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UPLC-MS/MS法检测大鼠血浆中新利司他杂质A的含量及其在药代动力学中的应用

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药物分析杂志 2022年第4期42卷 637-642页

作者：王现珍姚景春许晓丽张贵民鲁南制药集团股份有限公司临沂273400 中药制药共性技术国家重点实验室临沂273400

目的:建立超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)检测大鼠血浆内新利司他杂质A(2-[[(十六烷氧基)羰基]氨基]-5-甲基苯甲酸)含量的方法以及该方法在药代动力学中的应用。方法:大鼠含药血浆以奥利司他为内标,用乙腈沉淀蛋白,10000 r·min... 详细信息

目的:建立超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)检测大鼠血浆内新利司他杂质A(2-[[(十六烷氧基)羰基]氨基]-5-甲基苯甲酸)含量的方法以及该方法在药代动力学中的应用。方法:大鼠含药血浆以奥利司他为内标,用乙腈沉淀蛋白,10000 r·min^(-1)离心10 min,吸取上清液150μL,加入四氢呋喃10μL,混匀后进样分析。采用Hypersil GOLD(50 mm×2.1 mm,1.9μm)色谱柱,以0.1%甲酸乙腈-0.1%甲酸水(82∶18)为流动相,流速为0.5 mL·min^(-1),柱温为30℃;质量检测器使用ESI离子源,正离子模式检测,待测物杂质A及内标奥利司他用于定量的母→子离子对分别为m/z 420.3→160.3、m/z 496.4→319.3。结果:新利司他杂质A质量浓度在0.0200~10.0 mg·L^(-1)范围内呈良好的线性关系。稳定性、准确度的RE均在0.1%~6.3%范围内,精密度、回收率、基质效应的RSD均在3.8%以下。在大鼠灌胃低(20 mg·kg^(-1))、中(80 mg·kg^(-1))、高(320 mg·kg^(-1))3个剂量新利司他杂质A混悬液的药代动力学实验中,血浆中新利司他杂质A的最高血药浓度(C_(max))仅为12.1 mg·L^(-1),3个剂量组的AUC分别为22.2、64.9、85.0 mg·L^(-1)·h;血浆暴露量虽随剂量增加而增加,但是增加倍数小于剂量增加倍数。3个剂量组的达峰时间(T_(max))在2.6~3.0 h,消除半衰期(t_(1/2z))在3.08~3.85 h,吸收、消除过程类似。结论:本文建立了超高效液相色谱-串联质谱法测定大鼠血浆内新利司他杂质A含量的方法。大鼠灌胃新利司他杂质A混悬液,在20~320 mg·kg^(-1)剂量范围内吸收入血的量比较少,血浆暴露量小于剂量相关线性增加,口服带来的安全性问题有限。

关键词：新利司他 2-[[(十六烷氧基)羰基]氨基]-5-甲基苯甲酸高效液相-串联质谱奥利司他药代动力学大鼠血浆肥胖脂肪酶

UPLC波长切换法同时测定心通颗粒中7个成分的含量

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药物分析杂志 2023年第8期43卷 1284-1290页

作者：庄会芳袁晓梅庄建林赵森森范建伟张贵民鲁南制药集团股份有限公司中药制药共性技术国家重点实验室临沂276006 鲁南厚普制药有限公司临沂276006

目的:建立同时测定心通颗粒中葛根素、大豆苷、2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷、柚皮苷、丹酚酸B、淫羊藿苷和丹参酮ⅡA 7个成分含量的方法。方法:采用UPLC波长切换法,色谱柱为Waters CORTECSⓇC_(18)柱(50 mm×4.6 mm,2.7... 详细信息

目的:建立同时测定心通颗粒中葛根素、大豆苷、2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷、柚皮苷、丹酚酸B、淫羊藿苷和丹参酮ⅡA 7个成分含量的方法。方法:采用UPLC波长切换法,色谱柱为Waters CORTECSⓇC_(18)柱(50 mm×4.6 mm,2.7μm),流动相为乙腈(A)-0.1%磷酸水溶液(B),梯度洗脱,流速0.3~0.5 mL·min^(-1),柱温35℃,检测波长250 nm(0~15 min时,检测葛根素和大豆苷)、320 nm(15~23 min时,检测2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷)、283 nm(23~36 min时,检测柚皮苷和丹酚酸B)、270 nm(36~56 min时,检测淫羊藿苷和丹参酮ⅡA)。结果:葛根素、大豆苷、2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷、柚皮苷、丹酚酸B、淫羊藿苷和丹参酮ⅡA质量浓度分别在34.43~344.32μg·mL^(-1)(r=0.9999)、8.33~83.28μg·mL^(-1)(r=0.9999)、1.48~14.76μg·mL^(-1)(r=0.9999)、2.37~23.68μg·mL^(-1)(r=0.9998)、14.58~145.76μg·mL^(-1)(r=0.9999)、1.86~18.56μg·mL^(-1)(r=0.9999)、0.62~6.24μg·mL^(-1)(r=0.9999)与峰面积的线性关系良好;平均加样回收率(n=6)分别为98.9%,98.3%,98.1%,98.2%,98.6%,99.1%和98.2%,RSD均小于1.5%。24批心通颗粒供试样品中,上述葛根素等7个成分的含量测定结果(n=6)依次为7.813~8.338、1.834~2.119、0.336~0.405、0.611~0.764、3.018~3.753、0.445~0.554和0.139~0.174 mg·g^(-1)。结论:建立的UPLC波长切换法快速、简便而准确,可用于心通颗粒的质量控制。

关键词：心通颗粒葛根素大豆苷 2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷柚皮苷丹酚酸B 淫羊藿苷丹参酮ⅡA 超高效液相色谱

基于网络药理学和实验验证的荆防合剂有效成分抗炎作用机制研究

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中国中药杂志 2022年第20期47卷 5481-5487页

作者：冯群孙成宏李市荣李翔子肖敏赵涛张贵民中药制药共性技术国家重点实验室山东临沂276006 鲁南制药集团股份有限公司新药药理中心山东临沂273400

基于网络药理学及动物实验探讨荆防合剂的网络调控靶标及抗炎作用机制。通过中药系统药理分析平台筛选荆防合剂的活性成分及其对应的靶点,通过检索GeneCards和DisGeNET数据库收集炎症相关的靶点,进而得到荆防合剂活性成分抗炎作用的相... 详细信息

基于网络药理学及动物实验探讨荆防合剂的网络调控靶标及抗炎作用机制。通过中药系统药理分析平台筛选荆防合剂的活性成分及其对应的靶点,通过检索GeneCards和DisGeNET数据库收集炎症相关的靶点,进而得到荆防合剂活性成分抗炎作用的相关靶点;通过STRING数据库进行蛋白互作分析,并构建蛋白相互作用网络;通过DAVID数据库对活性成分的炎症靶点进行基因本体论(GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。结果发现,荆防合剂中159个潜在活性成分,得到276个相关联的靶点,与664个炎症相关靶点取交集,获得90个荆防合剂活性成分抗炎作用的靶点。蛋白相互作用网络分析显示,蛋白激酶B(AKT1)、胱天蛋白酶3(CASP3)、白细胞介素-1β(IL1B)、环加氧酶2(PTGS2)、肿瘤坏死因子(TNF)等蛋白可能为荆防合剂发挥抗炎作用的关键蛋白;KEGG富集分析得到TNF、核因子κB(NF-κB)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路。通过荨麻疹小鼠模型探讨荆防合剂的抗炎作用,结果显示荆防合剂可以下调TNF信号通路下游p38 MAPK、细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)、NF-κB蛋白磷酸化水平。该研究体现了荆防合剂通过多成分、多靶点发挥抗炎的作用特点,为其深入研究与开发利用提供了科学依据和重要支撑。

关键词：荆防合剂炎症网络药理学荨麻疹 TNF信号通路

基于网络药理学和分子对接探究葛根调控溃疡性结肠炎的分子机制

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现代药物与临床 2022年第3期37卷 474-482页

作者：尹令迪郑雪洁宋丹丹姜明月郝豪奇王永刚鲁南制药集团股份有限公司中药制药共性技术国家重点实验室山东临沂276006

目的通过网路药理学和分子对接探讨葛根调控溃疡性结肠炎的作用机制。方法通过TCMSP数据库、Uniprot数据库检索葛根有效成分及靶点,通过OMIM、DisGeNET、DrugBank及GeneCards数据库检索溃疡性结肠炎的靶点。采用Cytoscape 3.8.2软件... 详细信息

目的通过网路药理学和分子对接探讨葛根调控溃疡性结肠炎的作用机制。方法通过TCMSP数据库、Uniprot数据库检索葛根有效成分及靶点,通过OMIM、DisGeNET、DrugBank及GeneCards数据库检索溃疡性结肠炎的靶点。采用Cytoscape 3.8.2软件构建“药物–成分–靶点–疾病”关系网络,并将葛根调控溃疡性结肠炎的相关靶点基因导入String数据库构建蛋白互作(PPI)网络。通过Metascape数据库进行基因本体论(GO)和京都基因和基因组百科全书(KEGG)基因富集分析,得到葛根调控溃疡性结肠炎的潜在作用通路,再通过分子对接验证活性成分与核心靶点的结合能力。结果从葛根中筛选出5个潜在的活性成分,共有60个靶点作用于溃疡性结肠炎,葛根成分靶点中拓扑分析和通路富集分析发现葛根可通过炎症相关靶点及作用通路发挥治疗溃疡性结肠炎的作用;分子对接结果显示,葛根素和刺芒柄花素与关键靶点蛋白(PTGS2、JUN、TNF、STAT3、PTGS2、JUN)的结合能力较强。结论葛根调控溃疡性结肠炎具有可行性,可与其他药物配伍治疗溃疡性结肠炎。

关键词：葛根溃疡性结肠炎网络药理学分子对接葛根素刺芒柄花素

基于BDNF/TrkB/CREB通路探讨参苓开心颗粒的抗抑郁作用机制

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中国中药杂志 2023年第8期48卷 2184-2192页

作者：徐燕刘冬光宁停波朱建国姚茹孟雪姚景春赵文学鲁南制药集团股份有限公司新药药理中心山东临沂276006 中药制药共性技术国家重点实验室山东临沂276006

研究参苓开心颗粒(Shenling Kaixin Granules)对慢性不可预知性温和应激(chronic unpredictable mild stress,CUMS)模型大鼠的抗抑郁作用机制。将90只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、舒肝解郁胶囊(110 mg·kg^(-1))组及参苓开心颗粒... 详细信息

研究参苓开心颗粒(Shenling Kaixin Granules)对慢性不可预知性温和应激(chronic unpredictable mild stress,CUMS)模型大鼠的抗抑郁作用机制。将90只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、舒肝解郁胶囊(110 mg·kg^(-1))组及参苓开心颗粒低(90 mg·kg^(-1))、中(180 mg·kg^(-1))、高(360 mg·kg^(-1))剂量组,通过CUMS法复制抑郁大鼠模型,实验结束后通过糖水偏好、旷场、高架十字迷宫及强迫游泳等实验评估大鼠行为学变化;ELISA检测血清白细胞介素1β(interleukin 1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)、脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)、5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)含量,检测海马CA1区超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)活性;苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色检测海马CA1区病理变化;Western blot检测海马CA1区神经生长因子(nerve growth factor,NGF)、BDNF、酪氨酸激酶受体B(p-TrkB/TrkB)、环磷腺苷效应元件结合蛋白(p-CREB/CREB)、核因子E2相关因子2(nuclear factor E2 related factor 2,Nrf2)、血红素加氧酶1(heme oxygenase 1,HO-1)、B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)/Bcl2关联X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)、胱天蛋白酶3(caspase-3)表达水平的变化。结果显示,与对照组相比,模型组大鼠糖水偏好减少,旷场实验进入中央次数、中央时间及运动总距离缩短,高架十字迷宫实验进入开臂次数及时间百分比减少,强迫游泳实验不动次数及时间增加;血清IL-1β、TNF-α含量增加,BDNF、5-HT含量下降;海马CA1区SOD、CAT活性下降,NGF、BDNF、p-TrkB/TrkB、p-CREB/CREB、HO-1、Bcl-2/Bax表达下调,Nrf2核转移降低,caspase-3表达上调。与模型组相比,各给药组大鼠糖水偏好系数、进入中央次数、中央时间、运动总距离、进入开臂次数及时间百分比均增加,强迫游泳不动次数与时间均缩短;血清IL-1β、TNF-α含量下降,BDNF、5-HT含量增加;海马CA1区SOD、CAT活性增强;NGF、BDNF、p-TrkB/TrkB、p-CREB/CREB、HO-1、Bcl-2/Bax表达上调,Nrf2核转移增加,caspase-3表达下调。综上表明,参苓开心颗粒可能通过激活BDNF/TrkB/CREB通路增加Nrf2核转移,降低海马氧化应激损伤,抑制caspase-3活性,降低海马神经细胞的凋亡,发挥抗抑郁作用。

关键词：参苓开心颗粒抑郁慢性不可预知性温和应激(CUMS) BDNF/TrkB/CREB通路 Nrf2/HO-1通路 caspase-3通路

人参皂苷Re对帕金森病果蝇模型的脑神经保护作用机制

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中国中药杂志 2023年第7期48卷 1927-1935页

作者：徐燕孟雪赵文学刘冬光朱建国姚茹姚景春张贵民鲁南制药集团股份有限公司新药药理中心山东临沂276006 中药制药共性技术国家重点实验室山东临沂276006

探究人参皂苷Re(ginsenoside Re, GS-Re)对鱼藤酮(rotenone, Rot)诱导果蝇帕金森病(Parkinson′s disease, PD)模型脑神经的保护作用机制。利用Rot建立果蝇PD模型,对其进行分组给药(0.1、0.4、1.6 mmol·L^(-1)GS-Re;80μmol·L^(-1)L-dopa),通过功能表型实验检测果蝇寿命及爬行能力,ELISA检测果蝇大脑抗氧化活力(CAT、MDA、ROS、SOD含量)、多巴胺(dopamine, DA)含量及线粒体功能(ATP含量、NDUFB8Ⅰ活性、SDHBⅡ活性),免疫荧光检测果蝇大脑DA神经元数量;Western blot检测果蝇大脑NDUFB8Ⅰ、SDHBⅡ、Cyt C、Nrf2、HO^(-1)、Bcl-2/Bax、cleaved caspase-3/caspase-3表达水平的变化。结果显示,与正常组相比,以475μmol·L^(-1)Rot(IC50)建立果蝇PD模型,果蝇存活率显著下降,并表现出明显的运动功能障碍,果蝇脑内DA含量及神经元数量均显著降低,脑内ROS生成量、MDA含量升高,SOD含量、CAT含量下降,ATP含量、NDUFB8Ⅰ活性、SDHBⅡ活性显著下降,NDUFB8Ⅰ、SDHBⅡ、Bcl-2/Bax表达显著下调,Cyt C从线粒体向胞浆大量释放,Nrf2核转移降低,cleaved caspase-3/caspase-3表达显著上调,给予GS-Re(0.1、0.4、1.6 mmol·L^(-1))干预后,显著提高了PD果蝇的存活率,改善了果蝇的运动功能障碍,增加了脑内DA含量,减轻了DA神经元的丢失,降低脑内ROS生成量及MDA含量,增加SOD含量及CAT含量,提高脑内抗氧化活力,维护了线粒体功能稳态,表现为ATP含量、NDUFB8Ⅰ活性、SDHBⅡ活性显著增加,NDUFB8Ⅰ、SDHBⅡ、Bcl-2/Bax表达显著上调,显著降低胞浆中Cyt C的表达水平,Nrf2核转移增加,cleaved caspase-3/caspase-3表达显著下调。综上表明,GS-Re可明显改善Rot诱导的果蝇脑神经毒性作用,其机制可能是GS-Re通过维护线粒体功能稳态,激活Keap1-Nrf2-ARE信号通路,提高脑神经元抗氧化能力,进而抑制线粒体介导的caspase-3信号通路,抑制神经元细胞的凋亡,从而发挥神经保护作用。

关键词：人参皂苷Re 帕金森病果蝇脑神经氧化应激线粒体稳态

开心散抗抑郁作用的靶点群发现及分子机制研究

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中国中药杂志 2023年第2期48卷 472-480页

作者：杨倬卓芳芳张贵民孙成宏屠鹏飞姚景春曾克武北京大学药学院天然药物及仿生药物国家重点实验室北京100191 鲁南制药集团股份有限公司中药制药共性技术国家重点实验室山东临沂276006

基于靶点“钩钓”策略鉴定开心散在脑组织中的抗抑郁靶点群,探索靶点群相关药理学信号通路,诠释开心散抗抑郁的分子机制。通过慢性不可预见性温和应激(CUMS)方式建立Balb/c小鼠抑郁模型,以糖水偏好及强迫游泳行为学实验评价开心散抗抑... 详细信息

基于靶点“钩钓”策略鉴定开心散在脑组织中的抗抑郁靶点群,探索靶点群相关药理学信号通路,诠释开心散抗抑郁的分子机制。通过慢性不可预见性温和应激(CUMS)方式建立Balb/c小鼠抑郁模型,以糖水偏好及强迫游泳行为学实验评价开心散抗抑郁作用;进而利用光交联反应将开心散药效组分键合到磁性微球表面,形成开心散成分芯片,从抑郁小鼠脑皮层、丘脑、海马组织中捕获直接作用靶点蛋白,并通过液相色谱高分辨质谱联用(LC-MS/MS)进行鉴定;利用Cytoscape软件进行靶点蛋白通路富集分析,同时通过免疫组化和蛋白免疫印记等方法对可能的靶点生物学功能进行验证。研究发现,开心散对抑郁小鼠的行为学指标有明显改善作用;靶点鉴定实验发现开心散药效组分在皮层、丘脑和海马组织中的潜在作用靶点分别有64、91和44个,靶点功能主要与加压素调控的水重吸收、沙门菌感染、甲状腺激素合成等信号通路相关。免疫组化和免疫印记等分析表明,开心散上调了抑郁小鼠脑皮层中加压素(AVP)的表达,上调了小鼠丘脑中热休克蛋白60(HSP60)、细胞色素C氧化酶4(COX4)、促甲状腺激素释放激素(TRH)的表达,并下调了丘脑中的肿瘤坏死因子α(TNF-α)及NF-κB p65的表达。因此,开心散可能调控了皮层中的加压素信号通路,以及丘脑中的能量代谢、甲状腺激素、炎症反应等信号通路发挥抗抑郁作用,而对海马影响较弱。

关键词：抑郁开心散靶点鉴定神经炎症能量代谢甲状腺激素

人参皂苷Re对鱼藤酮致SH-SY5Y细胞帕金森病模型的保护作用机制

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中草药 2023年第11期54卷 3548-3558页

作者：赵文学徐燕刘冬光孟雪朱建国姚茹姚景春张贵民鲁南制药集团股份有限公司新药药理中心山东临沂276006 中药制药共性技术国家重点实验室山东临沂276006

目的探究人参皂苷Re对鱼藤酮诱导的SH-SY5Y细胞帕金森病(Parkinson’s disease,PD)模型的保护作用机制。方法利用0.3μmol/L鱼藤酮建立SH-SY5Y细胞PD模型,给予2.5、5μmol/L人参皂苷Re或10μmol/L左旋多巴(levodopa,L-DOPA)处理24 h,通过CCK-8试剂盒检测细胞存活率;流式细胞仪检测细胞周期、凋亡、线粒体膜电位及活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量变化;能量代谢分析仪检测细胞糖酵解功能及线粒体氧化磷酸化功能;ELISA检测细胞内三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)含量变化;免疫荧光检测细胞内Parkin和PTEN诱导性激酶蛋白-1(PTEN induced putative kinase-1,Pink-1)的表达情况;Western blotting检测细胞内Parkin、Pink-1、细胞色素C(cytochrome C,Cyt-C)、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cysteinasparate protease-3,Caspase-3)、cleaved Caspase-3、核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)、血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)、谷氨酸半胱氨酸连接酶亚基(glutamate-cysteine ligase catalytic subunit,GCLC)和NADPH醌氧化还原酶-1(NADPH quinine oxidoreductase-1,NQO-1)蛋白表达的变化。结果以0.3μmol/L鱼藤酮建立SH-SY5Y细胞PD模型,细胞存活率显著下降(P<0.01),细胞阻滞于G_(0)/G_(1)期,细胞凋亡比例显著升高(P<0.01),线粒体膜电位及ATP含量显著下降(P<0.01),ROS生成量显著升高(P<0.01),糖酵解PER值、细胞的最大呼吸能力、备用呼吸能力及ATP合成能力均显著下降(P<0.01),Parkin、Pink-1、Bcl-2、HO-1、GCLC、NQO1蛋白表达显著下调(P<0.01),Cyt-C从线粒体向胞质大量释放(P<0.01),Nrf2核转移降低(P<0.01),Bax、cleaved Caspase-3蛋白表达显著上调(P<0.01);给予L-DOPA或人参皂苷Re干预后,明显增加细胞存活率(P<0.05、0.01),降低细胞凋亡率(P<0.01),减轻细胞G_(0)/G_(1)期阻滞作用(P<0.05、0.01),增强细胞糖酵解PER值、细胞的最大呼吸能力、备用呼吸能力及ATP合成能力(P<0.05、0.01),维护了线粒体功能稳态,表现为线粒体膜电位、ATP含量显著增加(P<0.05、0.01),ROS生成量显著减少(P<0.05、0.01),Parkin、Pink-1、Bcl-2、HO-1、GCLC、NQO1表达显著上调(P<0.05、0.01),抑制Cyt-C从线粒体向细胞质释放(P<0.05、0.01),Nrf2核转移增加(P<0.05、0.01),Bax、cleaved Caspase-3表达显著下调(P<0.05、0.01)。结论人参皂苷Re可明显改善鱼藤酮诱导的细胞毒性,其机制可能是人参皂苷Re通过活化Parkin及Pink-1蛋白,维护线粒体功能稳态,激活Kelch样ECH相关蛋白1(Kelch like ECH associated protein 1,Keap1)-Nrf2-抗氧化反应元件(antioxidant response element,ARE)信号通路,抑制线粒体介导的Caspase级联反应,从而抑制神经细胞凋亡,发挥神经保护作用。

关键词：人参皂苷Re 帕金森病 SH-SY5Y细胞能量代谢线粒体稳态氧化应激

小儿消积止咳口服液抗肺炎靶点发现及分子机制研究

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中国中药杂志 2022年第11期47卷 3007-3014页

作者：杨倬姚璐罗倩微姚景春孙成宏张贵民曾克武北京大学药学院天然药物及仿生药物国家重点实验室北京100191 鲁南制药集团股份有限公司中药制药共性技术国家重点实验室山东临沂276006

利用靶点“钩钓”策略鉴定小儿消积止咳口服液在肺部的直接靶点群,探究靶点群调控的信号通路,阐释小儿消积止咳口服液治疗肺炎的作用机制。基于二苯甲酮的光交联活性,制备得到键合小儿消积止咳口服液总提取物的磁性纳米微球,利用该微球... 详细信息

利用靶点“钩钓”策略鉴定小儿消积止咳口服液在肺部的直接靶点群,探究靶点群调控的信号通路,阐释小儿消积止咳口服液治疗肺炎的作用机制。基于二苯甲酮的光交联活性,制备得到键合小儿消积止咳口服液总提取物的磁性纳米微球,利用该微球从细菌脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导的小鼠肺炎组织裂解液中捕获靶点蛋白,并通过LC-MS/MS对捕获的靶点蛋白进行鉴定。利用Cytoscape软件以及KEGG分析和STRING分析,探究靶点蛋白群之间的互作关系以及相关信号通路,最后利用免疫组化、RT-PCR等方法,对靶点蛋白群可能的生物学功能进行验证。通过LC-MS/MS共计发现62个小儿消积止咳口服液在肺部的潜在作用靶点,STRING分析和KEGG分析发现靶点蛋白群作用的信号通路主要有Ras信号通路、白细胞跨内皮迁移信号通路、线粒体自噬信号通路、MAPK信号通路、血小板激活信号通路和肌动球蛋白结构组织信号通路等,这些信号通路主要与炎症、微循环、纤维化、能量代谢等功能有关。对靶点蛋白群的生物学验证结果表明小儿消积止咳口服液上调了小鼠肺炎组织中CD31、HSP60的含量和ATP5b mRNA的表达水平,下调了IL-6、TNF-α、COL1A1的含量和组织纤维化程度,确证了小儿消积止咳口服液具有抗炎、改善微循环、抑制肺纤维化及增强肺组织能量代谢的潜在作用。研究结果从靶点源头诠释了小儿消积止咳口服液治疗肺炎的作用机制,并可进一步指导其临床精准用药。

关键词：肺炎小儿消积止咳口服液靶点鉴定微循环纤维化