MiRNA-126硬脂胺阳离子脂质体递送系统的构建及细胞摄取考察
作者机构：贵州医科大学 贵州医科大学药学院贵州省特色天然药物资源高效利用工程中心贵州省高等学校天然药物药理与成药性评价特色重点实验室贵州医科大学-贵阳市联合重点实验室天然药物资源优效利用重点实验室 贵州省生物技术研究开发基地有限公司 北京积水潭医院贵州医院
出 版 物：《药物评价研究》 (Drug Evaluation Research)
年 卷 期：2024年第9期
页 面：2006-2016页
学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100706[医学-药理学] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学]
基 金：国家自然科学基金资助项目(No.82260827和U1812403-4-4) 贵州省自然科学基金会(1Z069) 贵州医科大学国家自然科学基金培育项目(No.20NSP050) 贵州省科技计划项目(黔科合支撑4Y240号) 贵州省高层次创新型人才十层次人才黔科合平台人才(GCC048) 黔科合中引地(003)
主 题：阳离子脂质体 miR-126 薄膜分散法 EDC/NHS法 血管细胞黏附分子-1单克隆抗体修饰
摘 要：目的 基于阳离子脂质体制备血管细胞黏附分子-1（VCAM-1）单克隆抗体（VCAM-1 mAb）修饰的负载微小RNA-126（miR-126）的靶向递送系统，并初步评价其稳定性、细胞毒性及细胞摄取。方法 采用薄膜分散-挤出法制备硬脂胺阳离子脂质体（SCL），以脂质体粒径、电位为指标，单因素法考察大豆磷脂与胆固醇质量比、硬脂胺用量、无水乙醇的用量、成膜温度、水合介质用量、水合制备温度、水合制备时间；并考察其稀释稳定性及储存稳定性。采用琼脂糖凝胶阻滞实验考察SCL对miR-126的负载能力及对酶解的保护效果。利用1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐（EDC）/N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）交联法制备VCAM-1 mAb修饰的SCL（Va-SCL），并通过SDS-PAGE法考察VCAM-1 mAb与SCL的耦连效率。MTT法考察其对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）的毒性，流式细胞术和荧光显微镜考察正常HUVECs及LPS(1μg·mL-1)刺激后HUVECs对miR-126、SCL/miR-126、Va-SCL/miR-126的摄取情况。结果 精密称量大豆磷脂120mg、胆固醇40mg、硬脂胺10 mg于茄形瓶中，加入5 mL无水乙醇，50℃超声（功率300 W、频率40 kHz）使其充分溶解，肉眼观察无可见颗粒物或者不溶物，水浴减压蒸发除去有机溶剂，在瓶壁上形成均匀透明的脂质薄膜；加入12 mL DEPC水作为水合介质，水浴超声30 min，挤出器过孔径为200 nm聚碳酸酯膜7次，取续滤液，得SCL，稳定性良好。当氮磷比为10∶1时，SCL能够有效负载miR-126;miR-126通过静电吸附于SCL表面，SCL一定程度上保护miR-126不被酶解。SDS-PAGE结果显示，VCAM-1mAb与SCL成功偶联，接枝率为（53.2±7.6）%。MTT结果显示，Va-SCL、Va-SCL/miR-126对HUVECs的半数抑制浓度（IC50）值分别为17.38、71.61 nmol·L-1,SCL、SCL/miR-126的IC50值分别为81.03、97.79 nmol·L-1。荧光显微镜及流式结果均显示Va-SCL/miR-126的细胞摄取效果更为明显。结论 成功制备了Va-SCL/miR-126，能明显增加miR-126的细胞摄取。
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