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抗VEGF单克隆抗体Fab片段在大肠杆菌的表达

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中国免疫学杂志 2013年第10期29卷 1085-1088,1092页

作者：霍世元朱文华滕凌叶亚东常州亚当生物技术有限公司常州213022

目的：构建、表达、纯化抗血管内皮生长因子（VEGF）的Fab片段（跟明，Vasculizumab），并检测其抗VEGF的活性。方法：首先对轻链（LC）及重链（HC）基因进行密码子优化并做了全基因合成，将补充了OmpA信号肽核苷酸序列的轻链及重链基... 详细信息

目的：构建、表达、纯化抗血管内皮生长因子（VEGF）的Fab片段（跟明，Vasculizumab），并检测其抗VEGF的活性。方法：首先对轻链（LC）及重链（HC）基因进行密码子优化并做了全基因合成，将补充了OmpA信号肽核苷酸序列的轻链及重链基因分别克隆到表达质粒pET21a中，成功构建共表达质粒***—HC，目的基因测序正确。然后转入大肠杆菌（Escherichia coli）BL21（DE3）中诱导表达，并进行了温度和IPTG诱导浓度的条件优化。结果：确定大肠杆菌周质分泌表达摇瓶发酵最佳条件为：0D。达到0．6～0．8时加人0．1mmol／LIPTG，18％诱导18小时。SDS—PAGE检测目的蛋白Fab有表达。结论：表达纯化后的Fab有抗VEGF活性，可为新药筛选提供材料。

关键词：抗VEGF Fab抗体原核表达共表达

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甲乙型肝炎联合疫苗不同浓度的免疫效果观察

现代预防医学 2008年第1期35卷 124-125页

作者：马波练幼辉谭顺革何丽芳杨丽吴绍学沈佳航张刚华云南沃森生物技术有限公司昆明650116 云南沃森生物技术有限公司

[目的]寻找甲乙型肝炎联合疫苗不同浓度的免疫方案。[方法]按照3个浓度(1、2、5)剂型组的甲乙型肝炎联合疫苗,分别免疫1、2、5 3个剂型组(疫苗组)、阳性和阴性对照组动物,免疫后28 d采血,检测抗-HAV、抗-HBsAb抗体。[结果]血清抗体阳转... 详细信息

[目的]寻找甲乙型肝炎联合疫苗不同浓度的免疫方案。[方法]按照3个浓度(1、2、5)剂型组的甲乙型肝炎联合疫苗,分别免疫1、2、5 3个剂型组(疫苗组)、阳性和阴性对照组动物,免疫后28 d采血,检测抗-HAV、抗-HBsAb抗体。[结果]血清抗体阳转率分别为:1组,抗-HAV 90%、抗-HBsAb 60%;2组,抗-HAV100%、抗-HBsAb 60%;5组,抗-HAV 70%、抗-HBsAb 50%。[结论]甲乙型肝炎不同浓度的联合疫苗具有良好的安全性和免疫原性,值得进一步研究。

关键词：甲型肝炎乙型肝炎甲乙型肝炎联合疫苗

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泡椒凤爪溶烂腐败菌的鉴定及其致腐能力分析

食品科学 2023年第16期44卷 312-317页

作者：尹含靓刘洋谭益升孙军华蒋立文杜秋湖南农业大学食品科学技术学院湖南长沙410128 食品科学与生物技术湖南省重点实验室湖南长沙410128 盐津铺子食品股份有限公司湖南长沙410000

为探究溶烂泡椒凤爪中优势腐败菌及其致腐能力,通过高通量测序技术及传统培养法分离出泡椒凤爪样品中的优势腐败菌并通过反接菌法验证腐败菌的致腐能力。结果表明,溶烂泡椒凤爪样品中的优势菌属为芽孢杆菌属(Bacillus),分离得到4株优势... 详细信息

为探究溶烂泡椒凤爪中优势腐败菌及其致腐能力,通过高通量测序技术及传统培养法分离出泡椒凤爪样品中的优势腐败菌并通过反接菌法验证腐败菌的致腐能力。结果表明,溶烂泡椒凤爪样品中的优势菌属为芽孢杆菌属(Bacillus),分离得到4株优势菌株为甲基营养型芽孢杆菌(***)、贝莱斯芽孢杆菌(***)、枯草芽孢杆菌(***)、沙福芽孢杆菌(***)。4株菌均具有产蛋白酶及脂肪酶活性,其中沙福芽孢杆菌921-4产蛋白酶活性最强(51.19 U/mL),而甲基营养型芽孢杆菌623-4产脂肪酶活性最强(3.75 U/mL)。接种4株纯培养芽孢杆菌的泡椒凤爪样品pH值、挥发性盐基氮值和硫代巴比妥酸值均高于未接菌对照组样品,表明4株芽孢杆菌均对泡椒凤爪有一定的致腐能力。研究结果将为泡椒凤爪的品质控制,延长其货架期提供理论基础。

关键词：泡椒凤爪腐败菌芽孢杆菌酶活性致腐能力

基于Illumina MiSeq高通量测序技术分析贵州水豆豉中细菌多样性

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食品科学 2021年第24期42卷 61-66页

作者：邓高文刘洋李跑廖卢艳尹含靓蒋立文覃业优肖何湖南农业大学食品科学技术学院湖南长沙410128 食品科学与生物技术湖南省重点实验室湖南长沙410128 湖南坛坛香食品科技有限公司湖南长沙410300

以不同生产阶段的贵州水豆豉为研究对象,利用Illumina MiSeq高通量测序技术,对贵州水豆豉自然发酵前后、调味后发酵3个阶段的细菌菌群结构及多样性进行研究,并对其优势菌进行分离鉴定。结果表明,3个样品共得到296063条有效数据,1124个... 详细信息

以不同生产阶段的贵州水豆豉为研究对象,利用Illumina MiSeq高通量测序技术,对贵州水豆豉自然发酵前后、调味后发酵3个阶段的细菌菌群结构及多样性进行研究,并对其优势菌进行分离鉴定。结果表明,3个样品共得到296063条有效数据,1124个操作分类单元。在3个样品中共注释了6个门类,21个属类。在门水平上,随着发酵时间的延长,厚壁菌门(Firmicutes)丰度不断增加,变形菌门(Proteobacteria)不断减少。在属水平上,随着发酵时间的延长,芽孢杆菌属(Bacillus)丰度不断增加。后发酵24 h后(DCFW3),由于食盐、香辛料等抑菌成分的加入,细菌种类下降。此外,通过对贵州水豆豉中优势菌的分离纯化,利用VITEK MS全自动微生物质谱从贵州水豆豉中获得4株产蛋白酶较高的菌株,分别为枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌和蜡样芽孢杆菌。该研究为贵州水豆豉标准化和安全控制提供一定的参考依据。

关键词：水豆豉高通量测序技术多样性发酵阶段菌种分离鉴定

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免疫荧光层析法快速检测猪尿中克伦特罗含量

现代食品科技 2013年第5期29卷 1154-1156页

作者：郭诗静唐海波齐维广州万孚生物技术股份有限公司广东广州510663

本研究使用克伦特罗免疫荧光层析试剂盒,基于免疫荧光层析原理,配套使用广州万孚生物技术股份有限公司研制的荧光定量检测仪,实现猪尿中所含克伦特罗的定量检测,并对试纸条的灵敏度、准确度与精密性、类似化学药物干扰、保存期等相关性... 详细信息

本研究使用克伦特罗免疫荧光层析试剂盒,基于免疫荧光层析原理,配套使用广州万孚生物技术股份有限公司研制的荧光定量检测仪,实现猪尿中所含克伦特罗的定量检测,并对试纸条的灵敏度、准确度与精密性、类似化学药物干扰、保存期等相关性能进行了评价。实验证明检测限达0.26μg/L,与结构类似化学药物的交叉反应小于0.20%,同时验证了本试剂盒在1年的保存期限有效。整个检测过程只需20 min左右。

关键词：克伦特罗免疫荧光层析法检测

复方刺五加散对母猪和哺乳仔猪血清生化、抗氧化和免疫指标的影响

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动物营养学报 2024年第5期36卷 2911-2923页

作者：彭雄李想伍蓉蓉曹宇航刘自逵柳高峰孙志良伍勇湖南农业大学动物医学院长沙410128 湖南加农正和生物技术有限公司浏阳410329

本试验旨在研究妊娠后期和哺乳期母猪饲喂复方刺五加散对母猪和哺乳仔猪血清生化、抗氧化和免疫指标的影响。试验选取60头胎次、配种时间和体况相近的健康长×大二元母猪,随机分为4组,每组15个重复,每个重复1头母猪。对照组、低剂量组... 详细信息

本试验旨在研究妊娠后期和哺乳期母猪饲喂复方刺五加散对母猪和哺乳仔猪血清生化、抗氧化和免疫指标的影响。试验选取60头胎次、配种时间和体况相近的健康长×大二元母猪,随机分为4组,每组15个重复,每个重复1头母猪。对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组母猪分别饲喂在基础饲粮中添加0、0.5、1.0和2.0 kg/t复方刺五加散的试验饲粮,饲喂试验从母猪妊娠第80天开始至哺乳第21天结束。结果显示:1)与对照组相比,中剂量组、高剂量组哺乳仔猪的平均日增重有增加的趋势(P=0.091)。2)在哺乳第1天,与对照组相比,低剂量组母猪血清白蛋白(ALB)、无机磷(IP)含量显著升高(P<0.05),血清葡萄糖(GLU)含量显著降低(P<0.05);在哺乳第21天,与高剂量组相比,对照组、低剂量组和中剂量组母猪血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性显著升高(P<0.05);与对照组相比,低剂量组21日龄哺乳仔猪血清甘油三酯(TG)含量显著升高(P<0.05)。3)在哺乳第1天,与对照组相比,各剂量组母猪血清超氧化物歧化酶(SOD)活性显著升高(P<0.05),同时血清丙二醛(MDA)含量显著降低(P<0.05);在哺乳第21天,与对照组相比,低剂量组、中剂量组母猪血清过氧化氢酶(CAT)活性显著升高(P<0.05),高剂量组母猪血清总抗氧化能力(T-AOC)显著降低(P<0.05),低剂量组、中剂量组母猪血清MDA含量有降低趋势(P=0.075);低剂量组21日龄哺乳仔猪血清T-AOC显著高于对照组、中剂量组和高剂量组(P<0.05),低剂量组、中剂量组血清MDA含量较对照组有降低趋势(P=0.081)。4)与对照组相比,低剂量组哺乳第1、21天母猪血清白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)含量以及21日龄哺乳仔猪血清干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-2(IL-2)和IL-6含量显著降低(P<0.05);中剂量组哺乳第1天母猪血清IL-1β、IL-6含量与哺乳第21天母猪血清IFN-γ、IL-1β含量以及21日龄哺乳仔猪血清IFN-γ、IL-6含量显著降低(P<0.05);高剂量组哺乳第1天母猪血清IL-1β、IL-6含量与哺乳第21天母猪血清IFN-γ、IL-1β、IL-2和IL-6含量以及21日龄哺乳仔猪血清IFN-γ、IL-2和IL-6含量显著降低(P<0.05)。5)与对照组相比,低剂量组哺乳第1天和第21天母猪血清免疫球蛋白G(IgG)含量与21日龄哺乳仔猪血清免疫球蛋白A(IgA)、IgG和免疫球蛋白M(IgM)含量均显著提高(P<0.05);中剂量组哺乳第1天母猪与21日龄哺乳仔猪血清IgA、IgG和IgM含量以及第21天母猪血清IgG含量均显著提高(P<0.05);高剂量组哺乳第1天母猪血清IgA、IgM、IgG含量以及21日龄哺乳仔猪血清IgA含量均显著升高(P<0.05)。综上所述,在基础饲粮中添加复方刺五加散对母猪和哺乳仔猪的健康状况无不良影响,但可增强母猪与哺乳仔猪的抗氧化与免疫功能,且以0.5 kg/t的添加量最为适宜。

关键词：复方刺五加散母猪哺乳仔猪抗氧化能力免疫指标

同位素稀释液相色谱-串联质谱法测定血清皮质醇候选参考方法的建立及评价

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中华检验医学杂志 2024年第8期47卷 927-935页

作者：黄昌发林丹付晓雅翁旭琦孙雅玲李伟广州万孚生物技术股份有限公司广州510663

目的建立同位素稀释液相色谱-串联质谱法(ID-LC/MS/MS)测定血清中皮质醇浓度的候选参考方法。方法方法学建立。将样本与皮质醇内标混匀后加入碳酸钠溶液碱化处理, 正己烷/乙酸乙酯进行液液萃取, 流动相采用甲醇水溶液等度洗脱, 质谱采... 详细信息

目的建立同位素稀释液相色谱-串联质谱法(ID-LC/MS/MS)测定血清中皮质醇浓度的候选参考方法。方法方法学建立。将样本与皮质醇内标混匀后加入碳酸钠溶液碱化处理, 正己烷/乙酸乙酯进行液液萃取, 流动相采用甲醇水溶液等度洗脱, 质谱采用电喷雾电离源正离子模式(ESI+)及多反应监测(MRM)分析方法, 标准溶液及内标的配制、样本与内标的混合均采用重量法进行控制, 括号法计算皮质醇浓度。参照美国临床实验室标准化协会C62-A、C50-A及国内专家共识文件《液相色谱-质谱临床应用建议》《液相色谱串联质谱临床检测方法的开发与验证》等对方法正确度、精密度、特异性、线性、检测限和定量下限等性能进行系统评价。数据经Excel2019进行处理, 最小二乘法进行线性回归分析。结果方法准确精密, 测定有证标准物质ERM-DA192、ERM-DA193以及2021—2023年RELA样本的相对偏倚均<2%, 加标回收率98.2%~101.1%, 批内及批间不精密度均<2%, 检测结果不受其他结构类似物干扰, 在25~1 600 nmol/L范围内呈现出良好线性, 方法检测限和定量下限分别为0.5和1.0 nmol/L。经溯源后的皮质醇测定试剂盒(化学发光免疫分析法)与该候选参考方法同时测定46例临床血清样本的相关性良好。结论建立了一种灵敏、准确且操作简便的血清皮质醇浓度测定候选参考方法, 可为临床常规测定方法的量值溯源及正确度评价提供参考。

关键词：氢化可的松同位素稀释液相色谱-串联质谱候选参考方法

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影响大伙房水库鲢鳙渔获量的环境因子分析

水产学报 1997年第S1期 31-38页

作者：严朝晖史为良夏德昌袁付张建华大连水产学院养殖系!116024湖南省长江生物技术有限公司

应用灰色关联分析方法，分析了大伙房水库1981年至1991年11年间的21个环境因子对鲢鳙渔获量的影响，以及降水量与其它环境因子间的关系，指出了鱼种投放量、降水量和捕捞强度指标是影响鲢鳙渔获量最根本的因素，而降水形成的地表径流最... 详细信息

应用灰色关联分析方法，分析了大伙房水库1981年至1991年11年间的21个环境因子对鲢鳙渔获量的影响，以及降水量与其它环境因子间的关系，指出了鱼种投放量、降水量和捕捞强度指标是影响鲢鳙渔获量最根本的因素，而降水形成的地表径流最主要的起到了向水库输入营养盐的作用。通过对鲢鳙渔获量与各环境因子的动态关联分析，表明水库利用网箱培育鲢鳙鱼种是解决水库鱼种困难的一条优越途径。

关键词：水库渔获量环境因子灰色关联分析

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不同条件下木聚糖酶稳定性的研究

中国饲料 2008年第15期 27-29页

作者：李富伟汤海鸥汪勇北京挑战生物技术有限公司

本试验研究了木聚糖酶在不同温度、pH值和保存条件下酶活变化情况。结果表明:木聚糖酶整体耐高温性能较好,85℃下相对酶活仍然能保持在70%以上,同时随着处理时间的延长在不同温度下酶活损失也呈增加趋势;偏酸性条件木聚糖酶能保持较高... 详细信息

本试验研究了木聚糖酶在不同温度、pH值和保存条件下酶活变化情况。结果表明:木聚糖酶整体耐高温性能较好,85℃下相对酶活仍然能保持在70%以上,同时随着处理时间的延长在不同温度下酶活损失也呈增加趋势;偏酸性条件木聚糖酶能保持较高的酶活,碱性条件不利于木聚糖酶的存活;在常温和37℃恒温保存条件下木聚糖酶都具有良好的稳定性。

关键词：木聚糖酶温度 pH值酶活力