β-连环蛋白信号通路

“互联网+”时代合作性学习法对医学生的影响

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继续医学教育 2024年第1期38卷 49-52页

作者：韩珺康英英曲佳慧谷传文房阳赵尚爽哈尔滨医科大学附属第四医院内分泌科黑龙江哈尔滨150001 齐齐哈尔市第一医院普外科黑龙江齐齐哈尔161000 齐齐哈尔市第一医院中西医结合科黑龙江齐齐哈尔161000

目的探讨“互联网+”时代合作性学习法在医学生自主学习中的应用及效果评价。方法以哈尔滨医科大学2019级临床医学一班和二班为教学对象,2022年3—7月第二学期的《内科学》课程作为合作性学习的试点教学课程。一班采用合作性学习教学方... 详细信息

目的探讨“互联网+”时代合作性学习法在医学生自主学习中的应用及效果评价。方法以哈尔滨医科大学2019级临床医学一班和二班为教学对象,2022年3—7月第二学期的《内科学》课程作为合作性学习的试点教学课程。一班采用合作性学习教学方法,二班采用传统教学方法,在开课前和结课后,对2个班学生进行理论和临床综合能力考核,并对2个班学生进行自主学习能力评估。结果对比课程结束后的临床一班和临床二班学生综合考试成绩,前者的各项得分均高于后者,差异有统计学意义(P一班课程结束后学生自主学习能力和各维度得分均显著提高,差异有统计学意义(P0.05)。结论“互联网+”时代合作性学习能有效提高医学生的自主学习能力,可以广泛应用到课程教学中。

关键词：互联网+ 医学生合作性学习法自主学习能力评估教育行业

IGFBP6在不稳定颈动脉斑块中的作用:生物信息学分析与实验验证

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解放军医学杂志 2024年第6期49卷 701-710页

作者：李玉岩梁莹莹周洁信车飞付金霞齐齐哈尔医学院附属第二医院神经内科黑龙江齐齐哈尔161006 齐齐哈尔医学院附属第二医院心血管内科黑龙江齐齐哈尔161006

目的探讨不稳定颈动脉粥样硬化斑块的差异表达基因(DEGs)及其分子相互作用。方法从基因表达数据库(GEO)和欧洲生物信息学研究所数据库下载颈动脉斑块患者的基因表达数据集GSE41571、GSE118481和E-MTAB-2055。采用基因本体生物学过程(GO-... 详细信息

目的探讨不稳定颈动脉粥样硬化斑块的差异表达基因(DEGs)及其分子相互作用。方法从基因表达数据库(GEO)和欧洲生物信息学研究所数据库下载颈动脉斑块患者的基因表达数据集GSE41571、GSE118481和E-MTAB-2055。采用基因本体生物学过程(GO-BP)富集分析、京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析、蛋白-蛋白相互作用(PPI)网络、miRNAs/转录因子与靶基因的相互关系及药物-基因相互作用等方法,分析至少两个数据集中不稳定颈动脉斑块的共调控DEGs。采用定量实时PCR(qRT-PCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测颈动脉粥样硬化斑块患者58例的颈动脉斑块和血浆中部分DEGs的表达水平。结果GO富集分析显示,不稳定颈动脉斑块的DEGs主要富集在与炎症反应相关的基因和细胞外基质结构基因;KEGG富集分析显示,不稳定颈动脉斑块中上调的DEGs富集于细胞外基质受体相互作用、PI3K-Akt、Hippo信号通路及转化生长因子-β(TGF-β)信号通路,下调的DEGs主要富集于溶酶体、吞噬体及趋化因子过程。PPI网络分析结果显示,COL1A2、COL4A2、胰岛素样生长因子结合蛋白6(IGFBP6)、COL4A5、C1QA、CXCL10、CXCL2、CXCR4和CSF1R等可能在PPI网络中起重要作用。药物-基因相互作用的预测显示,CSF1R的药物相互作用最多,CXCL2受药物拮抗程度最高,IGFBP6受药物激活程度最高。qRT-PCR检测结果显示,与稳定斑块组比较,不稳定斑块组IGFBP6表达水平明显降低(P<0.001)。ELISA法检测结果显示,不稳定斑块组血浆IGFBP6浓度明显低于稳定斑块组(P<0.0001)。受试者工作特征曲线分析结果显示,采用血浆IGFBP6水平鉴别不稳定斑块的曲线下面积为0.894(95%CI 0.810~0.977),截断值为142.08 ng/ml。结论IGFBP6可能成为预测不稳定颈动脉斑块的重要生物标志物。

关键词：动脉粥样硬化卒中生物信息学胰岛素样生长因子结合蛋白6

乳腺癌核仁磷蛋白乙酰化及其修饰位点突变体的构建和表达

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解剖学报 2024年第2期55卷 196-202页

作者：郝经伟潘婷李月朱文斌段文博刘立琨岳丽玲刘云龙高秀丽齐齐哈尔医学院医学技术学院黑龙江齐齐哈尔161006 齐齐哈尔医学院药学院黑龙江齐齐哈尔161006 齐齐哈尔医学院医药科学研究院肿瘤分子生物学研究室黑龙江齐齐哈尔161006 齐齐哈尔医学院附属第二医院肿瘤外科黑龙江齐齐哈尔161006

目的明确女性乳腺癌中核仁磷蛋白(NPM)乙酰化修饰水平,并通过修饰位点突变体的构建探讨其功能。方法蛋白质修饰组学方法检测对比人乳腺癌组织及癌旁正常组织(各3例)NPM乙酰化水平及乙酰化位点;基因定点突变PCR构建NPM乙酰化突变体,限制... 详细信息

目的明确女性乳腺癌中核仁磷蛋白(NPM)乙酰化修饰水平,并通过修饰位点突变体的构建探讨其功能。方法蛋白质修饰组学方法检测对比人乳腺癌组织及癌旁正常组织(各3例)NPM乙酰化水平及乙酰化位点;基因定点突变PCR构建NPM乙酰化突变体,限制性内切酶(DpnI)消化及大肠埃希菌转化获得特异性突变体重组质粒;双酶切与测序验证各突变体序列准确性;瞬时转染及RT-PCR方法检测各突变体过表达效果。Western blotting验证NPM乙酰化水平,蛋白质定量组学及生物信息学分析NPM乙酰化功能。结果乳腺癌组织样本中NPM第27及第32位赖氨酸乙酰化水平分别为癌旁正常组织的2.76及2.22倍;构建的NPM乙酰化位点突变体与野生型NPM分子量一致且出现预期突变位点;转染NPM各突变体的BT-549细胞相应NPM mRNA表达水平明显升高。随着野生型NPM表达水平增加,蛋白乙酰化水平增加,27位赖氨酸发生负向突变后,修饰水平下降。NPM乙酰化可使BT-549细胞中101种蛋白表达水平发生明显变化,上述蛋白在细胞大分子生物合成,以DNA为模板的转录过程,RNA生物合成以及RNA代谢过程中富集。结论乳腺癌NPM呈高乙酰化水平并可能在细胞大分子生物合成,转录过程,RNA生物合成以及RNA代谢过程中发挥关键功能。

关键词：乳腺癌核仁磷蛋白乙酰化定点突变蛋白质组学人

血清Hcy及颈动脉斑块易损性评分与老年脑小血管病患者脑白质病变和认知功能障碍的关系

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中国老年学杂志 2024年第13期44卷 3154-3158页

作者：张羽镝张成十王晓宇刘佳俊齐齐哈尔医学院附属第一医院急诊科黑龙江齐齐哈尔161041 齐齐哈尔医学院附属第一医院神经内科黑龙江齐齐哈尔161041

目的探讨血清同型半胱氨酸(Hcy)及颈动脉斑块易损性评分与老年脑小血管病患者脑白质病变和认知功能障碍的关系。方法选取老年脑小血管病患者105例,根据脑白质病变情况分为脑白质病变组(Fazekas分级1~3级)50例,非脑白质病变组(Fazekas分... 详细信息

目的探讨血清同型半胱氨酸(Hcy)及颈动脉斑块易损性评分与老年脑小血管病患者脑白质病变和认知功能障碍的关系。方法选取老年脑小血管病患者105例,根据脑白质病变情况分为脑白质病变组(Fazekas分级1~3级)50例,非脑白质病变组(Fazekas分级0级)55例。根据认知功能障碍发生情况分为认知功能障碍组[简易智力状态评估(MMSE)量表得分0~26分]38例,无认知功能障碍组(MMSE得分27~30分)67例。采集患者入院后24 h内的空腹肘静脉血,检测Hcy、肌酐、血脂指标、空腹血糖水平。根据颈动脉超声检查结果进行颈动脉斑块易损性评分。结果脑白质病变组男性比例、年龄明显高于非脑白质病变组(P<0.05)。脑白质病变组血清Hcy浓度、颈动脉斑块易损性评分明显高于非脑白质病变组(P<0.01)。年龄、Hcy、颈动脉斑块易损性评分是老年脑小血管病患者脑白质病变的独立影响因素。认知功能障碍组年龄明显高于无认知功能障碍组(P<0.05)。认知功能障碍组血清Hcy浓度、颈动脉斑块易损性评分明显高于无认知功能障碍组(P<0.01)。Hcy、颈动脉斑块易损性评分是老年脑小血管病患者认知功能障碍发生的独立影响因素。老年脑小血管病患者血清Hcy与颈动脉斑块易损性评分呈正相关(r=0.817,P=0.004)。血清Hcy及颈动脉斑块易损性评分对老年脑小血管病患者脑白质病变、认知功能障碍具有较高的预测价值,联用的预测价值最高。结论血清Hcy及颈动脉斑块易损性评分与老年脑小血管病患者脑白质病变和认知功能障碍密切相关,且联用具有较高的预测价值。

关键词：脑小血管病同型半胱氨酸颈动脉斑块易损性评分脑白质病变认知功能障碍

麻杏石甘汤的药理作用及其在晚期肺癌化疗中的应用

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中药材 2024年 2664-2667页

作者：马丽娟邱舒琪宁波大学附属人民医院中西医结合肿瘤科

麻杏石甘汤由麻黄、石膏、苦杏仁、炙甘草4味中药组成。中医认为,麻杏石甘汤可清热平喘、辛凉宣肺,原治太阳病,后用于治疗风热犯肺、风寒化热、内热外寒等。凡肺中热盛、咳喘身热者,无论有汗否,运用该方加减治疗,均可获益。目前,麻杏石... 详细信息

麻杏石甘汤由麻黄、石膏、苦杏仁、炙甘草4味中药组成。中医认为,麻杏石甘汤可清热平喘、辛凉宣肺,原治太阳病,后用于治疗风热犯肺、风寒化热、内热外寒等。凡肺中热盛、咳喘身热者,无论有汗否,运用该方加减治疗,均可获益。目前,麻杏石甘汤在哮喘、肺炎、支气管炎等疾病干预中应用广泛,表现出调节机体免疫、止咳、抗病毒、抗炎等功效,尤其对肺功能具有改善作用。该文针对麻杏石甘汤的现代药理及其在晚期肺癌化疗中的应用进行综述,进一步为临床用药提供依据。

关键词：麻杏石甘汤现代药理晚期肺癌化疗

中医药靶向PI3K/Akt通路调控胃癌现状及机制进展研究

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中药材 2024年 792-795页

作者：马丽娟吴欣益王锡恩宁波大学附属人民医院中西医结合肿瘤科

胃癌属于一种涉及多条信号通路活化的高侵袭性和高异质性肿瘤,发病机制较复杂,该疾病治疗的分子机制研究现已成为医学界亟待解决的关键问题。磷脂酰肌3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路与多种疾病联系紧密,具有广泛的生物学效应,且... 详细信息

胃癌属于一种涉及多条信号通路活化的高侵袭性和高异质性肿瘤,发病机制较复杂,该疾病治疗的分子机制研究现已成为医学界亟待解决的关键问题。磷脂酰肌3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路与多种疾病联系紧密,具有广泛的生物学效应,且诱导多种信号传导,在调控肿瘤细胞的生长、凋亡和迁移中发挥着重要作用,现已成为癌症相关研究的热点。基于此,该研究将PI3K/Akt通路作为基础,进一步分析相关学者对中医药与胃癌的相关研究,如胃癌细胞增殖、凋亡及侵袭等生物学途径,旨为后续诊治胃癌提供新方向。

关键词：中医药 PI3K/Akt通路胃癌调控机制靶向

老年子宫内膜癌组织中miR-30a及p53、S100蛋白表达与临床病理特征、术后复发转移的关系

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中国老年学杂志 2024年第13期44卷 3088-3092页

作者：王丹姜頔宋越陆晗笑刘丽娜齐齐哈尔医学院附属第一医院妇产科黑龙江齐齐哈尔161041 齐齐哈尔医学院附属第一医院核医学科黑龙江齐齐哈尔161041

目的探讨老年子宫内膜癌组织中微小RNA(miR)-30a及肿瘤抑制基因(p53)、中枢神经特异性蛋白(S100)表达与临床病理特征和术后复发转移的关系。方法选取老年子宫内膜癌患者64例,同期因良性疾病行子宫切除术42例。收集手术切除的子宫内膜癌... 详细信息

目的探讨老年子宫内膜癌组织中微小RNA(miR)-30a及肿瘤抑制基因(p53)、中枢神经特异性蛋白(S100)表达与临床病理特征和术后复发转移的关系。方法选取老年子宫内膜癌患者64例,同期因良性疾病行子宫切除术42例。收集手术切除的子宫内膜癌组织和正常子宫内膜组织,利用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测miR-30a的表达水平,免疫组化法检测p53、S100蛋白表达。收集患者人口学特征,合并多囊卵巢综合征、合并糖尿病、肿瘤直径、组织学分级、远处转移、淋巴结转移、浸润深度、淋巴脉管浸润、国际妇产科学联合会(FIGO)分期。根据患者术后1年门诊随访情况分为未复发转移组、复发转移组。结果子宫内膜癌组织中miR-30a表达水平明显低于正常子宫内膜组织(P肿瘤直径、远处转移、淋巴结转移、浸润深度、淋巴脉管浸润的子宫内膜癌患者间比较差异有统计学意义(P肿瘤直径>2 cm、远处转移、淋巴结转移、浸润深度>1/2肌层、淋巴脉管浸润的子宫内膜癌患者miR-30a表达水平明显偏低,p53、S100蛋白阳性表达率明显偏高(P肿瘤直径、组织学分级、浸润深度、淋巴脉管浸润、FIGO分期差异有统计学意义(P<0.01)。多因素Logistic回归分析显示,miR-30a表达、p53蛋白表达、S100蛋白表达、浸润深度、淋巴脉管浸润、FIGO分期是老年子宫内膜癌术后复发转移的独立影响因素。受试者工作特征(ROC)曲线分析显示,miR-30a及p53、S100蛋白表达对老年子宫内膜癌患者术后复发转移均具有较高的预测价值(P<0.05),其中各指标联合检测的预测价值最高。结论老年子宫内膜癌组织中miR-30a低表达,p53、S100表达阳性率升高,且与临床病理特征和术后复发转移密切相关,联合检测对术后复发转移有较高的预测价值。

关键词：子宫内膜癌微小RNA-30a 肿瘤抑制基因中枢神经特异性蛋白

华蟾素调控PI3K/AKT通路逆转卵巢癌A2780/DDP细胞顺铂耐药的作用机制

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安徽医科大学学报 2024年第4期59卷 671-677,741页

作者：舒美玲吴悦叶映泉张爽爽张梅安徽医科大学中西医结合临床医学系合肥230032 安徽医科大学第一附属医院中西医结合肿瘤科合肥230022

目的研究华蟾素(CBG)对人卵巢癌细胞顺铂耐药的逆转作用和机制。方法A2780细胞株及其顺铂耐药细胞株A2780/DDP是临床常见的卵巢癌细胞,故选择这两种细胞株作为研究对象。通过CCK-8法检测细胞活力,平板克隆和5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(... 详细信息

目的研究华蟾素(CBG)对人卵巢癌细胞顺铂耐药的逆转作用和机制。方法A2780细胞株及其顺铂耐药细胞株A2780/DDP是临床常见的卵巢癌细胞,故选择这两种细胞株作为研究对象。通过CCK-8法检测细胞活力,平板克隆和5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EdU)实验检测细胞的增殖能力,赫斯特染色(Hoechst)法观察细胞凋亡情况,细胞划痕实验和Transwell实验评估细胞的迁移和侵袭能力,Western blot和定量逆转录PCR(RT-qPCR)法检测磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶(PI3K/AKT)信号通路和上皮-间质转化(EMT)的相关蛋白和mRNA的表达差异。结果与A2780细胞相比,A2780/DDP细胞的耐药指数分别约为5.636、5.864、5.695,采用CBG(2、4、6 mg/ml)处理A2780/DDP耐药细胞后,逆转耐药指数分别为1.617、2.570、3.461。CBG呈浓度依赖性地上调细胞凋亡水平、抑制细胞的增殖、迁移和侵袭能力(P<0.05)。Western blot结果显示:与A2780细胞相比,对照组(A2780/DDP)细胞中P-PI3K/PI3K和P-AKT/AKT的蛋白水平相对比值以及N钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、蜗牛蛋白(Snail)的蛋白表达更高,E钙黏蛋白(E-cadherin)蛋白表达更低(t_(P-PI3K/PI3K)=8.115,t_(P-AKT/AKT)=17.62、t_(N-cadherin)=6.126、t_(Vimentin)=4.001、t_(Snail)=17.333、t_(E-cadherin)=4.620,P<0.01);随着CBG剂量升高,耐药细胞中的P-PI3K、P-AKT、N-cadherin、Vimentin、Snail的蛋白表达水平降低,而E-cadherin的蛋白表达量增加(F_(P-PI3K)=268.5、F P-AKT=190.5、F_(N-cadherin)=24.02、F_(Vimentin)=57.65、F_(Snail)=87.24、F_(E-cadherin)=135.8,P<0.05)。RT-qPCR结果显示:随着CBG浓度增加,PI3K、AKT、N-cadherin、Vimentin、Snail的mRNA表达水平随之降低,相反E-cadherin的mRNA表达水平逐渐升高(F PI3K=101.1、F_(AKT)=558.3、F_(N-cadherin)=86.97、F_(Vimentin)=105.9、F_(Snail)=85.71、F_(E-cadherin)=80.96,P<0.01)。结论CBG具有逆转卵巢癌A2780/DDP细胞株顺铂耐药的作用,其机制可能与CBG调控PI3K/AKT信号通路和抑制EMT发生有关。

关键词：华蟾素卵巢癌顺铂耐药逆转耐药 PI3K/AKT 上皮间质转化作用机制