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全骨髓贴壁法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞及其诱导分化

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中国组织工程研究与临床康复 2009年第36期13卷 7073-7077页

作者：蔡鹏朱绍兴苏一鸣黄世勇福建医科大学附属协和医院泌尿外科福建省福州市350001

背景:骨髓中的间充质干细胞含量极少,每1×104～1×105个单核细胞中约有1个骨髓间充质干细胞,需要在体外分离、纯化、扩增后才能满足体内移植要求。目的:观察体外分离培养的骨髓间充质干细胞生物学特性及多向分化潜能。设计、时间及地点... 详细信息

背景:骨髓中的间充质干细胞含量极少,每1×104～1×105个单核细胞中约有1个骨髓间充质干细胞,需要在体外分离、纯化、扩增后才能满足体内移植要求。目的:观察体外分离培养的骨髓间充质干细胞生物学特性及多向分化潜能。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2007-10/2008-12在福建医科大学附属协和医院泌尿外科研究室完成。材料:清洁级雄性近交系SD大鼠30只,由上海斯莱克实验动物有限公司提供。方法:通过全骨髓贴壁法体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,待细胞融合至80%～90%胰蛋白酶消化传代。取传至第3代细胞,分别向成骨、成脂方向诱导分化。主要观察指标:倒置相差显微镜下观察细胞形态,流式细胞仪检测其表面标记,茜素红染色检测其成骨能力,油红O染色检测其成脂能力。结果:原代及传代的骨髓间充质干细胞均呈长梭形成纤维细胞样,连续传代10代以上,细胞始终保持旺盛的生长及扩增能力。第3代骨髓间充质干细胞CD90,CD44,CD106均呈阳性表达,而CD34,CD45,CD11b呈阴性。成骨诱导21d后,可见大量橘红色矿化结节形成。成脂诱导2周后,可见细胞的胞浆内出现大量红染脂滴。结论:全骨髓贴壁培养法可大量分离纯化、扩增骨髓间充质干细胞,所获细胞具有间充质干细胞的一般生物学特性,经诱导培养后具有多向分化潜能。

关键词：间充质干细胞骨髓生物学特性分化

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人神经生长因子β亚基慢病毒载体的构建

中国组织工程研究与临床康复 2011年第20期15卷 3688-3692页

作者：苏一鸣朱绍兴蔡鹏福建医科大学附属协和医院泌尿外科福建省福州市350001

背景:糖尿病神经源性膀胱的发病与神经生长因子缺乏有关,β亚基是构成神经生长因子(NGF)3种亚基中惟一具有生物活性的亚基,慢病毒载体是基因治疗的理想载体。目的:构建过表达人神经生长因子β亚基(β-NGF)基因的慢病毒载体。方法:通过... 详细信息

背景:糖尿病神经源性膀胱的发病与神经生长因子缺乏有关,β亚基是构成神经生长因子(NGF)3种亚基中惟一具有生物活性的亚基,慢病毒载体是基因治疗的理想载体。目的:构建过表达人神经生长因子β亚基(β-NGF)基因的慢病毒载体。方法:通过目的基因的获得,载体质粒双酶切,载体质粒与目的基因的连接将人β-NGF基因克隆到慢病毒载体质粒pGC-FU中,构建重组慢病毒载体质粒pGC-FU-β-NGF。观察人β-NGF基因的克隆情况,并进行重组慢病毒载体质粒pGC-FU-β-NGF的PCR鉴定和测序。结果与结论:构建的重组慢病毒载体质粒pGC-FU-β-NGF进行PCR实际获得的产物与预计PCR产物大小一致,即初步判断为构建成功的重组质粒。所获得的β-NGF基因经测序后与GenBank报道序列完全一致。说明pGC-FU-β-NGF中携带有正确的β-NGF基因。结果证实,实验成功构建了携带人β-NGF基因的重组慢病毒载体质粒。

关键词：神经生长因子慢病毒载体克隆基因治疗组织工程

3种术式治疗输尿管上段嵌顿性结石的效果对比

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中外医疗 2019年第2期38卷 56-58页

作者：刘溶福建省福州市医科大学附属协和医院泌尿外科福建福州350001

目的分析3种微创术式治疗输尿管上段嵌顿性结石的临床疗效。方法回顾性分析2017年1—12月收治的128例输尿管上段嵌顿性结石患者的临床资料,按术式不同,分为输尿管硬镜组(URL组)、后腹腔镜组(RLU组)、经皮肾镜组(PCNL组),比较3组手术时... 详细信息

目的分析3种微创术式治疗输尿管上段嵌顿性结石的临床疗效。方法回顾性分析2017年1—12月收治的128例输尿管上段嵌顿性结石患者的临床资料,按术式不同,分为输尿管硬镜组(URL组)、后腹腔镜组(RLU组)、经皮肾镜组(PCNL组),比较3组手术时间、术后血红蛋白下降程度、术后VAS评分、术后住院时间、住院费用、清石率及并发症发生情况。结果手术时间方面,URL组、RLU组及PCNL组分别为:(46.1±14.7)、(92.9±24.2)、(84.1±27.2)min,URL组短于RLU组及PCNL组,差异有统计学意义(P<0.05);术后住院天数方面,URL组、RLU组及PCNL组分别为:(1.8±1.3)、(4.9±2.9)、(9.3±2.9)d,3组间差异有统计学意义(P<0.05);术后VAS评分方面,URL组、RLU组及PCNL组分别为:(1.9±0.6)分、(3.3±0.8)分、(3.5±0.8)分,URL组短于RLU组及PCNL组,差异有统计学意义(P<0.05);清石率方面,URL组、RLU组及PCNL组分别为:87.5%、100.0%、95.8%,URL组低于RLU组及PCNL组,差异有统计学意义(P<0.05);并发症发生率方面,RLU组(3.6%)低于URL组(14.5%)及PCNL组(16.7%),差异有统计学意义(P<0.05)。结论研究表明对于输尿管上段嵌顿性结石,RLU更安全有效,但对手术技巧要求高;URL更为微创,但清石率低;PCNL清石率高,费用高,安全性不如RLU,在合并肾结石患者中更有优势。

关键词：输尿管上段结石输尿管镜腹腔镜经皮肾镜

双极等离子电切袢辅助通道主动止血在无管化经皮肾镜取石术中的应用效果

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中国当代医药 2022年第34期29卷 130-134页

作者：杨旭周凯李永生福建医科大学附属协和医院泌尿外科福建福州350001

目的探讨在无管化经皮肾镜取石术(PCNL)中运用双极等离子电切袢对肾造瘘通道进行主动止血的安全性及有效性。方法回顾性选取2020年7月至2021年9月福建医科大学附属协和医院泌尿外科收治的107例行无管化PCNL的患者作为研究对象。所有患者... 详细信息

目的探讨在无管化经皮肾镜取石术(PCNL)中运用双极等离子电切袢对肾造瘘通道进行主动止血的安全性及有效性。方法回顾性选取2020年7月至2021年9月福建医科大学附属协和医院泌尿外科收治的107例行无管化PCNL的患者作为研究对象。所有患者均B超引导下经皮肾穿刺扩张建立F20号经皮肾通道,采用超声碎石,清石结束后留置双J管,不放肾造瘘管。按照碎石结束后是否对经皮肾通道进行主动止血分为通道无止血组(76例)和通道主动止血组(31例)。通道无止血组患者在碎石结束后缓慢退镜观察通道无明显出血后拔除剥皮鞘,按压切口1 min后直接缝闭切口。通道主动止血组患者碎石结束后采用双极等离子电切袢联合输尿管镜自制止血设备,在退镜过程中行通道主动止血后拔除剥皮鞘缝闭切口。比较两组患者的一般资料、结石部位及负荷量、手术时间、术后血红蛋白(Hb)下降值、术后发热率、术后血尿严重程度、术后清石率、术后并发症发生率等指标。结果107例患者手术均顺利完成,无中转开放和肾动脉栓塞病例,无周围脏器损伤及感染性休克病例发生,1例患者出院后1周因血尿再次入院,行输血等保守治疗后好转。所有病例发热发生率为2.8%(3/107),术后输血率0.9%(1/107),术后住院时间为1~2 d。术后1 d,通道主动止血组血尿严重程度低于通道无止血组,差异有统计学意义(P0.05)。术后复查腹部平片,101例患者无结石残留或无临床意义残留结石,6例患者结石残留或结石位于平行盏,术后2例患者行体外震波碎石,4例患者行输尿管软镜碎石。107例患者随访3~6个月,无结石复发及其他并发症发生。结论采用双极等离子电切袢用于无管化经皮肾通道的主动止血技术降低了术后出血及血尿的风险,促进患者快速康复。

关键词：无管化经皮肾镜通道止血双极等离子

腹腔镜胃癌根治术淋巴结清扫手术入路的合理选择

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中国肿瘤临床 2017年第4期44卷 151-154页

作者：黄昌明林建贤福建医科大学附属协和医院胃外科福州市350001

腹腔镜技术在胃癌根治术中的应用已有较长时间,但是由于胃的解剖层面复杂、血供丰富、腹腔镜手术器械操作等特殊性,使腹腔镜胃癌淋巴结清扫的难度较大,技术要求较高。合理的手术入路是腹腔镜胃癌淋巴结清扫术成功的开始,也是手术顺利进... 详细信息

腹腔镜技术在胃癌根治术中的应用已有较长时间,但是由于胃的解剖层面复杂、血供丰富、腹腔镜手术器械操作等特殊性,使腹腔镜胃癌淋巴结清扫的难度较大,技术要求较高。合理的手术入路是腹腔镜胃癌淋巴结清扫术成功的开始,也是手术顺利进行的前提。术者在熟知胃癌淋巴结引流及解剖特点的基础上,根据患者的体位、术者的站位、淋巴结清扫顺序等,不同的区域,如幽门下区、胰腺上缘区和脾门区中选择不同的手术入路,以保证安全、彻底的胃周淋巴结清扫。本文介绍本课题组在腹腔镜胃癌根治术中不同区域淋巴结清扫时的手术入路选择,以期为开展腹腔镜胃癌手术的外科医师提供参考。

关键词：腹腔镜胃癌根治术手术入路

脂肪肝模型大鼠自体原位肝移植后的脂质代谢变化

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中国组织工程研究 2018年第36期22卷 5821-5827页

作者：丁晨江艺潘凡蔡秋程福建医科大学附属第三医院福建医科大学附属协和医院肝胆外科福建省福州市350001 解放军南京军区福州总医院肝胆外科福建省福州市350025

背景:研究显示,重度脂肪肝移植后移植物原发性无功能和早期移植物功能不良发生率明显升高,因此何种程度脂肪变性能最大程度提高移植物和受体的存活率,有待进行更深入的研究。目的:探讨不同程度脂肪肝大鼠行自体原位肝移植对脂质代谢的... 详细信息

背景:研究显示,重度脂肪肝移植后移植物原发性无功能和早期移植物功能不良发生率明显升高,因此何种程度脂肪变性能最大程度提高移植物和受体的存活率,有待进行更深入的研究。目的:探讨不同程度脂肪肝大鼠行自体原位肝移植对脂质代谢的影响。方法:取160只SD大鼠(福建医科大学实验动物中心提供),通过高脂饮食分别建立中、重度脂肪肝模型,每种模型80只大鼠;将中度脂肪肝大鼠随机分2组,模型组(A组)进行自体原位肝移植手术,对照组(C组)不做手术;将重度脂肪肝大鼠随机分2组,模型组(B组)进行自体原位肝移植手术,对照组(D组)不做手术。术前、术后1 d、术后1周、术后3周、术后5周分别进行肝功能、脂质代谢及肝脏组织病理学检查。结果与结论:(1)肝功能:A组谷丙转氨酶、谷草转氨酶水平均于术后1 d达峰值,随后逐渐下降,B组术后5周的谷丙转氨酶、谷草转氨酶水平高于A组;(2)脂质代谢:4组大鼠术后总胆固醇、三酰甘油和低密度脂蛋白水平总体呈下降趋势,高密度脂蛋白、脂联素水平总体呈升高趋势;术后第5周,A组总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白水平低于B组(P <0.05),高密度脂蛋白、脂联素水平高于B组(P <0.05);(3)肝脏组织病理学:A组术后1 d肝脏呈中度脂肪变性,术后5周脂肪变性程度逆转;B组术后1 d肝脏呈重度脂肪变性,术后5周呈中、重度脂肪变性,未见明显好转,可见炎症细胞浸润,汇管区内静脉淤血及轻度胆汁淤积;(4)结果表明:中、重度脂肪肝大鼠行自体原位肝移植后,均有不同程度加重脂质代谢紊乱,重度脂肪肝较中度脂肪肝可产生更严重的脂质代谢紊乱且恢复更加缓慢。

关键词：非酒精性脂肪肝肝移植自体原位肝移植缺血再灌注损伤脂质代谢脂联素大鼠组织构建

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自体肌卫星细胞尿道内移植实验

中国组织工程研究与临床康复 2007年第20期11卷 3952-3955页

作者：夏清建朱绍兴福建医科大学附属协和医院泌尿外科福建省福州市350001

目的:观察骨骼肌卫星细胞注射到尿道内存活的情况,探讨肌卫星细胞自体移植治疗压力性尿失禁的潜在可行性。方法:实验于2004-09/2005-09在福建医科大学附属协和医院内分泌学研究所和动物实验室完成。实验动物:清洁级3周龄雌性SD大鼠10只... 详细信息

目的:观察骨骼肌卫星细胞注射到尿道内存活的情况,探讨肌卫星细胞自体移植治疗压力性尿失禁的潜在可行性。方法:实验于2004-09/2005-09在福建医科大学附属协和医院内分泌学研究所和动物实验室完成。实验动物:清洁级3周龄雌性SD大鼠10只。实验分组:将大鼠分为实验组和对照组,每组5只。实验干预:①分别取其双下肢腓肠肌,采用1g/L胶原酶-2.4U/mLDispase和2.5g/L胰蛋白酶两步法消化分离、纯化细胞并培养。采用0.01%的活体荧光染料荧光金对骨骼肌卫星细胞进行标记。②将荧光金标记的骨骼肌卫星细胞自体注射于实验组大鼠近端尿道3点和9点处的黏膜下及肌层,对照组大鼠于相同位置注射等体积的DMEM/F12无血清培养液。实验评估:①荧光显微镜下观察荧光金的标记效果,计算标记后细胞的死亡率。②三四天后麻醉下处死大鼠,取出后尿道组织进行冰冻切片,荧光显微镜下观察是否有标记的细胞,并进行Desmin免疫组织化学染色观察。结果:10只大鼠均进入结果分析。①培养细胞的鉴定,荧光标记的效果:成功分离、培养出原代细胞,免疫细胞化学染色示90%左右的细胞特异性结蛋白染色阳性,证实所培养出的细胞为骨骼肌卫星细胞;0.01%的荧光金对细胞的标记效果好,细胞的存活率与未标记组无明显差异,适合用于骨骼肌卫星细胞自体移植标记。②后尿道组织冰冻切片观察:实验组切片于荧光显微镜下可见到有荧光标记的细胞,免疫组织化学染色有Desmin阳性的细胞;而对照组切片未见到荧光标记的细胞,免疫组织化学染色为阴性。结论:骨骼肌卫星细胞注射到尿道内后仍有存活,有可能成为压力性尿失禁注射疗法的一种新型注射材料。

关键词：卫星细胞,骨骼肌注射尿失禁,压力性组织构建

原发性睾丸非霍奇金淋巴瘤的临床特征和疗效分析

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中国肿瘤临床 2010年第23期37卷 1350-1353页

作者：许贞书战榕陈志哲徐本华张铭斌福建医科大学附属协和医院血液科福州市350001 福建医科大学附属协和医院放疗科福州市350001 福建医科大学附属协和医院泌尿外科福州市350001

目的:分析单中心的原发性睾丸非霍奇金淋巴瘤患者的临床特征和治疗效果。方法:回顾复习了2001年1月至2008年12月间福建医科大学附属协和医院26例原发性睾丸非霍奇金淋巴瘤患者的临床资料,包括年龄、病变受累部位、Ann-Arbor分期、B症状... 详细信息

目的:分析单中心的原发性睾丸非霍奇金淋巴瘤患者的临床特征和治疗效果。方法:回顾复习了2001年1月至2008年12月间福建医科大学附属协和医院26例原发性睾丸非霍奇金淋巴瘤患者的临床资料,包括年龄、病变受累部位、Ann-Arbor分期、B症状、血清乳酸脱氢酶、血清β2微球蛋白、国际预后指数以及治疗方法。电话随访患者的生存情况,统计分析生存曲线和治疗效果。随访截止时间是2009年12月31日。结果:患者的中位生存时间是38个月。16例患者治疗后获完全缓解;3例部分缓解;2例疾病稳定状态;4例治疗期间疾病进展。16例完全缓解的患者中,中位生存时间为61个月,第1、2、5年总生存率分别是88%、73%、62%,第1、2、5年无进展生存率分别是85%、58%、35%。中低危IPI的患者预后明显好于高危IPI的患者,前者中位生存时间是48个月(95%CI:34～62),而后者中位生存时间仅14个月(95%CI:11～17)。手术切除后联合化疗1年总生存率和无进展生存率均为100%,而单纯局部照射治疗1年总生存率和无进展生存率分别是67%和33%。采用含利妥昔单抗的化疗为基础的综合治疗,5年OS为50%,而无利妥昔单抗的只有30%(P=0.335)。结论:原发性睾丸非霍奇金淋巴瘤没有明显的生存平台期,中低级国际预后指数的患者疗效较好。手术切除后联合化疗早期效果明显,单纯局部放射治疗效果差。采用含利妥昔单抗的化疗为基础的综合治疗可以提高患者总生存情况。

关键词：睾丸非霍奇金淋巴瘤国际预后指数利妥昔单抗

TTK对膀胱癌细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响

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中国细胞生物学学报 2020年第9期42卷 1517-1525页

作者：刘锦裕谢建兵谢锦来晏湘山李永生莆田学院附属医院泌尿外科莆田351100 福建医科大学附属协和医院泌尿外科福州350001

该研究探讨了苏氨酸和酪氨酸激酶(threonine and tyrosine kinase,TTK)在膀胱癌中的表达情况及其在膀胱癌细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移中的作用。采用qRT-PCR和免疫组织化学分别检测TTK mRNA和蛋白在癌旁正常组织、非肌层浸润性膀胱癌组... 详细信息

该研究探讨了苏氨酸和酪氨酸激酶(threonine and tyrosine kinase,TTK)在膀胱癌中的表达情况及其在膀胱癌细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移中的作用。采用qRT-PCR和免疫组织化学分别检测TTK mRNA和蛋白在癌旁正常组织、非肌层浸润性膀胱癌组织、肌层浸润性膀胱癌组织中的表达水平;将TTK过表达质粒、TTK敲除质粒借助脂质体分别稳定转染膀胱癌HT-1376细胞;用qRT-PCR和Western blot检测转染后TTK mRNA和蛋白的表达情况;应用CCK法和EdU方法检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞周期分布及凋亡情况;transwell小室法检测细胞侵袭、迁移能力。结果显示:TTK mRNA和蛋白在癌旁正常组织、非肌层浸润性膀胱癌组织、肌层浸润性膀胱癌组织中的表达水平逐渐升高,3者之间差异有统计学意义(P<0.05);过表达TTK后,HT-1376细胞增殖能力增强,细胞凋亡减少,细胞体外侵袭和迁移能力增强;而敲除TTK后,HT-1376细胞生长受抑制,细胞周期阻滞在G0/G1期,细胞凋亡率增加,细胞体外侵袭和迁移能力减弱。该研究结果提示,TTK的表达与膀胱癌的发生、发展有关;TTK能促进膀胱癌HT-1376细胞的增殖、侵袭、迁移,并抑制细胞凋亡。

关键词：苏氨酸和酪氨酸激酶膀胱癌细胞增殖凋亡侵袭