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胆固醇对脂微球与人血清白蛋白相互作用的影响

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药物评价研究 2024年第8期47卷 1848-1859页

作者：李玲燕吴兴杰陈英王玉娥贺智勇沈祥春陶玲贵州医科大学药学院贵州省特色天然药物资源高效利用工程中心贵州省高等学校天然药物药理与成药性评价特色重点实验室贵州医科大学-贵阳市联合重点实验室天然药物资源优效利用重点实验室贵州贵阳561113

目的研究胆固醇(CH)对脂微球(LM)与人血清白蛋白(HSA)形成蛋白晕的影响。方法采用高速剪切-高压均质两步乳化法制备LM及含CH的CH@LM后,分别将相同体积但不同浓度(8、12、24、36μmol·L^(-1))的HSA溶液与等体积不同质量浓度(10.76、15.3... 详细信息

目的研究胆固醇(CH)对脂微球(LM)与人血清白蛋白(HSA)形成蛋白晕的影响。方法采用高速剪切-高压均质两步乳化法制备LM及含CH的CH@LM后,分别将相同体积但不同浓度(8、12、24、36μmol·L^(-1))的HSA溶液与等体积不同质量浓度(10.76、15.37、26.90、35.87、53.80 mg·mL^(-1))的LM及CH@LM(以LM计)用恒温震荡器孵育不同时间,采用尺寸排阻色谱法分离出含有HSA蛋白晕的LM-HSA和CH@LM-HSA复合物以及过剩的HSA。通过粒径仪检测粒径及聚合物分散性指数(PDI),紫外可见分光光度计检测蛋白晕复合物的紫外图谱,荧光酶标仪检测蛋白晕复合物荧光图谱,分子对接研究油相中辅料的主要成分与HSA的结合能、油相中各辅料之间的结合能,并采用考马斯亮蓝染色对蛋白晕复合物进行表征。结果LM、CH@LM自身稳定性较好,LM与HSA之间存在相互作用,所形成复合物的粒径及PDI具有时间及浓度相关性;加入CH后改变了复合物的粒径随时间的变化模式,同时减弱了由于LM浓度变化引起的与蛋白质之间相互作用的变化。加入CH后HSA自身荧光淬灭程度增强,最大吸收波长蓝移程度增加,表明加入CH后增强了LM与HSA的相互作用程度。CH与HSA的分子对接结合能绝对值最高,且有CH的油相中各辅料分子与分子间对接结合能均高于无CH参与组;LM-HSA及CH@LM-HSA均保留了HSA的特征条带。结论CH增强了LM对HSA的吸附能力,CH与其他辅料分子和蛋白具有更强的结合能力可能是主要原因。

关键词：胆固醇脂微球人血清白蛋白蛋白晕相互作用

白藜芦醇-牛磺脱氧胆酸钠共无定形体系改善溶解度和物理稳定性

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中草药 2024年

作者：李珏姜飞李慧丽沈祥春贺智勇易媛丹刘文陶玲贵州医科大学药学院贵州省特色天然药物资源高效利用工程中心贵州省高等学校天然药物药理与成药性评价特色重点实验室贵州医科大学-贵阳市联合重点实验室天然药物资源优效利用重点实验室贵州省妇幼保健院

目的通过共无定形体系（coamorphoussystem，CAS）来改善和提升白藜芦醇（resveratrol，Res）的溶解度和物理稳定性。方法通过溶剂挥发法进行白藜芦醇-牛磺脱氧胆酸钠（sodiumtaurodeoxycholate，STD）共无定形体系（Res-STD-CAS）制... 详细信息

目的通过共无定形体系（coamorphoussystem，CAS）来改善和提升白藜芦醇（resveratrol，Res）的溶解度和物理稳定性。方法通过溶剂挥发法进行白藜芦醇-牛磺脱氧胆酸钠（sodiumtaurodeoxycholate，STD）共无定形体系（Res-STD-CAS）制备研究，考察了最佳物质的量比；利用粉末X射线衍射、傅里叶变换红外光谱、拉曼光谱、固态核磁、差示扫描量热分析和扫描电子显微镜等技术表征其固态特征，并考察其在不同pH值缓冲液中的溶解度，进一步研究其吸湿性和物理稳定性。结果固态表征结果显示，白藜芦醇与STD形成了具有单一玻璃化转变温度的CAS，且存在分子间氢键作用；溶解度结果显示，在Res-STD-CAS物质的量比为1∶1、1∶2、1∶3的CAS中，白藜芦醇的溶解度均高于其原料药及其物理混合物；在40℃、75%相对湿度条件下，其稳定性高达3个月。结论 Res-STD-CAS大幅提高了白藜芦醇的溶解度，并具有良好的物理稳定性。

关键词：白藜芦醇牛磺脱氧胆酸钠共无定形体系增溶溶解度稳定性溶剂挥发法吸湿性

基于“药辅合一”理念制备1,8-桉叶素自微乳研究

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中药材 2024年 1773-1779页

作者：陈建波蒙运袅梁远现沈祥春陶玲王玉娥魏茂陈贵州医科大学药学院/贵州省特色天然药物资源高效利用工程中心/贵州省高等学校天然药物药理与成药性评价特色重点实验室/贵州医科大学-贵阳市联合重点实验室/天然药物资源优效利用重点实验室贵阳新天药业股份有限公司

目的:利用伪三元相图及星点设计-效应面法,优化1,8-桉叶素（1,8-Cineole,1,8-Cin）作为油相的自微乳递送系统（Self-microemulsion delivery system,SMEDDS）最佳处方并进行药剂学性能表征和乳化剂结合能力。方法:以伪三元相图乳化面积... 详细信息

目的:利用伪三元相图及星点设计-效应面法,优化1,8-桉叶素（1,8-Cineole,1,8-Cin）作为油相的自微乳递送系统（Self-microemulsion delivery system,SMEDDS）最佳处方并进行药剂学性能表征和乳化剂结合能力。方法:以伪三元相图乳化面积为指标,结合自微乳是否分层等现象分别对1,8-Cin SMEDDS进行处方考察,筛选出对处方影响较明显的因素;以平均粒径(D50)、包封率和载药量为评价指标进行因素水平设计,采用星点设计-效应面法优化1,8-Cin加入量和Km对1,8-Cin SMEDDS处方的影响,经二项式及多元线性回归模型拟合建立指标与因素之间的数学关系式,根据数学模型绘制效应面,优化出最佳处方并进行验证;按照最佳处方制备1,8-Cin SMEDDS进行药剂学性能表征,采用分子对接技术考察乳化剂结合能力。结果:得到1,8-Cin SMEDDS最佳处方为:50.0%1,8-Cin、34.2%乳化剂（HS15）、15.8%助乳化剂（EtOH）;为外观呈半透明略带淡蓝色乳光液体,透射电镜（TEM）结果显示为球形且粒径大小分布均匀,D50为（36.00±0.42） nm,多分散指数（PDI）为（0.138±0.03）,Zeta电位为（-5.25±0.19）mV,载药量为（60.47±0.29）mg/g,包封率为（91.48±1.26）%,乳化剂与1,8-Cin分子对接结果表明HS15与1,8-Cin结合能最小。结论:1,8-Cin SMEDDS制备方法简单,重现性好,具有良好的外观形态,载药量较高;乳滴粒径较小且形状良好。该研究为1,8-Cin SMEDDS靶向血管炎症纳米递送系统研究提供了一定参考。

关键词：药辅合一自微乳 1,8-桉叶素伪三元相图星点设计-效应面法

灯盏花乙素-磷脂复合物纳米乳的体内外评价及其改善脂多糖诱导血管内皮损伤的活性分析

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中国实验方剂学杂志 2024年第10期30卷 159-168页

作者：罗田贺智勇茅向军刘学贺井刚支苑沈祥春许乾丽陶玲贵州医科大学贵州省天然药物资源高效利用工程中心贵州省普通高等学校天然产物药理与成药性评价特色重点实验室贵州医科大学-贵阳市联合重点实验室天然药物资源优效利用重点实验室药学院贵阳550025 云岩区人民医院贵阳550003 贵州省药品监督管理局检查中心贵阳550081 贵州省食品药品检验所贵阳550004

目的:评价灯盏花乙素-磷脂复合物纳米乳(SCU-PC-NE)的释放、细胞摄取与组织分布等行为,并探究其改善脂多糖(LPS)诱导血管内皮损伤的作用。方法:分别称取SCU-PC、油酸乙酯、15-羟基硬脂酸聚乙二醇酯、1,2-丙二醇(50、400、514.3、85.7 m... 详细信息

目的:评价灯盏花乙素-磷脂复合物纳米乳(SCU-PC-NE)的释放、细胞摄取与组织分布等行为,并探究其改善脂多糖(LPS)诱导血管内皮损伤的作用。方法:分别称取SCU-PC、油酸乙酯、15-羟基硬脂酸聚乙二醇酯、1,2-丙二醇(50、400、514.3、85.7 mg),制备SCU-PC-NE,并利用透射电镜观察其形态,纳米电位粒度分析仪测定粒径和Zeta电位。采用动态透析法考察SCU-PC-NE体外累积释放度;采用噻唑蓝(MTT)比色法考察SCU-PC-NE对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)活力的影响;以香豆素6为荧光探针,采用荧光倒置显微镜和流式细胞仪考察SCU-PC-NE的体外HUVECs摄取情况;小动物活体成像仪考察近红外荧光染料DiR标记的纳米乳DiR/SCU-PC-NE的组织分布;采用LPS(1 mg·L^(-1))共孵育制备HUVECs炎症损伤模型,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测SCU-PC-NE对其中白细胞介素(IL)-1β及IL-6水平的影响;取18只昆明种雄性小鼠,随机分为空白组、模型组、空白制剂组(等同于高剂量组)、SCU组和SCU-PC-NE低、高剂量组(5、10 mg·kg^(-1)),每组3只,每隔48 h给药组按相应剂量尾静脉给药1次,空白组和模型组给予等体积生理盐水,连续给药4次。除空白组外,各组末次给药前12 h腹腔注射LPS(10 mg·kg^(-1))诱导小鼠血管内皮炎症损伤,采用苏木素-伊红(HE)染色考察SCU-PC-NE对小鼠胸主动脉组织病理变化的影响。结果:形态观察显示,SCU-PC-NE呈淡黄色乳光,大多呈球形,外观圆整,粒径分布较均匀,平均粒径35.31 nm,Zeta电位7.23 mV,包封率75.24%;体外累积释放度考察表明SCU-PC-NE较SCU表现出一定的缓释性能;SCU-PC-NE在质量浓度为1.05~8.4 mg·L^(-1)时细胞存活率均>90%;细胞摄取实验结果表明,与SCU组比较,SCU-PC-NE的细胞摄取能力显著增强(P效果最强(P效果最强(P效果优于SCU组。结论:SCU-PC-NE可促进内皮细胞对药物的摄取,并有效富集在LPS所致的血管内皮损伤部位,其对血管内皮损伤有一定的保护作用,是SCU的良好载体。

关键词：灯盏花乙素磷脂复合物纳米乳脂多糖(LPS) 炎症血管内皮人脐静脉内皮细胞

基于MAFG下调的氧化苦参碱改善胆汁淤积性肝纤维化的研究

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中国医院药学杂志 2024年

作者：郭林林潘迪郑田付凌云徐旖旎廖佳佳钮晓淑沈祥春贵州大学药学院贵州医科大学天然药物资源优效利用重点实验室泰州市药品检验院

目的：研究V-Maf鸟类肌筋膜纤维肉瘤癌基因同源物G（V-Mafavian musculoaponeurotic fibrosarcoma oncogene homolog，MAFG）在氧化苦参碱（oxymatrine，OMT）改善胆汁淤积性肝纤维化中的作用。方法：将6周龄雄性C57BL/6J小鼠随机分为5组，分别为对照组，模型组[采用0.1% 的3，5-二乙氧羰基-1，4-二氢-2，4，6三甲吡啶（3，5-diethoxycarbonyl-1，4-dihydro-2，4，6-collidine，DDC）饲料]，阳性对照组[奥贝胆酸(Obeticholic acid，OCA 5 mg·kg-1)]，OMT低、高剂量组(OMT 25 mg·kg-1和50 mg·kg-1)。每日给药一次，给药27 d后处死小鼠。检测小鼠血清中AST、ALT、TBA和TBIL的水平，采用HE和Masson染色观察小鼠肝组织病理变化和胶原沉积情况，通过免疫组织化学实验观察α平滑肌肌动蛋白（alpha smooth muscle actin，α-SMA）、纤连蛋白（fibronectin，FN）和MAFG的蛋白表达。采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测α-SMA、I型胶原（collagen type I）、III型胶原（collagen type III）、FN以及MAFG的蛋白水平。以转化生长因子1（Transforming Growth Factor-β1，TGF-β1）诱导人肝星状细胞（LX-2）活化建立肝纤维化体外模型，实验分为对照组、模型组(10 ng·mL-1TGF-β1)，OMT低、高浓度组(2 μmol·L-1、10 μmol·L-1)。采用Western blot检测各组细胞中α-SMA、I型胶原、III型胶原、FN和MAFG蛋白的表达。采用慢病毒转染技术构建稳定过表达和敲低MAFG的LX-2细胞系，检测上述肝纤维化相关蛋白表达情况。结果：OMT能明显改善DDC诱导的胆汁淤积性肝纤维化（P<0.05），显著降低胆汁淤积型小鼠血清中AST、ALT、TBA和TBIL的表达水平（P<0.05）。OMT可明显下调小鼠肝脏内的纤维化相关蛋白α-SMA、I型胶原、III型胶原、FN和MAFG的蛋白水平（P<0.05）。OMT可抑制TGF-β1诱导的LX-2细胞纤维化相关蛋白和MAFG的蛋白水平（P<0.05）。过表达和敲低LX-2细胞中的MAFG蛋白，发现肝纤维化相关蛋白与MAFG蛋白发生同向变化。结论：OMT显著改善DDC诱导的胆汁淤积性肝纤维化，其机制可能是通过下调MAFG蛋白表达而发挥的，MAFG可能是治疗胆汁淤积性肝纤维化的潜在靶点。

关键词：氧化苦参碱 MAFG 胆汁淤积性肝纤维化 TGF-β1 人肝星状细胞(LX-2)

松油烯-4-醇调节棕榈酸诱导胰岛β细胞内质网应激抑制细胞凋亡

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中药材 2024年 963-968页

作者：陈虹雨李金锦尚雪祎张闯张盈沈祥春张彦燕贵州医科大学天然药物资源优效利用重点实验室贵州医科大学药学院临床药学教研室

目的:研究松油烯-4-醇调节棕榈酸诱导的Min6细胞内质网应激,抑制细胞凋亡的作用和机制。方法:分析松油烯-4-醇对棕榈酸诱导Min6细胞内质网应激和细胞凋亡的作用,实验分为正常对照组、模型组、二甲双胍(100μmol/L)组及松油烯-4-醇低(5μ... 详细信息

目的:研究松油烯-4-醇调节棕榈酸诱导的Min6细胞内质网应激,抑制细胞凋亡的作用和机制。方法:分析松油烯-4-醇对棕榈酸诱导Min6细胞内质网应激和细胞凋亡的作用,实验分为正常对照组、模型组、二甲双胍(100μmol/L)组及松油烯-4-醇低(5μmol/L)、高(20μmol/L)浓度组;分析其作用机制,实验分为正常对照组、模型组、内质网应激抑制剂4-苯基丁酸(4-PBA,25 mmol/L)组、松油烯-4-醇(20μmol/L)组、4-PBA(25 mmol/L)+松油烯-4-醇(20μmol/L)组。采用MTT检测细胞活力,流式细胞术检测胞质钙离子含量和细胞凋亡率,Western Blot检测内质网应激标志蛋白p-PERK、ATF4、GRP78和凋亡标志蛋白CHOP、Caspase-3、Caspase-9、Bax的表达水平。结果:与正常对照组比较,模型组细胞胞质钙离子、凋亡率显著升高,细胞活力显著降低,CHOP、Caspase-3、Caspase-9、Bax、ATF4、GRP78蛋白表达及p-PERK/PERK水平显著升高(P0.05)。结论:松油烯-4-醇可通过调节内质网应激抑制棕榈酸诱导下Min6细胞凋亡。

关键词：松油烯-4-醇棕榈酸内质网应激细胞凋亡胰岛β细胞

MiRNA-126硬脂胺阳离子脂质体递送系统的构建及细胞摄取考察

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药物评价研究 2024年第9期47卷 2006-2016页

作者：唐永瑜邰诗蝶吴兴杰陈英冯发进沈祥春邹弢陶玲贵州医科大学贵州贵阳550025 贵州医科大学药学院贵州省特色天然药物资源高效利用工程中心贵州省高等学校天然药物药理与成药性评价特色重点实验室贵州医科大学-贵阳市联合重点实验室天然药物资源优效利用重点实验室贵州贵阳1550025 贵州省生物技术研究开发基地有限公司贵州贵阳551400 北京积水潭医院贵州医院贵州贵阳550007

目的基于阳离子脂质体制备血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)单克隆抗体(VCAM-1 mAb)修饰的负载微小RNA-126(miR-126)的靶向递送系统,并初步评价其稳定性、细胞毒性及细胞摄取。方法采用薄膜分散-挤出法制备硬脂胺阳离子脂质体(SCL),以脂质体... 详细信息

目的基于阳离子脂质体制备血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)单克隆抗体(VCAM-1 mAb)修饰的负载微小RNA-126(miR-126)的靶向递送系统,并初步评价其稳定性、细胞毒性及细胞摄取。方法采用薄膜分散-挤出法制备硬脂胺阳离子脂质体(SCL),以脂质体粒径、电位为指标,单因素法考察大豆磷脂与胆固醇质量比、硬脂胺用量、无水乙醇的用量、成膜温度、水合介质用量、水合制备温度、水合制备时间;并考察其稀释稳定性及储存稳定性。采用琼脂糖凝胶阻滞实验考察SCL对miR-126的负载能力及对酶解的保护效果。利用1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC)/N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)交联法制备VCAM-1 mAb修饰的SCL(Va-SCL),并通过SDS-PAGE法考察VCAM-1 mAb与SCL的耦连效率。MTT法考察其对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的毒性,流式细胞术和荧光显微镜考察正常HUVECs及LPS(1μg·mL^(-1))刺激后HUVECs对miR-126、SCL/miR-126、Va-SCL/miR-126的摄取情况。结果精密称量大豆磷脂120mg、胆固醇40mg、硬脂胺10 mg于茄形瓶中,加入5 mL无水乙醇,50℃超声(功率300 W、频率40 kHz)使其充分溶解,肉眼观察无可见颗粒物或者不溶物,水浴减压蒸发除去有机溶剂,在瓶壁上形成均匀透明的脂质薄膜;加入12 mL DEPC水作为水合介质,水浴超声30 min,挤出器过孔径为200 nm聚碳酸酯膜7次,取续滤液,得SCL,稳定性良好。当氮磷比为10∶1时,SCL能够有效负载miR-126;miR-126通过静电吸附于SCL表面,SCL一定程度上保护miR-126不被酶解。SDS-PAGE结果显示,VCAM-1mAb与SCL成功偶联,接枝率为(53.2±7.6)%。MTT结果显示,Va-SCL、Va-SCL/miR-126对HUVECs的半数抑制浓度(IC_(50))值分别为17.38、71.61 nmol·L^(-1),SCL、SCL/miR-126的IC_(50)值分别为81.03、97.79 nmol·L^(-1)。荧光显微镜及流式结果均显示Va-SCL/miR-126的细胞摄取效果更为明显。结论成功制备了Va-SCL/miR-126,能明显增加miR-126的细胞摄取。

关键词：阳离子脂质体 miR-126 薄膜分散法 EDC/NHS法血管细胞黏附分子-1单克隆抗体修饰

大狼毒根茎中对胰腺癌SW1990细胞具有毒性的二萜

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有机化学 2024年第6期44卷 1929-1937页

作者：朱红波王吉胡炜彦周堂林芷淇张荣平耿长安陈兴龙云南中医药大学中药学院暨云南省南药可持续利用研究重点实验室昆明650500 昆明医科大学药学院暨云南省天然药物药理重点实验室昆明650500 中国科学院昆明植物研究所植物化学与西部植物资源可持续利用国家重点实验室昆明650201

采用硅胶柱色谱、MCI柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱和半制备高效液相色谱等分离方法对大狼毒根茎的化学成分进行研究,通过高分辨电喷雾电离质谱(HR-ESI-MS)、核磁共振(NMR)和计算电子圆二色谱(ECD)等方法鉴定了8个二萜类成分,包括2个新... 详细信息

采用硅胶柱色谱、MCI柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱和半制备高效液相色谱等分离方法对大狼毒根茎的化学成分进行研究,通过高分辨电喷雾电离质谱(HR-ESI-MS)、核磁共振(NMR)和计算电子圆二色谱(ECD)等方法鉴定了8个二萜类成分,包括2个新的对映松香烷型二萜类化合物(1~2)、4个已知对映松香烷型二萜(3~6)和2个已知续随子烷型二萜(7~8).(7R,8S)-7,8-二羟基-17-降碳对映松香烷-13(14)-烯-15-酮(1)为C-17位降碳的松香烷型二萜类成分,化合物2为松香烷型二萜内酯类成分.细胞毒活性筛选表明,化合物7对胰腺癌SW1990细胞具有明显的毒性,IC50为(44.97±9.16)μmol/L;并且能剂量依赖性地促进SW1990细胞的前期凋亡,通过降低胰腺癌细胞内抑制凋亡蛋白Bcl-2的表达发挥抑制肿瘤细胞作用.

关键词：大狼毒对映松香烷型二萜续随子烷型二萜 SW1990细胞细胞毒性 Bcl-2

1,8-桉叶油素对2型糖尿病胰岛β细胞铁死亡的干预作用及机制

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中国药房 2024年第3期35卷 290-295页

作者：杨红任鹏艳陈永鑫姚喻霆甘诗泉刘佳陈婷婷张宝沈祥春李悦贵阳市妇幼保健院/贵阳市儿童医院药学部贵阳550003 贵州医科大学天然药物资源优效利用重点实验室贵阳561113 贵州医科大学药学院贵阳561113

目的研究1,8-桉叶油素对2型糖尿病胰岛β细胞铁死亡的干预作用及机制。方法使用高糖作用于小鼠胰岛β细胞以建立细胞铁死亡模型,考察低、高剂量1,8-桉叶油素(0.25、0.5μmol/L)对胰岛β细胞中Fe2+水平的影响,并考察1,8-桉叶油素(0.5μ... 详细信息

目的研究1,8-桉叶油素对2型糖尿病胰岛β细胞铁死亡的干预作用及机制。方法使用高糖作用于小鼠胰岛β细胞以建立细胞铁死亡模型,考察低、高剂量1,8-桉叶油素(0.25、0.5μmol/L)对胰岛β细胞中Fe2+水平的影响,并考察1,8-桉叶油素(0.5μmol/L)联合铁死亡诱导剂Erastin(20μmol/L)和抑制剂Ferrostatin-1(20μmol/L)后对胰岛β细胞中谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、环氧合酶2(COX2)蛋白表达的影响。采用高脂高糖饲料饲养联合腹腔注射链脲佐菌素构建2型糖尿病小鼠模型,考察低、高剂量1,8-桉叶油素(50、200 mg/kg)对模型小鼠胰腺组织病理形态、铁含量以及GPX4、COX2蛋白表达的影响。结果细胞实验结果显示,与模型组比较,经1,8-桉叶油素干预后,胰岛β细胞中Fe2+水平显著降低(P实验结果显示,与模型组比较,经1,8-桉叶油素干预后,小鼠胰岛结构恢复完整,形态有所改善;胰腺组织中铁含量和COX2蛋白表达水平均显著降低(P<0.05),GPX4蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。结论 1,8-桉叶油素对2型糖尿病胰岛β细胞损伤具有明显的改善作用,其作用机制可能与降低细胞内铁沉积以及调控铁死亡相关蛋白有关。

关键词： 1 8-桉叶油素 2型糖尿病胰岛β细胞铁死亡

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