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猪腹膜间皮细胞的分离培养及初步应用

畜牧兽医学报 2024年第3期55卷 1249-1256页

作者：黄媛媛王佳陈嘉瑜甘源袁厅冯志新邵国青王先炜熊祺琰南京农业大学动物医学院南京210095 江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室南京210014 兽用生物制品(泰州)国泰技术创新中心泰州225300

本研究旨在建立猪原代腹膜间皮细胞(peritoneal mesothelial cell, PMC)的分离和体外培养方法,并将其初步应用于猪鼻支原体(Mycoplasma hyorhinis,Mhr)体外感染细胞模型。采用0.1%Ⅰ型胶原酶消化猪大网膜组织分离猪PMC细胞,通过形态学... 详细信息

本研究旨在建立猪原代腹膜间皮细胞(peritoneal mesothelial cell, PMC)的分离和体外培养方法,并将其初步应用于猪鼻支原体(Mycoplasma hyorhinis,Mhr)体外感染细胞模型。采用0.1%Ⅰ型胶原酶消化猪大网膜组织分离猪PMC细胞,通过形态学、免疫学方法鉴定细胞。使用Mhr感染PMC细胞,观察细胞形态变化,并利用乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)法检测细胞活性损伤情况。结果显示,倒置相差显微镜观察显示,分离培养的细胞早期呈拉网状,5~8 d后生长可达融合状态,细胞大小均一,呈多边形铺路石状;间接免疫荧光试验结果显示,细胞波形蛋白、角蛋白-18抗原呈阳性,第Ⅷ因子相关抗原、白细胞CD45抗原呈阴性;扫描电镜下可见细胞表面微绒毛。结果证实分离培养的细胞为猪PMC细胞,纯度达95%以上。Mhr感染后,光镜下可观察到细胞发生明显皱缩,感染组细胞的LDH释放量较对照组细胞显著升高。本研究成功建立了猪原代PMC细胞的分离培养方法,并初步用于Mhr体外感染,为研究Mhr等引起浆膜炎的病原与宿主的互作机制提供了体外细胞模型。

关键词：腹膜间皮细胞原代培养猪猪鼻支原体

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除菌过滤在轮状病毒疫苗工艺中的初步应用

中国医药工业杂志 2024年

作者：童彦军陈同伏署光贺倩马超李佳林兰州生物制品研究所有限责任公司疫苗一室甘肃省疫苗工程技术研究中心

为了考察三价轮状病毒疫苗半成品工艺优化中除菌过滤对产品质量属性的影响，评估除菌过滤在半成品工艺中应用的可行性，该研究分2个阶段进行了22批的半成品过滤试验。试验滤膜孔径为0.22 μm，材质为聚偏二氟乙烯，考察除菌过滤对试验... 详细信息

为了考察三价轮状病毒疫苗半成品工艺优化中除菌过滤对产品质量属性的影响，评估除菌过滤在半成品工艺中应用的可行性，该研究分2个阶段进行了22批的半成品过滤试验。试验滤膜孔径为0.22 μm，材质为聚偏二氟乙烯，考察除菌过滤对试验产品病毒滴度及外观、pH、渗透压和澄清度的影响，并对拟选定的滤膜材质进行细菌截留试验。结果显示，采用聚偏二氟乙烯、孔径为0.22 μm的除菌滤器进行三价轮状病毒疫苗半成品除菌过滤后，对试验产品的病毒滴度和理化特性如外观、pH和渗透压的影响差异性不显著(P>0.05)，但能显著提高试验产品的澄清度(P＜0.05)。该研究为三价轮状病毒疫苗半成品配制工艺增加除菌过滤积累了关键数据和经验。

关键词：三价轮状病毒疫苗半成品除菌过滤细菌截留试验

新的犬ANP32A的克隆及其在流感病毒跨物种感染中的作用

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畜牧兽医学报 2024年第2期55卷 660-669页

作者：毕振威王文杰刘雅坤彭大新江苏省农业科学院兽医研究所农业农村部兽用生物制品工程技术重点实验室南京210014 扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室扬州225009 兽用生物制品(泰州)国泰技术创新中心泰州225300

物种特异的酸性核磷蛋白32A(acidic nuclear phosphoprotein 32A,ANP32A)调节不同宿主A型流感病毒RNA聚合酶活性。为分析犬ANP32A(canine ANP32A,caANP32A)的物种特异性及其在流感病毒跨物种感染中的作用,利用RT-PCR方法从MDCK细胞以及... 详细信息

物种特异的酸性核磷蛋白32A(acidic nuclear phosphoprotein 32A,ANP32A)调节不同宿主A型流感病毒RNA聚合酶活性。为分析犬ANP32A(canine ANP32A,caANP32A)的物种特异性及其在流感病毒跨物种感染中的作用,利用RT-PCR方法从MDCK细胞以及犬肺、脾、肠不同组织中扩增和克隆caANP32A;激光共聚焦试验分析caANP32A与A型流感病毒RNA聚合酶的相互作用;双荧光素酶报告基因试验检测过表达caANP32A对A型流感病毒RNA聚合酶活性的影响。结果显示,从MDCK细胞中扩增到新的caANP32A,比已报道的caANP32A多出4个氨基酸插入,从犬肺、脾和肠组织中均扩增到该新的caANP32A;对caANP32A的基因进行测序分析,发现该新的caANP32A不是由mRNA选择性剪接形成的;激光共聚焦试验发现,新caANP32A与H3N2 CIV的RNA聚合酶在细胞核中共定位;聚合酶活性试验显示,在哺乳动物细胞过表达新caANP32A不能促进H9N2禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)和H3N2犬流感病毒(canine influenza virus,CIV)的RNA聚合酶活性,而鸡ANP32A(chANP32A)能够促进。本研究克隆的新caANP32A较以往报道,在176至179位存在四个氨基酸LSLV的插入,但新caANP32A对AIV的RNA聚合酶活性仍然有物种限制性且该新的caANP32A也未增强CIV的RNA聚合酶活性。本研究为进一步解析犬在流感病毒跨物种感染中的作用提供依据。

关键词： A型流感病毒(IAV) 犬酸性核磷蛋白32A(caANP32A) RNA聚合酶活性哺乳动物适应性

^(60)Co-γ射线和电子束辐照对辣椒干制品颜色的影响

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辐射研究与辐射工艺学报 2024年第2期42卷 89-95页

作者：张祺玲徐远芳周毅吉易靖超郭峰张勇邓超刘涛李文革湖南省核农学与航天育种研究所湖南省农业生物辐照工程技术研究中心生物辐照技术湖南省工程研究中心长沙410125

本研究通过比较分析色差、非酶褐变值、色价和R/Y值来探讨^(60)Co-γ射线和电子束辐照对辣椒干制品颜色的影响。实验中设定不同剂量(0 kGy、3 kGy、7 kGy、16 kGy)处理和不同贮藏时间(0 d、30 d)。结果显示:在0 d贮藏条件下,经过16 kGy ... 详细信息

本研究通过比较分析色差、非酶褐变值、色价和R/Y值来探讨^(60)Co-γ射线和电子束辐照对辣椒干制品颜色的影响。实验中设定不同剂量(0 kGy、3 kGy、7 kGy、16 kGy)处理和不同贮藏时间(0 d、30 d)。结果显示:在0 d贮藏条件下,经过16 kGy ^(60)Co-γ射线处理的干辣椒样品a*值减小13%,非酶褐变值增加12%,R/Y值降低16%;而经过7kGy电子束处理的干辣椒样品a*值、b*值和L*值明显低于经过^(60)Co-γ射线处理的样品。此外,无论是经过^(60)Co-γ射线还是电子束处理后,随着剂量增加,0 d贮藏条件下辣椒粉样品的色差增加,非酶褐变值降低;在16kGy剂量下,经过^(60)Co-γ射线处理得到的辣椒粉样品ΔE*高于电子束处理得到的样品,并且非酶褐变值明显低于电子束处理。在贮藏30d后,经过7kGy剂量的^(60)Co-γ射线和电子束处理得到的辣椒粉样品ΔE*显著高于其他剂量组,并且以经过7 kGy ^(60)Co-γ射线处理得到的样品ΔE*最高。结果提示,与^(60)Co-γ射线相比电子束对于辣椒干制品颜色产生更小程度的影响;辐照对于辣椒粉的颜色影响大于干辣椒。

关键词： ^(60)Co-γ射线辐照电子束辐照干辣椒辣椒粉颜色变化

两种细菌发酵豆粉粗多糖体外降血糖、降血脂活性比较

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食品工业科技 2024年第12期45卷 140-150页

作者：屈雅宁李慧向大松郭瑞曾长立王红波江汉大学生命科学学院食品营养与安全研究中心湖北武汉430056 湖北省豆类(蔬菜)植物工程技术研究中心湖北武汉430056 湖北省汉江流域特色生物资源保护开发与利用工程技术研究中心湖北武汉430056

枯草芽孢杆菌和干酪乳杆菌常用于发酵豆制品的生产。为研究这两种细菌发酵对豆粉粗多糖降血糖、降血脂生物活性的影响。本研究制备了8种不同的两种细菌发酵豆粉的粗多糖样品,比较分析了发酵前后豆粉粗多糖的组成、水溶能力和体外降血糖... 详细信息

枯草芽孢杆菌和干酪乳杆菌常用于发酵豆制品的生产。为研究这两种细菌发酵对豆粉粗多糖降血糖、降血脂生物活性的影响。本研究制备了8种不同的两种细菌发酵豆粉的粗多糖样品,比较分析了发酵前后豆粉粗多糖的组成、水溶能力和体外降血糖降血脂活性变化差异。结果表明:两种细菌发酵豆粉的粗多糖中糖醛酸含量均增加,且枯草芽孢杆菌发酵豆粉的粗多糖糖醛酸含量(4.05%~22.46%)显著(P生物活性。干酪乳杆菌发酵大豆、豇豆和蚕豆豆粉的粗多糖对α-淀粉酶抑制能力显著(P研究为开发具有降血糖降血脂功能的富含活性多糖的发酵豆类食品提供了理论基础。

关键词：豆粉发酵多糖降糖活性降脂活性

海洋蛋白源解酒护肝水解物的筛选制备及功效评价

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食品与发酵工业 2024年

作者：冯杨梦晓任青兮刘双平周志磊姬中伟毛健粮食发酵与食品生物制造国家工程研究中心(江南大学) 江南大学食品学院江苏省生物活性制品加工工程技术研究中心江苏省食品安全与质量控制协同创新中心江南大学(绍兴)产业技术研究院国家黄酒工程技术研究中心

以8种海洋生物为原料，通过双酶酶解制备了336种样品，从中筛选出综合效果最好的目标酶解物，海参水解物（Stichopus japonicus peptides，SJPs），即海参先后经过碱性蛋白酶和风味蛋白酶酶解的产物。SJPs拥有较高的体外乙醇脱氢酶激活... 详细信息

以8种海洋生物为原料，通过双酶酶解制备了336种样品，从中筛选出综合效果最好的目标酶解物，海参水解物（Stichopus japonicus peptides，SJPs），即海参先后经过碱性蛋白酶和风味蛋白酶酶解的产物。SJPs拥有较高的体外乙醇脱氢酶激活率（118.86%）、疏水性氨基酸含量（45.97%）、小分子肽含量（81.04%）和胃肠道消化稳定性。建立小鼠急性酒精中毒模型和早期酒精肝病模型，分别评价SJPs解酒和护肝活性。结果表明，饮酒前口服SJPs显著延长小鼠醉酒潜伏期并缩短睡眠期，增强了对急性酒精毒性的耐受性；此外，SJPs通过激活酒精代谢酶系，加速酒精及其代谢物的清除，降低了肝脏氧化应激和脂肪堆积，对早期肝损伤具有显著保护作用。综上所述，SJPs可能作为功能食品潜在成分发挥解酒护肝作用。

关键词：海参水解物解酒护肝双酶酶解乙醇脱氢酶激活率酒精性肝损伤

四种过氧化物酶体同工酶在毕赤酵母甲醇代谢中的作用研究

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食品与发酵工业 2024年第3期50卷 9-15,I0001页

作者：邹潇毅王世杰杨艳坤白仲虎江南大学粮食发酵与食品生物制造国家工程研究中心江苏无锡214122 江南大学生物工程学院江苏无锡214122 江苏省生物活性制品加工工程技术研究中心江苏无锡214122

利用毕赤酵母进行甲醇生物转化具有广泛的应用前景。为了深入了解该酵母甲醇代谢机理,该文以甲醇利用途径的4个过氧化物酶体同工酶为研究对象展开研究,分别为D-核酮糖-5-磷酸-3-表异构酶2(D-ribulose-5-phosphate 3-epimerase,Rpe1-2),... 详细信息

利用毕赤酵母进行甲醇生物转化具有广泛的应用前景。为了深入了解该酵母甲醇代谢机理,该文以甲醇利用途径的4个过氧化物酶体同工酶为研究对象展开研究,分别为D-核酮糖-5-磷酸-3-表异构酶2(D-ribulose-5-phosphate 3-epimerase,Rpe1-2),核糖-5-磷酸异构酶2(ribose-5-phosphate isomerase,Rki1-2),转醛醇酶2(transaldolase,Tal1-2),果糖-1,6-二磷酸醛缩酶2(fructose-1,6-bisphosphate aldolase,Fba1-2)。在验证其参与甲醇代谢的基础上,分别对4个酶基因进行单敲除、四敲除,并在四敲除菌中分别进行细胞质同工酶及过氧化物酶体同工酶的回补实验。结果表明4敲除菌在甲醇培养基中受到严重的生长抑制。而单敲除菌中,Fba1-2的缺失对菌株在甲醇培养基中的生长表型影响最大;同时,回补Fba1-2也能最大程度地恢复4敲除菌株的生物量。综上,Fba1-2是甲醇同化途径中的关键酶,且同化途径的过氧化物酶体区室化对甲醇代谢途径至关重要。此外,景天庚酮糖-1,7-二磷酸酶(sedoheptulose-1,7-bisphosphatase,Shb17)基因单敲除菌和TAL1-2基因单敲除菌的表型对比结果表明,更改的卡尔文循环是甲醇代谢中木酮糖-5-磷酸(xylulose 5-phosphate,XU5P)再生的主要途径。该研究可为后续优化毕赤酵母甲醇利用途径提供理论依据。

关键词：毕赤酵母甲醇利用途径同化同工酶区室化木酮糖-5-磷酸

常压室温等离子体结合高通量筛选技术在微生物育种方面的研究进展

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微生物学通报 2024年

作者：康竞艺艾奕伶刘秀霞白仲虎江南大学生物工程学院江南大学粮食发酵与食品生物制造国家工程研究中心江苏省生物活性制品加工工程技术研究中心

常压室温等离子( atmospheric and room temperature plasma，ARTP) 是一种新型诱变技术，具有诱变速度快、诱变条件温和、环境友好等特点。由于ARTP诱变的突变体具有高突变频率和良好的遗传稳定性，因此在微生物育种领域应用广泛。本... 详细信息

常压室温等离子( atmospheric and room temperature plasma，ARTP) 是一种新型诱变技术，具有诱变速度快、诱变条件温和、环境友好等特点。由于ARTP诱变的突变体具有高突变频率和良好的遗传稳定性，因此在微生物育种领域应用广泛。本文综述了近年来ARTP诱变技术在微生物育种中取得的进展、诱变后突变菌株的筛选策略和ARTP诱导微生物发生突变的机制，并对ARTP目前在微生物诱变育种中存在的问题进行讨论。

关键词： ARTP 微生物育种高通量筛选策略突变机制

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犬PD-1单克隆抗体的筛选与鉴定

中国兽药杂志 2024年第5期58卷 10-16页

作者：王卓徐司雨夏兴霞李志敏毕振威钱晶莫菲诸玉梅王永山孙树民谭业平内蒙古民族大学内蒙古通辽028000 江苏省农业科学院兽医研究所农业农村部兽用生物制品工程技术重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心南京210014

为筛选犬程序性死亡受体1(cPD-1)单克隆抗体,以原核表达并纯化复性的cPD-1胞外区蛋白为靶抗原免疫BALB/c小鼠,应用单克隆抗体杂交瘤细胞技术和间接ELISA方法,经3轮轮筛选和克隆化,获得1株能稳定分泌抗cPD-1单克隆抗体的杂交瘤细胞株1F9... 详细信息

为筛选犬程序性死亡受体1(cPD-1)单克隆抗体,以原核表达并纯化复性的cPD-1胞外区蛋白为靶抗原免疫BALB/c小鼠,应用单克隆抗体杂交瘤细胞技术和间接ELISA方法,经3轮轮筛选和克隆化,获得1株能稳定分泌抗cPD-1单克隆抗体的杂交瘤细胞株1F9。间接ELISA检测显示1F9杂交瘤细胞株连续传代培养能稳定分泌单克隆抗体,效价达到1∶2048,亚型鉴定重链为IgG1,轻链为κ;以HEK293细胞表达cPD-1胞外区蛋白为检测抗原,Western-blot和间接免疫荧光试验进行鉴定,结果显示1F9单克隆抗体能特异性结合cPD-1胞外区蛋白。本研究通过小鼠杂交瘤技术成功筛选到1株鼠源cPD-1单克隆抗体。

关键词：犬 PD-1 单克隆抗体肿瘤