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鳞片状细胞癌抗原Ⅰ与乙型肝炎病毒的结合受反应位点环域疏水性的影响

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生物工程学报 2005年第1期21卷 52-57页

作者：陈敏程通许辰煜吴婷欧山海张涛张军夏宁邵厦门大学福建省医学分子病毒学研究中心细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室厦门361005

鳞片状细胞癌抗原Ⅰ (SCCA1)是丝氨酸蛋白酶抑制剂 (serpin)超家族的成员 ,具有多种变异体。有报道其中的两种(BP和AJ5 15 70 6 )能通过乙型肝炎病毒 (HBV)的前S1抗原促进表达SCCA1的细胞与HBV的结合。本研究从HepG2细胞中扩增出的一株S... 详细信息

鳞片状细胞癌抗原Ⅰ (SCCA1)是丝氨酸蛋白酶抑制剂 (serpin)超家族的成员 ,具有多种变异体。有报道其中的两种(BP和AJ5 15 70 6 )能通过乙型肝炎病毒 (HBV)的前S1抗原促进表达SCCA1的细胞与HBV的结合。本研究从HepG2细胞中扩增出的一株SCCA1(A1)却不具备HBV结合能力。将A1的C末端与BP的C末端互换 ,获得的A1 BP能够结合HBV ,而BP A1却不能。A1与BP的C末端仅有 3个氨基酸的差异 ,其中 2个位于反应位点环域。一级结构分析发现在该区域内 ,A1的疏水性较弱 ,而BP和AJ5 15 70 6的疏水性较强。将A1的aa349位的弱疏水性的谷氨酸突变为强疏水性的缬氨酸 ,则可获得HBV结合能力。反之 ,将BP同一位点的缬氨酸突变为谷氨酸 ,则会丧失HBV结合能力。这些结果提示SCCA1与HBV的结合受反应位点环域的疏水性的影响。

关键词：乙型肝炎病毒鳞片状细胞癌抗原Ⅰ 前S1抗原

多样性人源天然噬菌体抗体库的构建及初步应用

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细胞与分子免疫学杂志 2006年第6期22卷 786-789,793页

作者：王晋罗文新李利峰陈瑛炜王明桥张军夏宁邵厦门大学细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室福建省医学分子病毒学研究中心福建厦门361005

目的:构建多样性良好的人源天然噬菌体抗体库。方法:从正常人外周血中分离淋巴细胞,以RT-PCR和半巢式PCR扩增重链可变区VH基因和轻链可变区VL基因,以重叠延伸PCR将VH、VL组装成scFv基因,并将其克隆入噬菌粒载体pCANTAB-5E中。以pCANTAB... 详细信息

目的:构建多样性良好的人源天然噬菌体抗体库。方法:从正常人外周血中分离淋巴细胞,以RT-PCR和半巢式PCR扩增重链可变区VH基因和轻链可变区VL基因,以重叠延伸PCR将VH、VL组装成scFv基因,并将其克隆入噬菌粒载体pCANTAB-5E中。以pCANTAB-5E电转化大肠杆菌TG1,构建人源天然噬菌体抗体库,测序分析抗体基因的家族信息和多样性,并用多种抗原对其进行筛选。结果:获得了库容为2×108的人源天然噬菌体抗体库。分别用5种抗原对其进行筛选,均可获得特异性噬菌体抗体的富集。结论:成功地构建了一个多样性良好的人源天然噬菌体抗体库,可用于制备具有应用前景的人源抗体。

关键词：人源天然噬菌体抗体库单链抗体多样性

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噬菌体抗体库固相筛选条件的初步研究

细胞与分子免疫学杂志 2006年第5期22卷 664-667页

作者：王明桥罗文新陈瑛炜袁权王晋张军夏宁邵福建省医学分子病毒学研究中心厦门大学教育部细胞生物学与肿瘤细胞工程重点实验室福建厦门361005

目的:探讨噬菌体抗体库的固相筛选条件,为筛选方案的设计提供实验依据。方法:利用多种针对HEVNE2蛋白的特异性噬菌体人源抗体和非特异性噬菌体人源抗体,对噬菌体抗体与抗原的结合时间、抗原包被的浓度、洗涤强度和洗脱方式等多种筛选的... 详细信息

目的:探讨噬菌体抗体库的固相筛选条件,为筛选方案的设计提供实验依据。方法:利用多种针对HEVNE2蛋白的特异性噬菌体人源抗体和非特异性噬菌体人源抗体,对噬菌体抗体与抗原的结合时间、抗原包被的浓度、洗涤强度和洗脱方式等多种筛选的条件进行初步探索。结果:阳性噬菌体抗体与抗原反应1min,就可较好结合,洗涤次数为20～30次、洗涤液的pH为5时,筛选得到的阳性率最高。包被抗原的浓度对筛选的阳性率没有明显影响,用10mg/L抗原竞争洗脱60min,可得到较高的阳性率。结论:噬菌体抗体库的筛选是一个非常复杂的过程,其中的各个条件之间有着密切的联系,应该根据具体情况进行调整。

关键词：噬菌体抗体库固相筛选筛选条件

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亲和层析法用于噬菌体抗体库的筛选

病毒学报 2006年第1期22卷 44-49页

作者：陈瑛炜罗文新王明桥王晋李利峰袁权张军夏宁邵福建省医学分子病毒学研究中心厦门大学细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室厦门361005

本研究报道一种基于固定化金属亲和层析(IMAC)的噬菌体抗体库液相筛选方法。将纯化的带有His标签的抗原与噬菌体抗体库混合,噬菌体抗体与抗原充分结合后再加入亲和介质,使噬菌体抗体抗原复合物通过His标签与介质结合,然后通过充分洗涤... 详细信息

本研究报道一种基于固定化金属亲和层析(IMAC)的噬菌体抗体库液相筛选方法。将纯化的带有His标签的抗原与噬菌体抗体库混合,噬菌体抗体与抗原充分结合后再加入亲和介质,使噬菌体抗体抗原复合物通过His标签与介质结合,然后通过充分洗涤去除非特异性噬菌体抗体,最后将特异性噬菌体抗体洗脱下来,感染TG1,进行下一轮筛选。整个筛选过程中抗原与抗体的结合在液相中完成,不仅消除了固相介质对抗原表位的影响,也更有利于噬菌体抗体与抗原的充分作用。将此方法应用于HEV NE2蛋白特异性人源噬菌体抗体的筛选,抗原竞争ELISA,阳性血清阻断,可溶性单链抗体表达检测及测序结果表明,最终获得2个特异性人源抗体。

关键词：噬菌体抗体库固定化金属亲和层析液相筛选

高活性脐带间充质干细胞干预老年树鼩衰老脾脏的作用与机制

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中国组织工程研究 2025年第19期29卷 4000-4010页

作者：叶丽田川赵晓娟陈梦蝶叶倩倩李强廖珠银李晔朱向情阮光萍何志旭舒莉萍潘兴华贵州医科大学基础医学院免疫学教研室组织工程与干细胞实验中心贵州省贵阳市550004 中国人民解放军联勤保障部队第九二〇医院干细胞与免疫细胞生物医药技术国家地方联合工程实验室云南省细胞治疗技术转化医学重点实验室昆明市干细胞与再生医学重点实验室基础医学实验室云南省昆明市650032 遵义医科大学附属医院儿科学教研室贵州省遵义市563100

背景:脾脏具有储血、造血和免疫功能,随着年龄增长,脾脏结构退变、功能衰退引起免疫系统功能受损,进而加速机体衰老进程,而高活性脐带间充质干细胞治疗树鼩脾脏衰老尚未见报道。目的:探讨高活性脐带间充质干细胞对树鼩脾脏衰老的干预作... 详细信息

背景:脾脏具有储血、造血和免疫功能,随着年龄增长,脾脏结构退变、功能衰退引起免疫系统功能受损,进而加速机体衰老进程,而高活性脐带间充质干细胞治疗树鼩脾脏衰老尚未见报道。目的:探讨高活性脐带间充质干细胞对树鼩脾脏衰老的干预作用及机制。方法:从剖腹产的新生树鼩脐带组织中分离、培养和获得高活性脐带间充质干细胞,三系分化试剂盒检测成脂、成骨、成软骨分化能力,流式细胞术检测细胞周期和表面标志物。以感染复数值分别为100,120,140,160,180,200的吉凯基因绿色荧光蛋白转染第2代高活性脐带间充质干细胞,筛选最佳转染条件;转染后的第4代高活性脐带间充质干细胞尾静脉输注给老年治疗组树鼩,青年对照组和老年模型组不予特殊处理,治疗4个月时取脾脏组织,苏木精-伊红染色观察脾脏组织结构;β-半乳糖苷酶染色检测衰老相关半乳糖苷酶活性;免疫组织化学染色检测p21和p53蛋白表达水平;Ki67和PCNA免疫荧光染色检测细胞增殖活性;免疫荧光染色检测脾脏自噬蛋白分子Beclin1和APG5L/ATG5表达水平;活性氧荧光染色检测脾脏组织的活性氧含量;CD3免疫荧光染色检测总T淋巴细胞比例变化;酶联免疫吸附实验检测脾脏组织白细胞介素1β和转化生长因子β1分泌水平;DAPI复染细胞核观察绿色荧光蛋白标记的高活性脐带间充质干细胞在脾脏组织的分布情况。结果与结论:①高活性脐带间充质干细胞呈核小短梭形、鱼群样生长,G_(0)/G_(1)期占比大,具有向成脂、成骨和成软骨分化潜能。②感染复数为140且转染72 h为吉凯基因绿色荧光蛋白标记树鼩高活性脐带间充质干细胞的最佳条件。③与老年模型组相比,老年治疗组树鼩脾脏组织细胞排列紧密,白髓面积增加(P中心占比无显著差异(P>0.05),脾脏组织衰老相关半乳糖苷酶活性水平降低(P分子p21和p53表达下调(P分子Ki67和PCNA表达上调(P分子Beclin1和APG5L/ATG5表达上调(P细胞比例增加(P细胞介素1β分泌水平降低(P0.05)。与青年对照组相比,以上检测指标在老年治疗组中均有显著差异(P细胞。结果表明:静脉输注高活性脐带间充质干细胞可迁移至脾脏组织,抑制活性氧产生,下调衰老相关蛋白分子表达,诱导细胞自噬,促进细胞增殖,降低慢性炎症,进而改善脾脏组织结构和功能。

关键词：高活性脐带间充质干细胞树鼩脾脏衰老免疫自噬炎症

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戊型肝炎诊断中血清学及核酸检测意义的研究

中华肝脏病杂志 2004年第1期12卷 7-10页

作者：张军葛胜祥黄果勇李少伟何志强王颖彬郑英杰顾颖吴文翰夏宁邵厦门大学细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室福建省医学分子病毒学研究中心厦门361005 广西壮族自治区疾病预防与控制中心厦门大学细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室福建省医学分子病毒学研究中心厦门361005

目的利用恒河猴感染模型评估血清学检测和核酸检测在戊型肝炎诊断中的临床意义。方法对86只戊型肝炎病毒(HEV)实验感染猴的系列血清和粪便标本,用反转录聚合酶链反应方法进行病毒学检测,用4种酶联免疫吸附抗体检测试剂(E2-IgM,E2-IgG,... 详细信息

目的利用恒河猴感染模型评估血清学检测和核酸检测在戊型肝炎诊断中的临床意义。方法对86只戊型肝炎病毒(HEV)实验感染猴的系列血清和粪便标本,用反转录聚合酶链反应方法进行病毒学检测,用4种酶联免疫吸附抗体检测试剂(E2-IgM,E2-IgG,GL-IgG和YES-IgG)进行血清学检测。结果感染猴均产生E2-IgG抗体,除1只感染猴未检出粪便排毒和E2—IgM外,其余感染猴均出现粪便排毒和E2-IgM阳转。GL-IgG和YES-IgG的阳转率较低,而且与感染剂量相关。急性肝炎主要开始于感染后3～7周内。病毒学指标在潜伏早期即已出现,较疾病的发生约早2周,并在急性期迅速下降。E2-IgM在发病时已有约2/3阳转,并在发病后10周内完全转阴。E2—IgG几乎与E2—IgM同时阳转,在所有感染猴中持续存在,直至86周后仍无阴转。GL-IgG和YES-IgG抗体较E2抗体晚约1周,在感染后20周内已有过半数转阴。结论 E2-IgM是一个良好的戊型肝炎急性感染诊断指标,E2-IgG是一个良好的戊型肝炎既往感染诊断指标,GL-IgG和YES-IgG抗体的阳转或双份血清滴度升高可以作为辅助诊断指标,病毒核酸检测仅在发病的极早期具有诊断价值。

关键词：戊型肝炎诊断血清学核酸检测肝炎病毒病毒学

基于乙型肝炎病毒核心蛋白的颗粒性肽展示载体的构建

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厦门大学学报（自然科学版） 2004年第4期43卷 436-440页

作者：杨海杰陈敏何水珍程通顾颖管保全张军夏宁邵厦门大学细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室福建省医学分子病毒学研究中心厦门大学福建厦门361005

为提高HBVpreS1aa21 47的免疫原性,将1～6拷贝的preS1(21 47)片段以串联方式插入HBcAg的aa78和aa82之间,在大肠杆菌中进行表达和纯化.携带1～3拷贝的重组抗原CI、CII和CIII的表达产量约占菌体总蛋白的20%,而携带4～6拷贝的重组抗原则未... 详细信息

为提高HBVpreS1aa21 47的免疫原性,将1～6拷贝的preS1(21 47)片段以串联方式插入HBcAg的aa78和aa82之间,在大肠杆菌中进行表达和纯化.携带1～3拷贝的重组抗原CI、CII和CIII的表达产量约占菌体总蛋白的20%,而携带4～6拷贝的重组抗原则未见明显表达.电镜检测显示重组抗原CI、CII和CIII可以形成形态与HBcAg类似的类病毒颗粒,颗粒直径在30～34nm之间.ELISA分析显示这3种VLP抗原具有很强的preS1抗原的免疫反应性,而对HBc单克隆抗体则基本失去反应性.提示外源多肽pre(21 47)可被有效地递呈至类HBc颗粒的表面,且外源多肽的插入使HBc主要的免疫优势表位遭到了破坏.这些证据表明利用HBcAg的专一性呈递能力来构建多价抗原可作为免疫原设计时的一种策略.

关键词：乙型肝炎病毒核心蛋白颗粒性肽展示载体 preSl 免疫原性类病毒颗粒原核表达

戊型肝炎病毒核酸阳性血浆经输血传播感染恒河猴的研究

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中华肝脏病杂志 2004年第1期12卷 13-15页

作者：夏宁邵张军郑英杰邱艳葛胜祥叶祥忠欧山海厦门大学细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室福建省医学分子病毒学研究中心厦门361005 北京市红十字血液中心

目的了解戊型肝炎病毒(HEV)核酸阳性血浆对灵长类动物的感染性和致病性。方法对抗-HEV IgM阳性而IgG阴性志愿献血员血浆进行HEV RNA检测,并将存在病毒血症献血员的10ml血浆静脉输入健康恒河猴,观察其对恒河猴的感染性和致病性。结果... 详细信息

目的了解戊型肝炎病毒(HEV)核酸阳性血浆对灵长类动物的感染性和致病性。方法对抗-HEV IgM阳性而IgG阴性志愿献血员血浆进行HEV RNA检测,并将存在病毒血症献血员的10ml血浆静脉输入健康恒河猴,观察其对恒河猴的感染性和致病性。结果从1份抗-HEV IgM阳性而IgG阴性志愿献血员血浆中分离出HEV基因IV型RNA片段。该份血浆输入恒河猴后,恒河猴出现典型急性肝炎生物化学和病理表现,病毒血症,血清抗-HEV IgM和IgG抗体阳转。结论 HEV病毒血症献血员血浆输入可以引起灵长类动物的HEV感染以及急性肝炎,提示HEV经输血传播的可能性。

关键词：戊型肝炎病毒核酸阳性血浆输血传播恒河猴 HEV 抗体

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全细胞杂交在三种赤潮微藻检测中的应用

高技术通讯 2005年第12期15卷 84-89页

作者：梁君荣高杨高亚辉张克兢李萍赵东海李雪松骆庭伟厦门大学生命科学学院细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室厦门361005 厦门大学环境科学研究中心厦门361005

从核糖体DNA的转录间隔区ITS和18S rRNA的基因序列中设计特异性荧光核酸分子探针,采用全细胞杂交方法(即荧光原位杂交法)对锥状斯氏藻(Scrippsiella trochoidea(Stein)Loeblich Ⅲ)、赤潮异弯藻(Heterosigma akashiwo(Hada)Hada)和球状... 详细信息

从核糖体DNA的转录间隔区ITS和18S rRNA的基因序列中设计特异性荧光核酸分子探针,采用全细胞杂交方法(即荧光原位杂交法)对锥状斯氏藻(Scrippsiella trochoidea(Stein)Loeblich Ⅲ)、赤潮异弯藻(Heterosigma akashiwo(Hada)Hada)和球状棕囊藻(Phaeocystis globosa Scherffel)三种单胞微藻进行了分子鉴定,用荧光显微镜和流式细胞仪对杂交结果进行了观察.结果表明,实验所设计的特异性分子探针结合全细胞杂交方法和流式细胞仪检测手段能够有效地实现对上述三种赤潮微藻的检测.由于该三种藻细胞的细胞外被物存在差别,荧光显微镜检测效果存在差异,即在荧光显微镜下,赤潮异弯藻和球状棕囊藻的杂交细胞的荧光强度比锥状斯式藻杂交细胞的荧光强度弱,在一定程度上影响了观察效果.同时,用该方法还成功地从模拟自然海区混合样品中检测出球状棕囊藻.因此,该研究方法适用于对实验室和自然海区样品的赤潮微藻的检测.

关键词：锥状斯氏藻球状棕囊藻赤湖异弯藻全细胞杂交荧光分子探针