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细胞因子组合辅助诊断眼部慢性移植物抗宿主病的临床研究

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中华血液学杂志 2024年第3期45卷 242-248页

作者：程先静吉锐黄瑞昊黄世勤范围赵元程袁容娣王筱淇张曦陆军军医大学第二附属医院血液病医学中心全军临床重点专科创伤与化学中毒国家重点实验室重庆市医学重点学科血液病与微环境重庆市重点实验室重庆400037 陆军军医大学新桥医院眼科重庆400037 金凤实验室重庆400037

目的探索细胞因子与眼部慢性移植物抗宿主病(cGVHD)的相关性,筛选眼部cGVHD的特异性生物标志物。方法通过建立小鼠cGVHD模型,探讨cGVHD与血清细胞因子相关性。根据动物实验结果和文献检索,确定了16种细胞因子组合,使用酶联免疫吸附试验(... 详细信息

目的探索细胞因子与眼部慢性移植物抗宿主病(cGVHD)的相关性,筛选眼部cGVHD的特异性生物标志物。方法通过建立小鼠cGVHD模型,探讨cGVHD与血清细胞因子相关性。根据动物实验结果和文献检索,确定了16种细胞因子组合,使用酶联免疫吸附试验(ELISA)比较从2017年6月至2022年3月在陆军军医大学新桥医院血液病医学中心接受异基因造血干细胞移植后发生眼部cGVHD和未发生眼部cGVHD患者的血清与泪液细胞因子表达水平。结果①与对照组比较,cGVHD小鼠血清IL-1β、IL-6、IL-8、IL-17、IFN-γ、CX3CL1、CXCL11、CXCL13、CCL11、CCL19浓度升高(P0.7),并且泪液细胞因子与眼部cGVHD疾病眼表参数相关。结论泪液细胞因子较血清细胞因子诊断眼部cGVHD更具有特异性与敏感性。泪液细胞因子IL-8、IL-10、IFN-γ、CXCL9、CCL17和CCL19可以作为移植后眼部cGVHD诊断性生物标志物,对其临床诊断具有一定价值。

关键词：异基因造血干细胞移植眼部慢性移植物抗宿主病泪液细胞因子生物标志物

常温机械灌注技术在离断肢体保存中的作用研究进展

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器官移植 2024年第5期15卷 824-829页

作者：贾志博管延军宋翔宇董阳辉杨博尧崔梦一许文静彭江中国人民解放军总医院第四医学中心骨科医学部研究所全军骨科战创伤重点实验室骨科再生医学北京市重点实验室北京100853 河北北方学院研究生院解放军医学院

肢体离断伤在临床工作中较为常见,对离断肢体实施安全有效的保护是肢体再植成功的关键。常温机械灌注技术已经在器官移植领域取得很大突破,可长时间维持器官和组织的活性功能,延长其保存时间,在大动物模型以及临床应用中得到了很好的验... 详细信息

肢体离断伤在临床工作中较为常见,对离断肢体实施安全有效的保护是肢体再植成功的关键。常温机械灌注技术已经在器官移植领域取得很大突破,可长时间维持器官和组织的活性功能,延长其保存时间,在大动物模型以及临床应用中得到了很好的验证。同时这项技术有望为离断肢体的保存和功能恢复提供新的参考。因此,本文就静态冷保存在离断肢体保存中存在的问题、机械灌注的发展历程、离断肢体常温机械灌注的临床应用现状以及有待解决问题进行综述,并展望其发展方向和临床应用前景,以期推动该技术在临床广泛应用。

关键词：离断肢体肢体保存静态冷保存常温机械灌注肢体再植缺血-再灌注损伤灌注液含氧载体

Cre重组酶调控的OVA-HBsAg转基因乙肝模型小鼠的制备及鉴定

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解放军医学杂志 2015年第5期40卷 372-375页

作者：李秀梅刘光泽陈媚娟谢勇孔祥平解放军458医院全军肝病中心、全军转基因动物重点实验室广州510600

目的制备Cre重组酶调控的卵清蛋白(OVA)-HBs Ag转基因小鼠,为乙肝的防治提供更好的动物模型。方法采用原核显微注射方法将线性化的携带OVA-HBs Ag基因并带有Lox P位点的质粒注入C57BL/6J×DBA小鼠受精卵的雄原核内,制备受Cre重组酶调控... 详细信息

目的制备Cre重组酶调控的卵清蛋白(OVA)-HBs Ag转基因小鼠,为乙肝的防治提供更好的动物模型。方法采用原核显微注射方法将线性化的携带OVA-HBs Ag基因并带有Lox P位点的质粒注入C57BL/6J×DBA小鼠受精卵的雄原核内,制备受Cre重组酶调控表达的OVA-HBs Ag转基因小鼠。将F1代OVA-HBs Ag阳性母鼠与本室饲育的Alb-Cre转基因阳性公鼠进行杂交,获得子代小鼠,观察Cre对OVA-HBs Ag转基因小鼠HBs Ag的诱导表达情况。采用PCR、ELISA和免疫组化方法检测HBs Ag基因、Cre基因在转基因小鼠体内的整合及表达情况。结果共注射受精卵491枚,成活337枚,成活率68.6%。产下F0代小鼠29只,其中PCR阳性4只,外源基因整合率13.8%。目前已传至F4代,F1-F4代PCR阳性率分别为27.5%、32.0%、22.9%、25.0%,ELISA法未检测到血清中HBs Ag表达。将F1代OVA-HBs Ag阳性母鼠与Alb-Cre阳性公鼠杂交,获得16只子代小鼠,PCR检测Cre基因和HBs Ag基因双阳性的子代小鼠有6只,其中2只小鼠血清HBs Ag检测为阳性,诱导表达阳性率为33.3%。结论成功制备出OVA-HBs A转基因小鼠,且可稳定传代,Cre重组酶可以诱导小鼠体内HBs Ag的表达。

关键词：小鼠,转基因重组酶类肝炎,乙型,慢性

YMDD突变株HBV转基因小鼠的制备及检测

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解放军医学杂志 2011年第9期36卷 962-963,966页

作者：尤玉琴陈阳述刘光泽杨富强陈媚娟李秀梅周军辉孔祥平解放军458医院全军肝病中心、全军转基因动物重点实验室广州510600

目的建立YMDD耐药突变株HBV转基因小鼠,为乙肝防治研究提供转基因动物模型。方法采用受精卵显微注射法,将带有YMDD突变的对拉米夫定有耐药性的1.3拷贝HBV基因注入FVB/N单细胞受精卵的原核内,制备YMDD耐药突变株HBV转基因小鼠。采用PCR... 详细信息

目的建立YMDD耐药突变株HBV转基因小鼠,为乙肝防治研究提供转基因动物模型。方法采用受精卵显微注射法,将带有YMDD突变的对拉米夫定有耐药性的1.3拷贝HBV基因注入FVB/N单细胞受精卵的原核内,制备YMDD耐药突变株HBV转基因小鼠。采用PCR检测外源基因的整合和传代情况,采用ELISA和免疫组化等方法检测HBsAg在肝、肾中的复制和表达情况。结果注射受精卵3401枚,产269只F0代仔鼠,PCR阳性33只,外源基因的整合率12.3%。9只转基因鼠血清HBVDNA弱阳性,拷贝数低于103拷贝/ml;免疫组化结果显示肝组织和肾组织均有HBsAg表达,且肾组织中的表达强于肝组织。经传代产下47只F1代转基因鼠,目的基因PCR阳性率为27.6%,且肝组织和肾组织中HBsAg均有表达,分布特性与F0代一致。结论成功制备出体内有复制表达而且可以传代YMDD耐药突变株HBV的转基因小鼠。

关键词：肝炎病毒,乙型小鼠,转基因显微注射

抗乙肝病毒新药Bay41-4109在HBV转基因小鼠中的药效学研究

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解放军医学杂志 2011年第9期36卷 893-896页

作者：李秀梅陈阳述刘光泽黎经纬陈媚娟周军辉孔祥平解放军458医院全军肝病中心、全军转基因动物重点实验室广州510600

目的研究抗乙肝病毒新药Bay41-4109在HBV转基因小鼠体内的药效学作用。方法 SPF级TgM(HBV D1.3)小鼠分为Bay41-4109组[30mg/(kg.d)],拉米夫定组[30mg/(kg.d)]和溶媒组(0.5%羧甲基纤维素钠)3组,每组32只。利用免疫组化分析HBV转基因小鼠... 详细信息

目的研究抗乙肝病毒新药Bay41-4109在HBV转基因小鼠体内的药效学作用。方法 SPF级TgM(HBV D1.3)小鼠分为Bay41-4109组[30mg/(kg.d)],拉米夫定组[30mg/(kg.d)]和溶媒组(0.5%羧甲基纤维素钠)3组,每组32只。利用免疫组化分析HBV转基因小鼠肝组织HBcAg变化,定量PCR技术研究HBV转基因小鼠肝组织HBV DNA及血清HBV DNA的变化,并从血清转氨酶及体重指标分析该药物体内作用的安全性。结果给药第50天,Bay41-4109组HBcAg阳性细胞核个数、阳性细胞核平均面积、光密度比值三项指标均明显低于溶媒组(P第64天(停药2周),各组间上述三项指标均无统计学差异。拉米夫定组各时间点上述指标与溶媒组之间均无明显差异(P>0.05)。但Bay41-4109对肝组织及血清HBV DNA未见明显作用。该药未对HBV转基因小鼠血清转氨酶及体重产生明显影响。结论 Bay41-4109可有效抑制HBV转基因小鼠肝组织HBcAg表达,且效果优于拉米夫定。Bay41-4109是一种安全性较好的抗乙肝新药,其作用机制不同于拉米夫定。

关键词：抗病毒药小鼠,转基因肝炎病毒,乙型

HBV(ayw)转基因小鼠HBV复制中间体的检测

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解放军医学杂志 2011年第9期36卷 959-961页

作者：陈阳述尤玉琴苏蔚易学瑞袁有成陈文吟张锋孔祥平解放军458医院全军肝病中心、全军转基因动物重点实验室广州510600

目的建立稳定、高灵敏度化学发光Southern blotting检测系统,检测HBV(ayw)转基因小鼠肝脏及其他组织的HBV复制水平。方法采用地高辛标记HBV探针,利用pTHBV1047质粒检测杂交系统的灵敏度及重复性;提取第27代HBV(ayw)转基因小鼠肝、肾、... 详细信息

目的建立稳定、高灵敏度化学发光Southern blotting检测系统,检测HBV(ayw)转基因小鼠肝脏及其他组织的HBV复制水平。方法采用地高辛标记HBV探针,利用pTHBV1047质粒检测杂交系统的灵敏度及重复性;提取第27代HBV(ayw)转基因小鼠肝、肾、脾和肌肉组织总DNA,经HindⅢ酶切后电泳、转膜,利用高灵敏度化学发光杂交Southern blotting检测各组织中HBV复制中间体的水平。结果地高辛标记的化学发光检测系统灵敏度达0.1pg,且杂交系统稳定可靠。HBV(ayw)转基因小鼠基因组DNA中检测到整合的外源HBV DNA,但低于HepG2.2.15细胞的HBV复制水平。肝、肾、脾和肌肉组织中都有HBV复制中间体存在,以肝组织中含量最高。结论第27代HBV(ayw)转基因小鼠染色体含有稳定的HBV基因整合,为复制型HBV转基因小鼠。

关键词：小鼠,转基因肝炎病毒,乙型双杂交系统技术

1.3拷贝C基因型HBV转基因小鼠的制备及检测

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解放军医学杂志 2011年第9期36卷 967-969页

作者：陈媚娟尤玉琴刘光泽佟明华黎经纬李秀梅孔祥平解放军458医院全军肝病中心、全军转基因动物重点实验室广州510600

目的制备1.3拷贝C基因型HBV转基因小鼠,为乙肝的防治提供较好的动物模型。方法采用受精卵显微注射法,制备1.3拷贝C基因型HBV转基因小鼠;采用PCR、ELISA、荧光定量PCR和免疫组化方法检测HBV基因在转基因小鼠体内的整合、复制和表达情况... 详细信息

目的制备1.3拷贝C基因型HBV转基因小鼠,为乙肝的防治提供较好的动物模型。方法采用受精卵显微注射法,制备1.3拷贝C基因型HBV转基因小鼠;采用PCR、ELISA、荧光定量PCR和免疫组化方法检测HBV基因在转基因小鼠体内的整合、复制和表达情况。结果共注射受精卵2282枚,成活2024枚,注射成活率88.7%。共移植假孕雌鼠72只,59只怀孕,假孕雌鼠妊娠率81.9%。共产下F0代小鼠185只,PCR检测共有19只整合阳性,阳性率10.3%。血清荧光定量PCR结果显示,其中6只小鼠有HBV DNA复制,拷贝数为102~103拷贝/ml;经传代产下F1代小鼠96只,PCR检测HBV DNA阳性33只,阳性率34.4%。血清荧光定量PCR结果显示,其中10只小鼠有HBV DNA复制,拷贝数为102~103拷贝/ml;F0代和F1代小鼠随机分别各取3只进行肝脏和肾脏HBsAg免疫组化检测结果均为阳性,且肾脏表达高于肝脏。结论 1.3拷贝C基因可以在上述制备成功的C型HBV转基因小鼠体内复制和表达,并且可以遗传给下一代。

关键词：小鼠,转基因肝炎病毒,乙型肝炎表面抗原,乙型

慢病毒介导的绿色荧光蛋白转基因小鼠的制备及鉴定

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解放军医学杂志 2011年第9期36卷 964-966页

作者：李秀梅尤玉琴刘光泽黎经纬陈媚娟陈文吟周军辉孔祥平解放军458医院全军肝病中心、全军转基因动物重点实验室广州510600

目的以携带绿色荧光蛋白(GFP)的慢病毒为载体制备转基因小鼠,建立慢病毒介导的转基因动物制备技术平台。方法将慢病毒表达载体FUGW与ViraPowerTMLentiviral Packaging Mix按1∶2比例混合,用LipofectamineTM2000转染293FT细胞,包装出的... 详细信息

目的以携带绿色荧光蛋白(GFP)的慢病毒为载体制备转基因小鼠,建立慢病毒介导的转基因动物制备技术平台。方法将慢病毒表达载体FUGW与ViraPowerTMLentiviral Packaging Mix按1∶2比例混合,用LipofectamineTM2000转染293FT细胞,包装出的病毒经浓缩后以293T细胞测定病毒滴度。采用受精卵卵周隙显微注射的方式制备转基因小鼠。出生小鼠用PCR法检测GFP基因整合情况,并在荧光体视显微镜下鉴定外源基因的表达情况。结果病毒包装过程中,转染后24h即可见GFP表达,72h时293FT细胞的转染效率达95%以上,镜下可见大量绿色荧光。包装出的慢病毒滴度为106U/ml,经浓缩后可达108U/ml。PCR检测显示,F0代小鼠GFP PCR阳性率为70.27%(26/37)。荧光体视显微镜下观察荧光小鼠所占比例,F0代为65.2%(15/23),F1代为55.0%(11/20),荧光强度在两代个体中相当。F0代、F1代中GFP均呈广泛表达。结论制备出携带GFP可传代的转基因小鼠,建立了慢病毒载体介导的转基因小鼠制备技术平台。

关键词：慢病毒属绿色荧光蛋白质类小鼠,转基因转染

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复制型HBV转基因小鼠的建立与应用

解放军医学杂志 2011年第9期36卷 954-958页

作者：孔祥平刘光泽易学瑞解放军458医院全军肝病中心、全军转基因动物重点实验室广州510600

尽管有了有效的疫苗,但乙肝病毒(HBV)感染依然是全球性公共卫生问题,在我国形势尤为严峻。由于HBV的自然宿主仅限于人和黑猩猩,现有的模型都有不同的缺陷,因此关于其生物学及治疗方法研究的诸多问题依然没有解决。复制型HBV转基因小鼠... 详细信息

尽管有了有效的疫苗,但乙肝病毒(HBV)感染依然是全球性公共卫生问题,在我国形势尤为严峻。由于HBV的自然宿主仅限于人和黑猩猩,现有的模型都有不同的缺陷,因此关于其生物学及治疗方法研究的诸多问题依然没有解决。复制型HBV转基因小鼠模型的建立,极大地提高了我们对HBV生活史、免疫生物学和肝脏病变的免疫发病机制的认识。本文简要介绍国际上由Francis ***实验室和国内由本实验室建立的复制型HBV转基因小鼠,以及利用该模型开展抗病毒药物和乙肝发病机制的研究工作。

关键词：小鼠,转基因肝炎病毒,乙型抗病毒药模型,动物