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医学微生物学开放实验教学对医学生创新能力培养的研究

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卫生职业教育 2020年第10期38卷 5-6页

作者：王微微周艳萌杨艾华宋姗姗韩志俊王小敏遵义医科大学微生物学教研室贵州遵义563000 遵义医科大学医学微生物学与免疫学实验室贵州遵义563000

医学微生物学开放实验教学充分利用现有实验室资源为学生提供开放的学习实践平台,弥补传统实验教学模式的不足,激发了学生的自主学习积极性,提高了学生的实践动手能力,活跃了学生的创新思维,有助于医学微生物学课程教学质量的提高和创... 详细信息

医学微生物学开放实验教学充分利用现有实验室资源为学生提供开放的学习实践平台,弥补传统实验教学模式的不足,激发了学生的自主学习积极性,提高了学生的实践动手能力,活跃了学生的创新思维,有助于医学微生物学课程教学质量的提高和创新型医学专业人才的培养。

关键词：开放实验教学医学微生物学创新能力

基于蛋白质组学探讨Ppp3cb和Ppm1g在NHE1基因敲除模型鼠海马组织中的表达

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陆军军医大学学报 2024年第11期46卷 1244-1253页

作者：马鹏飞杨攀郑乾张祥明屠秋霞张春林叶兰冯占辉贵州医科大学临床医学院贵阳550000 贵州医科大学基础医学院:分子医学工程研究中心贵阳550025 贵州医科大学基础医学院生物教研室贵阳550025

目的通过NHE1基因敲除模型鼠的海马组织差异蛋白质组学分析,发现并明确Ppp3cb和Ppm1g的表达特征。方法①选取6只2周龄NHE1基因敲除模型鼠作为模型组,同周龄野生型小鼠6只作为对照组,采用琼脂糖凝胶电泳检测其基因型;应用旷场实验和强迫... 详细信息

目的通过NHE1基因敲除模型鼠的海马组织差异蛋白质组学分析,发现并明确Ppp3cb和Ppm1g的表达特征。方法①选取6只2周龄NHE1基因敲除模型鼠作为模型组,同周龄野生型小鼠6只作为对照组,采用琼脂糖凝胶电泳检测其基因型;应用旷场实验和强迫游泳实验对模型组和对照组小鼠进行行为学评估,并按照Racine评分标准对模型鼠进行癫痫发作分级;②通过串联质谱分析技术对模型组和对照组的海马组织进行差异蛋白筛选,基因本体论(Gene Ontology Analysis,GO)分析差异蛋白并进行注释和富集,蛋白网络数据库(search tool for the retrieval of interesting genes,STRING)分析差异蛋白之间的蛋白相互作用(protein-protein interaction,PPI);③应用qPCR和Western blot检测Ppp3cb和Ppm1g的转录和翻译水平,应用免疫组织化学技术分别观察其在组织中的表达量。结果①模型组小鼠NHE1基因未见表达,旷场实验中模型鼠的运动总距离较对照组减少(P=0.0073),跨越的格子数比对照组显著减少(P生物过程(BP)富集在负向调节生物过程、免疫系统过程的差异蛋白数量最多。STRING分析显示差异蛋白Ppp3cb和Slc9a1直接作用,Ppm1g通过Ppp3cb和Slc9a1间接作用,Ppp3cb和Ppm1g之间相互作用。③Ppp3cb的转录和翻译水平减少,在组织中的表达量下降,而Ppm1g转录和翻译水平增加,在组织中的表达量上升(P<0.05)。结论本研究确定了NHE1基因敲除小鼠海马组织中差异蛋白Ppp3cb表达下调,而Ppm1g表达上调,为进一步研究Ppp3cb和Ppm1g参与癫痫发病机制提供了依据。

关键词： NHE1基因敲除癫痫海马蛋白质组学 Ppp3cb Ppm1g

长链非编码RNA LINC00943对结核分枝杆菌感染小鼠肺泡巨噬细胞迁移能力的影响及机制

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中国老年学杂志 2021年第21期41卷 4788-4791页

作者：朱杰华杜文胜陈莉陈光红罗军敏遵义医科大学附属医院医学检验科贵州遵义563000 遵义医科大学检验医学院遵义医科大学基础医学院免疫学教研室

目的探究长链非编码RNA LINC00943对结核分枝杆菌感染小鼠肺泡巨噬细胞迁移能力的影响及机制。方法取小鼠巨噬细胞MH-S随机分为对照组和模型组,对照组常规培养,模型组细胞使用感染复数为10的结核分枝杆菌H37Ra感染,随后将LINC00943小干... 详细信息

目的探究长链非编码RNA LINC00943对结核分枝杆菌感染小鼠肺泡巨噬细胞迁移能力的影响及机制。方法取小鼠巨噬细胞MH-S随机分为对照组和模型组,对照组常规培养,模型组细胞使用感染复数为10的结核分枝杆菌H37Ra感染,随后将LINC00943小干扰RNA设为si-LINC00943组,阴性对照小干扰RNA设为si-NC组,miR-125b-5p模拟物设为miR-125b-5p mi组,阴性对照寡核苷酸设为miR-NC组转染至模型组细胞中。采用激光共聚焦显微镜观察细胞内细菌荧光强度及细胞感染比例;划痕愈合实验检测细胞迁移能力;双荧光素酶实验验证LINC00943与miR-125b-5p的结合关系;实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-125b-5p的表达水平。结果与对照组相比,模型组细胞内的细菌荧光强度及细胞感染比例显著增加(P<0.05),说明MH-S细胞感染H37Ra菌株的模型建立成功;敲低LINC00943可降低细胞内的细菌荧光强度、细胞感染比例及细胞迁移率;双荧光素酶实验证实LINC00943可与miR-125b-5p靶向结合;敲低LINC00943可促进miR-125b-5p的表达。结论敲低LINC00943可抑制结核分枝杆菌感染小鼠肺泡巨噬细胞的迁移,其作用机制可能与上调miR-125b-5p的表达有关。

关键词：长链非编码RNA LINC00943 结核分枝杆菌小鼠肺泡巨噬细胞迁移

齐墩果酸衍生物DKS26对非酒精性脂肪肝病模型小鼠肝组织Fndc5表达的影响

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贵州医科大学学报 2023年第4期48卷 383-388页

作者：韩萧萧李晨驰刘冉阳唐爽冯琳琳韩冰谢汝佳杨勤贵州医科大学基础医学院病理生理学教研室贵州贵阳550025 贵州省常见慢性疾病发病机制及药物研究重点实验室贵州贵阳550025 贵州医科大学医学检验学院临床微生物免疫教研室贵州贵阳550025

目的研究齐墩果酸衍生物DKS26对非酒精性脂肪肝病(NAFLD)模型小鼠肝组织中Ⅲ型纤连蛋白组件包含蛋白(Fndc5)表达的影响。方法 40只健康5周龄C57/BL小鼠随机均分为对照组(CON组)、模型组(MOD组)、二甲双胍对照组(MET组)和DKS26组,后3组... 详细信息

目的研究齐墩果酸衍生物DKS26对非酒精性脂肪肝病(NAFLD)模型小鼠肝组织中Ⅲ型纤连蛋白组件包含蛋白(Fndc5)表达的影响。方法 40只健康5周龄C57/BL小鼠随机均分为对照组(CON组)、模型组(MOD组)、二甲双胍对照组(MET组)和DKS26组,后3组小鼠用40%四氯化碳皮下注射加高脂饮食喂养、建立小鼠NAFLD模型,MET组和DKS26组小鼠分别给予100 mg/(kg·d)的MET和DKS26灌胃干预、CON组和MOD组小鼠给予100 mg/(kg·d)的羧甲基纤维素钠(CMC-Na)溶液灌胃干预,1次/d,共6周;末次干预后检测各组小鼠血清ALT、AST及肝组织的TG含量、脂滴沉积及肝组织学变化,Western blot法检测肝组织Fndc5蛋白表达。结果与CON组相比,MOD组小鼠血清ALT和AST水平明显上升(P<0.01),肝组织TG含量明显上升(P<0.01),肝细胞空泡样变明显、胞质脂质沉积过多,Fndc5表达下调(P<0.05);MET和DKS26干预后,两组小鼠血清ALT、AST水平、肝组织TG含量、肝细胞空泡样变及脂质沉积较MOD组明显下降(P<0.01),且DKS26干预组小鼠血清AST水平低于MET组(P<0.05);MET组和DKS26组干预后,两组小鼠肝组织Fndc5蛋白表达较MOD组上调(P<0.05),且DKS26组比MET组更高(P<0.05)。结论 DKS26对NAFLD小鼠的肝功能指标及肝脂肪沉积有改善作用,其机制可能与调节鸢尾素(irisin)前体Fndc5表达有关。

关键词：非酒精性脂肪肝病墩果酸衍生物DKS26 Ⅲ型纤连蛋白组件包含蛋白脂质氧化二甲双胍

人胎盘提取物对D－氨基半乳糖所致大鼠急性肝损伤的保护作用及成分分析

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中华医学杂志 2017年第23期97卷 1815-1819页

作者：雷慧群程明亮李静周萍萍罗新华余芳贵州医科大学临床医学院感染科贵阳550004 贵州医科大学附属医院感染疾病科贵州医科大学附属医院微生物免疫科

目的研究人胎盘提取物（HPE）对D－氨基半乳糖（D－GalN）所致大鼠急性肝损伤（ALI）的保护作用并检测HPE成分。方法①ALI模型及干预：SPF级SD雄鼠40只，4～6周龄，体质量（110±10） g，动物许可编号为SCXK（黔2012－0001）。随机分为... 详细信息

目的研究人胎盘提取物（HPE）对D－氨基半乳糖（D－GalN）所致大鼠急性肝损伤（ALI）的保护作用并检测HPE成分。方法①ALI模型及干预：SPF级SD雄鼠40只，4～6周龄，体质量（110±10） g，动物许可编号为SCXK（黔2012－0001）。随机分为正常对照组、模型组、异甘草酸镁（MgIG）组、HPE组、MgIG＋HPE组，以D－GalN诱导ALI，检测各组的丙氨酸氨基转移酶（ALT）、谷氨酸氨基转移酶（AST）、一氧化氮（NO）、丙二醛（MDA）、总抗氧化能力（T－AOC）、超氧化物歧化酶（SOD）水平，另以HE染色观察病理变化。②十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS－PAGE）检测HPE的相对分子质量。③液相色谱质谱－飞行时间质谱联用（LCMS－TOF）进行组分鉴定。④蛋白芯片定性与定量结合检测含有的功能蛋白。结果①HPE可降低血清及肝组织中的NO[（2.7±0.2） μmol/L、（4.0±0.1） μmol/mg蛋白]、MDA[（18.2±0.6） nmol/ml、（2.1±0.7） μmol/mg蛋白]含量，升高SOD[（214.2±14.5） U/ml、（75.5±7.0） U/mg蛋白]、T－AOC含量[（7.3±0.5） U/ml、（2.0±0.2） U/mg蛋白]（P〈0.05），光镜下显示HPE能减轻大鼠肝脏病理改变。②电泳结果显示HPE的相对分子质量在1 200～4 600之间。③LCMS得出HPE有7个主峰，经TOF鉴定分别为苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸、胸腺嘧啶、尿嘧啶、黄嘌呤、次黄嘌呤。④蛋白芯片结果显示，HPE中含有较高含量的功能蛋白包括有TGF－β、IL－9、IGF－1、IL－29、TNF－α，分别为524、311.3、212.8、112.9、94.2 pg/ml。结论①HPE对D－GalN所致大鼠ALI有一定的保护作用。②HPE含有多种氨基酸及核酸，主要含有的功能蛋白有TGF－β、IGF－1、IL－9、IL－29、TNF－α。

关键词：胎盘提取物急性肝损伤成分分析氨基酸碱基功能蛋白

阴沟肠杆菌质粒介导氨基糖苷类耐药基因检测及同源性分析

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中国抗生素杂志 2018年第5期43卷 525-529页

作者：刘晓丹刘宝胡智成莫梢梢费樱贵州医科大学医学检验学院贵阳550004 贵州医科大学附属医院微生物免疫科贵阳550004

目的了解贵阳某三甲医院阴沟肠杆菌的氨基糖苷类耐药机制及其之间的同源性,指导本院阴沟肠杆菌感染的抗菌治疗。方法采用PCR方法检测110株阴沟肠杆菌的7种氨基糖苷类修饰酶基因AMEs(aph(3'')-Ⅵ、aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(3)-Ⅲ、aac(... 详细信息

目的了解贵阳某三甲医院阴沟肠杆菌的氨基糖苷类耐药机制及其之间的同源性,指导本院阴沟肠杆菌感染的抗菌治疗。方法采用PCR方法检测110株阴沟肠杆菌的7种氨基糖苷类修饰酶基因AMEs(aph(3'')-Ⅵ、aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(3)-Ⅲ、aac(6')-Ib、ant(2'')-Ⅰ和ant(3'')-Ⅰ),2种16Sr RNA甲基化酶基因(armA、rmtB)和整合子基因intI,并分析其与耐药表型之间的相关性;用ERIC-PCR方法分析110株阴沟肠杆菌间的同源性。结果 110株阴沟肠杆菌共检出5种AMEs基因,aac(6')-Ib检出率最高,未检出aph(3'')-Ⅵ和aac(3)-Ⅰ,AMEs基因总阳性率为46.36%(51/110),16S rRNA甲基化酶基因总阳性率为8.18%(9/110),intI的阳性率为47.27%(52/110);10株阿米卡星耐药株中有9株检出aac(3)-Ⅲ,庆大霉素耐药株和妥布霉素耐药株均以aac(6')-Ib检出率最高;82.73%的菌株基因型与耐药表型相符;110株阴沟肠杆菌被分为20个型别。结论本院阴沟肠杆菌氨基糖苷类耐药基因与氨基糖苷类抗生素的耐药表型间符合率高,部分菌株间存在克隆播散现象。

关键词：阴沟肠杆菌抗生素耐药基因整合子同源性

2011-2014年铜绿假单胞菌的分布及耐药分析

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包头医学院学报 2016年第8期32卷 38-40页

作者：周艳刘宝杨焕婕曹艳贵州医科大学检验学院临床微生物免疫教研室贵州贵安550025

目的:分析铜绿假单胞菌感染的分布及耐药性,为选用抗菌药物提供依据。方法:对2011年1月至2014年12月间分离的1 283株铜绿假单胞菌,分别进行鉴定及药敏实验。结果:4年检出的1 283株铜绿假单胞菌主要来源于重症监护室(intensive care unit... 详细信息

目的:分析铜绿假单胞菌感染的分布及耐药性,为选用抗菌药物提供依据。方法:对2011年1月至2014年12月间分离的1 283株铜绿假单胞菌,分别进行鉴定及药敏实验。结果:4年检出的1 283株铜绿假单胞菌主要来源于重症监护室(intensive care unit,ICU),占26.0%;检出标本以痰标本为主,占72.3%。铜绿假单胞菌沙星、替卡西林/克拉维酸钾、哌拉西林、左氧氟沙星、妥布霉素、庆大霉素、亚胺培南、阿米卡星、头孢吡肟的耐药率逐年递减(P>0.05),而对头孢他啶、哌拉西林/他唑巴坦与氨曲南的耐药率下降不明显(P>0.05)。结论:铜绿假单胞菌是呼吸系统感染中的重要阴性菌,主要分布在ICU病房;该菌对常用抗菌药物的耐药率逐年递减,为临床治疗提供合理有效的依据。

关键词：铜绿假单胞菌抗生素耐药性

家蝇抗真菌衍生肽Mt6-21DLeu抗白色念珠菌活性及其机制研究

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中国病原生物学杂志 2020年第7期15卷 761-767页

作者：花璇王涛毕言伟陶裕凯孔德龙汤仁仙吴建伟江苏省免疫与代谢重点实验室江苏徐州221004 贵州医科大学基础医学院微生物学教研室贵州贵阳550025 贵州医科大学基础医学院寄生虫学教研室贵州贵阳550025

目的设计家蝇抗真菌肽MAF-1A衍生肽Mt6-21DLeu,探讨其抗白色念珠菌(Candida albicans,Ca)活性及作用机制。方法通过氨基酸替换法设计MAF-1A衍生肽Mt6-21DLeu;采用微量液体稀释法测定Mt6-21DLeu对Ca的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(M... 详细信息

目的设计家蝇抗真菌肽MAF-1A衍生肽Mt6-21DLeu,探讨其抗白色念珠菌(Candida albicans,Ca)活性及作用机制。方法通过氨基酸替换法设计MAF-1A衍生肽Mt6-21DLeu;采用微量液体稀释法测定Mt6-21DLeu对Ca的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MFC)以及不同环境中Mt6-21DLeu对Ca抑菌活性的变化;通过时间-杀菌曲线反映Mt6-21DLeu对Ca的杀菌动力学;通过结晶紫染色测定Mt6-21DLeu对Ca不同阶段生物被膜的清除作用;采用多功能酶标仪检测荧光探针DPH的相对荧光密度;荧光显微镜观察Mt6-21DLeu的细胞膜通透性;采用流式细胞仪检测Mt6-21DLeu影响Ca活性氧ROS生成的影响。结果与MAF-1A相比,Mt6-21DLeu抑制Ca生长的效果提高近5倍,其MIC和MFC分别为0.128 mg/ml和0.256 mg/ml。在盐离子环境中,Mt6-21DLeu活性几乎不受影响,胰酶环境对Mt6-21DLeu有所抑制但远小于对MAF-1A活性的干扰。时间-杀菌曲线结果显示在MIC和2 MIC浓度下,Mt6-21DLeu于9 h后逐渐抑制Ca的生长;4 MIC浓度时Mt6-21DLeu的杀菌能力增强。Mt6-21DLeu在4、24、48 h时均能部分清除Ca已形成的生物被膜,清除效果与Mt6-21DLeu的浓度有关;4 MIC浓度的Mt6-21DLeu能显著增加Ca细胞膜的流动性(P<0.01)及通透性,进而引起Ca菌体内ROS的积累。结论衍生肽Mt6-21DLeu能高效、持久、稳定地抑杀Ca,其抗菌作用可能通过增强细胞膜通透性、促进胞内ROS积累的多靶点模式实现。因此,可将Mt6-21DLeu作为治疗Ca感染的候选药物分子。

关键词：家蝇抗菌肽衍生肽白色念珠菌抑菌活性活性氧

LRG1抑制小鼠肝巨噬细胞活化从而改善代谢相关脂肪性肝病:基于增强TGF-β1信号通路

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南方医科大学学报 2023年第7期43卷 1164-1171页

作者：徐龙飞韩晶杨喆杨燕平陈金慧吴西军王琪洪艳贵州医科大学基础医学院组织学与胚胎学教研室贵州贵阳550025 贵州医科大学金阳医院检验科贵州贵阳550025 中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室贵州医科大学干细胞与组织工程研究中心贵州贵阳550025

目的探讨肝细胞来源的富含亮氨酸α-2糖蛋白1(LRG1)对M1型肝巨噬细胞活化的影响。方法BALB/c小鼠通过高脂饮食(HFD)喂养16周来建立代谢相关脂肪性肝病(MAFLD)模型,油酸诱导小鼠原代肝细胞发生脂肪变性,用RT-PCR和Westernblot检测肝组织... 详细信息

目的探讨肝细胞来源的富含亮氨酸α-2糖蛋白1(LRG1)对M1型肝巨噬细胞活化的影响。方法BALB/c小鼠通过高脂饮食(HFD)喂养16周来建立代谢相关脂肪性肝病(MAFLD)模型,油酸诱导小鼠原代肝细胞发生脂肪变性,用RT-PCR和Westernblot检测肝组织和肝细胞中LRG1的mRNA和蛋白水平的表达。将原代肝巨噬细胞分为5组,对照组、脂肪变性肝细胞来源的上清(CM)刺激组、CM+LRG1组、CM+转化生长因子-β1(TGF-β1)组、CM+TGF-β1+LRG1组,各组培养24 h后,Western bot法检测一氧化氮合酶(iNOS)蛋白水平的表达,RT-PCR法检测iNOS、趋化因子1(CXCL-1)和白细胞介素-1β(IL-1β)的mRNA水平的表达。MAFLD小鼠分为4组,1组作为对照(6只),其余3组经尾静脉分别注射LRG1(6只)、TGF-β1(6只)或者TGF-β1+LRG1(6只),收集肝组织,经HE染色观察肝脏病理学变化,免疫组化法观察肝组织中F4/80+细胞的分布,RT-PCR法检测肝组织iNOS、CXCL-1和IL-1β的mRNA水平的表达。结果HFD小鼠肝组织和脂肪变性的肝细胞中LRG1的mRNA和蛋白水平的表达显著降低(P<0.05)。脂肪变性肝细胞来源的CM刺激明显促进肝巨噬细胞中iNOS、CXCL-1和IL-1β的mRNA水平的表达,而TGF-β1和LRG1联合刺激时明显抑制这些分子mRNA水平的表达(P<0.05)。小鼠HFD16周后,单独注射LRG1或TGF-β1均可减少肝内脂质沉积以及肝内巨噬细胞的浸润,二者联合上述改变更加明显。同时,TGF-β1和LRG1联合刺激时也明显抑制iNOS、CXCL-1和IL-1β的mRNA水平的表达(P<0.05)。结论LRG1通过增强TGF-β1信号通路抑制肝巨噬细胞浸润,从而缓解非酒精性脂肪肝的炎性反应。

关键词：富亮氨酸α2-糖蛋1 肝巨噬细胞代谢相关脂肪性肝病转化生长因子-β1 脂肪变性