慢病毒介导的绿色荧光蛋白转基因小鼠的制备及鉴定

作     者：李秀梅 尤玉琴 刘光泽 黎经纬 陈媚娟 陈文吟 周军辉 孔祥平 LI Xiu-mei;YOU Yu-qin;LIU Guang-ze;LI Jing-wei;CHEW Mei-juan;CHEN Wen-yin;ZHOU Jun-hui;KONG Xiang-ping

作者机构：解放军458医院全军肝病中心、全军转基因动物重点实验室广州510600 

出 版 物：《解放军医学杂志》 (Medical Journal of Chinese People's Liberation Army)

年 卷 期：2011年第36卷第9期

页      面：964-966页

核心收录：

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 10[医学] 

基　　金：“艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治”科技重大专项“十一五”课题资助(2008ZX10002-011) 

主　　题：慢病毒属 绿色荧光蛋白质类 小鼠,转基因 转染 

摘      要：目的以携带绿色荧光蛋白(GFP)的慢病毒为载体制备转基因小鼠,建立慢病毒介导的转基因动物制备技术平台。方法将慢病毒表达载体FUGW与ViraPowerTMLentiviral Packaging Mix按1∶2比例混合,用LipofectamineTM2000转染293FT细胞,包装出的病毒经浓缩后以293T细胞测定病毒滴度。采用受精卵卵周隙显微注射的方式制备转基因小鼠。出生小鼠用PCR法检测GFP基因整合情况,并在荧光体视显微镜下鉴定外源基因的表达情况。结果病毒包装过程中,转染后24h即可见GFP表达,72h时293FT细胞的转染效率达95%以上,镜下可见大量绿色荧光。包装出的慢病毒滴度为106U/ml,经浓缩后可达108U/ml。PCR检测显示,F0代小鼠GFP PCR阳性率为70.27%(26/37)。荧光体视显微镜下观察荧光小鼠所占比例,F0代为65.2%(15/23),F1代为55.0%(11/20),荧光强度在两代个体中相当。F0代、F1代中GFP均呈广泛表达。结论制备出携带GFP可传代的转基因小鼠,建立了慢病毒载体介导的转基因小鼠制备技术平台。