猪腹膜间皮细胞的分离培养及初步应用

作     者：黄媛媛 王佳 陈嘉瑜 甘源 袁厅 冯志新 邵国青 王先炜 熊祺琰 HUANG Yuanyuan;WANG Jia;CHEN Jiayu;GAN Yuan;YUAN Ting;FENG Zhixin;SHAO Guoqing;WANG Xianwei;XIONG Qiyan

作者机构：南京农业大学动物医学院南京210095 江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室南京210014 兽用生物制品(泰州)国泰技术创新中心泰州225300 

出 版 物：《畜牧兽医学报》 (ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA)

年 卷 期：2024年第55卷第3期

页      面：1249-1256页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 071002[理学-动物学] 

基　　金：国家重点研发计划(2022YFD1800903) 江苏省农业科技自主创新资金(CX(22)3195) 国家自然科学基金项目(32102675) 

主　　题：腹膜间皮细胞 原代培养 猪 猪鼻支原体 

摘      要：本研究旨在建立猪原代腹膜间皮细胞(peritoneal mesothelial cell, PMC)的分离和体外培养方法,并将其初步应用于猪鼻支原体(Mycoplasma hyorhinis,Mhr)体外感染细胞模型。采用0.1%Ⅰ型胶原酶消化猪大网膜组织分离猪PMC细胞,通过形态学、免疫学方法鉴定细胞。使用Mhr感染PMC细胞,观察细胞形态变化,并利用乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)法检测细胞活性损伤情况。结果显示,倒置相差显微镜观察显示,分离培养的细胞早期呈拉网状,5~8 d后生长可达融合状态,细胞大小均一,呈多边形铺路石状;间接免疫荧光试验结果显示,细胞波形蛋白、角蛋白-18抗原呈阳性,第Ⅷ因子相关抗原、白细胞CD45抗原呈阴性;扫描电镜下可见细胞表面微绒毛。结果证实分离培养的细胞为猪PMC细胞,纯度达95%以上。Mhr感染后,光镜下可观察到细胞发生明显皱缩,感染组细胞的LDH释放量较对照组细胞显著升高。本研究成功建立了猪原代PMC细胞的分离培养方法,并初步用于Mhr体外感染,为研究Mhr等引起浆膜炎的病原与宿主的互作机制提供了体外细胞模型。