自体肌卫星细胞尿道内移植实验

作     者：夏清建 朱绍兴 Xia QJ;Zhu SX

作者机构：福建医科大学附属协和医院泌尿外科福建省福州市350001 

出 版 物：《中国组织工程研究与临床康复》 (Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research)

年 卷 期：2007年第11卷第20期

页      面：3952-3955页

学科分类：0710[理学-生物学] 0831[工学-生物医学工程（可授工学、理学、医学学位）] 1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 0403[教育学-体育学] 1002[医学-临床医学] 07[理学] 1010[医学-医学技术（可授医学、理学学位）] 071007[理学-遗传学] 0703[理学-化学] 0836[工学-生物工程] 

基　　金：福建省卫生厅青年基金资助课题(2001-1-11)~~ 

主　　题：卫星细胞,骨骼肌 注射 尿失禁,压力性 组织构建 

摘      要：目的:观察骨骼肌卫星细胞注射到尿道内存活的情况,探讨肌卫星细胞自体移植治疗压力性尿失禁的潜在可行性。方法:实验于2004-09/2005-09在福建医科大学附属协和医院内分泌学研究所和动物实验室完成。实验动物:清洁级3周龄雌性SD大鼠10只。实验分组:将大鼠分为实验组和对照组,每组5只。实验干预:①分别取其双下肢腓肠肌,采用1g/L胶原酶-2.4U/mLDispase和2.5g/L胰蛋白酶两步法消化分离、纯化细胞并培养。采用0.01%的活体荧光染料荧光金对骨骼肌卫星细胞进行标记。②将荧光金标记的骨骼肌卫星细胞自体注射于实验组大鼠近端尿道3点和9点处的黏膜下及肌层,对照组大鼠于相同位置注射等体积的DMEM/F12无血清培养液。实验评估:①荧光显微镜下观察荧光金的标记效果,计算标记后细胞的死亡率。②三四天后麻醉下处死大鼠,取出后尿道组织进行冰冻切片,荧光显微镜下观察是否有标记的细胞,并进行Desmin免疫组织化学染色观察。结果:10只大鼠均进入结果分析。①培养细胞的鉴定,荧光标记的效果:成功分离、培养出原代细胞,免疫细胞化学染色示90%左右的细胞特异性结蛋白染色阳性,证实所培养出的细胞为骨骼肌卫星细胞;0.01%的荧光金对细胞的标记效果好,细胞的存活率与未标记组无明显差异,适合用于骨骼肌卫星细胞自体移植标记。②后尿道组织冰冻切片观察:实验组切片于荧光显微镜下可见到有荧光标记的细胞,免疫组织化学染色有Desmin阳性的细胞;而对照组切片未见到荧光标记的细胞,免疫组织化学染色为阴性。结论:骨骼肌卫星细胞注射到尿道内后仍有存活,有可能成为压力性尿失禁注射疗法的一种新型注射材料。