乳腺癌核仁磷蛋白乙酰化及其修饰位点突变体的构建和表达

作     者：郝经伟 潘婷 李月 朱文斌 段文博 刘立琨 岳丽玲 刘云龙 高秀丽 HAO Jing-wei;PAN Ting;LI Yue;ZHU Wen-bin;DUAN Wen-bo;LIU Li-kun;YUE Li-ling;LIU Yun-long;GAO Xiu-li

作者机构：齐齐哈尔医学院医学技术学院黑龙江齐齐哈尔161006 齐齐哈尔医学院药学院黑龙江齐齐哈尔161006 齐齐哈尔医学院医药科学研究院肿瘤分子生物学研究室黑龙江齐齐哈尔161006 齐齐哈尔医学院附属第二医院肿瘤外科黑龙江齐齐哈尔161006 

出 版 物：《解剖学报》 (Acta Anatomica Sinica)

年 卷 期：2024年第55卷第2期

页      面：196-202页

核心收录：

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(81972491) 黑龙江省教育厅面上项目(2022-KYYWF-0831) 齐齐哈尔医学科学院临床科研基金(QMSI2021L-14) 齐齐哈尔医学院研究生创新基金(QYYCX2022-18) 

主　　题：乳腺癌 核仁磷蛋白乙酰化 定点突变 蛋白质组学 人 

摘      要：目的明确女性乳腺癌中核仁磷蛋白(NPM)乙酰化修饰水平,并通过修饰位点突变体的构建探讨其功能。方法蛋白质修饰组学方法检测对比人乳腺癌组织及癌旁正常组织(各3例)NPM乙酰化水平及乙酰化位点;基因定点突变PCR构建NPM乙酰化突变体,限制性内切酶(DpnI)消化及大肠埃希菌转化获得特异性突变体重组质粒;双酶切与测序验证各突变体序列准确性;瞬时转染及RT-PCR方法检测各突变体过表达效果。Western blotting验证NPM乙酰化水平,蛋白质定量组学及生物信息学分析NPM乙酰化功能。结果乳腺癌组织样本中NPM第27及第32位赖氨酸乙酰化水平分别为癌旁正常组织的2.76及2.22倍;构建的NPM乙酰化位点突变体与野生型NPM分子量一致且出现预期突变位点;转染NPM各突变体的BT-549细胞相应NPM mRNA表达水平明显升高。随着野生型NPM表达水平增加,蛋白乙酰化水平增加,27位赖氨酸发生负向突变后,修饰水平下降。NPM乙酰化可使BT-549细胞中101种蛋白表达水平发生明显变化,上述蛋白在细胞大分子生物合成,以DNA为模板的转录过程,RNA生物合成以及RNA代谢过程中富集。结论乳腺癌NPM呈高乙酰化水平并可能在细胞大分子生物合成,转录过程,RNA生物合成以及RNA代谢过程中发挥关键功能。