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基于MCT1调控的髓鞘轴突能量代谢探究加减薯蓣丸改善血管性痴呆伴抑郁小鼠抑郁行为和髓鞘再生

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中国实验方剂学杂志 2024年第19期30卷 21-29页

作者：鄢文静谭子虎杨琼向庆伟周剑杰湖北中医药大学武汉430065 湖北省中医院武汉430061 湖北时珍实验室武汉430061 中医肝肾研究及应用湖北省重点实验室武汉430061

目的:探究加减薯蓣丸对血管性痴呆(VaD)伴抑郁小鼠的作用机制。方法:3月龄雄性C57/BL6小鼠7只,采用双侧颈动脉狭窄(BCAS)构建VaD模型,激光散斑成像测量BCAS小鼠术前、术后局部脑血流量(rCBF);随后采用BCAS法结合慢性不可预测刺激(CUMS)... 详细信息

目的:探究加减薯蓣丸对血管性痴呆(VaD)伴抑郁小鼠的作用机制。方法:3月龄雄性C57/BL6小鼠7只,采用双侧颈动脉狭窄(BCAS)构建VaD模型,激光散斑成像测量BCAS小鼠术前、术后局部脑血流量(rCBF);随后采用BCAS法结合慢性不可预测刺激(CUMS),构建VaD伴抑郁小鼠模型,将BCAS/CUMS小鼠分为模型组、氟西汀组(0.01 g·kg^(-1))、加减薯蓣丸高、中、低剂量组(20、10、5 g·kg^(-1)),对照组为假手术且无慢性不可预测刺激(sham)组,每组10只。悬尾实验、糖水偏好实验检测小鼠抑郁行为,免疫荧光法检测小鼠胼胝体(CC)髓鞘相关糖蛋白(MAG)、髓鞘碱性蛋白(MBP)、神经丝蛋白重链(NF200)、抗非磷酸化神经细丝蛋白抗体(SMI32)的分布及表达变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠胼胝体中单羧酸转运蛋白1(MCT1)、MBP、MAG、少突胶质细胞糖蛋白(MOG)、淀粉样蛋白前体(APP)、NF200、朗飞氏结标记物(Caspr)、电压门控性钠通道(Nav1.6)蛋白表达,乳酸(LD)试剂盒检测各组小鼠血清中LD含量的表达,超微透射电镜观察髓鞘超微结构。结果:激光散斑成像结果显示,BCAS术后10 min,局部脑血流量即刻出现下降(P实验中不动时间显著增加(P实验中不动时间显著减少(P<0.01);LD检测结果显示,BCAS/CUMS小鼠LD含量最高(P<0.01),加减薯蓣丸干预后可显著降低LD含量(P<0.01);免疫荧光结果显示,与sham组比较,BCAS/CUMS小鼠胼胝体MAG、MBP、NF200的荧光强度表达降低,SMI32荧光强度增加,加减薯蓣丸高、中、低剂量组及氟西汀组均可不同程度增加MAG、MBP、NF200荧光强度,降低SMI32荧光强度;Western blot结果显示,与sham组比较,BCAS/CUMS小鼠胼胝体中MCT1、MBP、MOG、MAG、NF200、Caspr蛋白表达水平下降(P<0.05,P<0.01),APP、Nav1.6蛋白相对表达水平升高,加减薯蓣丸干预后可以不同程度改善上述趋势(P<0.05,P<0.01);超微透射电镜结果表明,与sham组比较,BCAS/CUMS造模后髓鞘超微结构破坏,轴突萎缩,加减薯蓣丸干预后,髓鞘结构受损程度减轻。结论:加减薯蓣丸可能通过上调MCT1,改善VaD小鼠LD在髓鞘与轴突中的转运障碍,促进胼胝体髓鞘再生并增加髓鞘结构完整性,改善抑郁表型。

关键词：血管性痴呆抑郁加减薯蓣丸单羧酸转运蛋白1 髓鞘

湖北枫杨总黄酮通过调控PI3K/AKT信号通路抑制成纤维细胞样滑膜细胞的迁移和侵袭

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中国病理生理杂志 2024年第1期40卷 134-140页

作者：吴昊陈国庆卢曼高瑛江蕲玲罗豪楠袁林向阳湖北恩施学院医学部湖北民族大学风湿性疾病发生与干预湖北省重点实验室湖北恩施445000

目的:观察湖北枫杨总黄酮(PHSTF)对人类风湿成纤维细胞样滑膜细胞(MH7A细胞)迁移和侵袭的抑制作用并初步探讨其可能作用机制。方法:将MH7A细胞分为分为对照组(不做任何处理)、低剂量(6.25 mg/L)PHSTF组、中剂量(12.5 mg/L)PHSTF组、高剂... 详细信息

目的:观察湖北枫杨总黄酮(PHSTF)对人类风湿成纤维细胞样滑膜细胞(MH7A细胞)迁移和侵袭的抑制作用并初步探讨其可能作用机制。方法:将MH7A细胞分为分为对照组(不做任何处理)、低剂量(6.25 mg/L)PHSTF组、中剂量(12.5 mg/L)PHSTF组、高剂量(25 mg/L)PHSTF组、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)激动剂740Y-P(10μmol/L)组和740Y-P(10μmol/L)+高剂量(25 mg/L)PHSTF组。采用CCK-8法检测MH7A细胞活力;划痕实验和Transwell实验检测MH7A细胞的迁移和侵袭;Western blot检测基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9、PI3K、p-PI3K、AKT和p-AKT蛋白水平。结果:与对照组相比,各剂量PHSTF组MH7A细胞活力显著降低(P室的细胞显著减少(P细胞的迁移和侵袭能力(P细胞迁移和侵袭。

关键词：湖北枫杨总黄酮成纤维细胞样滑膜细胞类风湿关节炎 PI3K/AKT信号通路

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大黄鱼C型凝集素受体Clec4e的分子鉴定及凝集特性

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水产学报 2024年第2期48卷 31-45页

作者：张鑫洛王永阳吴子良黄小红陈新华张伟妮海水养殖生物育种全国重点实验室福建省海洋生物技术重点实验室福建农林大学中西兽医结合与动物保健福建省高校重点实验室

为了揭示硬骨鱼C型凝集素受体(C-type lectin receptor,CTLR)的生物学功能，实验以从大黄鱼转录组数据库中筛选出的一个CTLR基因—C型凝集素结构域家族4成员E基因(Clec4e)为研究对象，研究其分子特征、表达分布和凝集特性。结果显示，Lc... 详细信息

为了揭示硬骨鱼C型凝集素受体(C-type lectin receptor,CTLR)的生物学功能，实验以从大黄鱼转录组数据库中筛选出的一个CTLR基因—C型凝集素结构域家族4成员E基因(Clec4e)为研究对象，研究其分子特征、表达分布和凝集特性。结果显示，LcClec4e cDNA全长1 546 bp，开放阅读框(ORF)771 bp，编码254个氨基酸。LcClec4e的N端有一个跨膜区，无信号肽，C端含有一个糖识别结构域(CRD)，其中含有糖结合位点EPN和WFD以及6个可形成二硫键的保守半胱氨酸。系统发育分析表明，LcClec4e与多种鲈形目鱼类Clec4e具有较近的亲缘关系。荧光定量PCR结果显示，LcClec4e在所检测的10种组织中呈组成型分布，且在肝脏中表达量最高；LcClec4e在来源于大黄鱼头肾组织的原代巨噬细胞、淋巴细胞和粒细胞中均有表达，且在巨噬细胞中表达量最高；经灭活溶藻弧菌刺激后，LcClec4e在3种免疫细胞中的表达均极显著上调。原核表达的重组LcClec4e胞外段(recombinant LcClec4e-extracellular domain,rLcClec4e-ex)具有Ca2+依赖性的凝集活性，可凝集小鼠、家兔的红细胞，以及嗜水气单胞菌、变形假单胞菌、溶藻弧菌和坎氏弧菌等4种水产常见的革兰氏阴性菌。D-葡萄糖、D-果糖、D-甘露糖、D-麦芽糖、α-乳糖和脂多糖均可抑制rLcClec4e-ex对大黄鱼重要病原菌变形假单胞菌的凝集作用，说明LcClec4e可能与变形假单胞菌表面的糖类物质结合。上述结果提示，LcClec4e可能作为一种模式识别受体，通过结合病原菌表面的糖类病原体相关分子模式来识别病原，参与大黄鱼抗细菌感染的免疫防御。

关键词：大黄鱼 C型凝集素受体(CTLR) Clec4e 红细胞凝集细菌凝集

p38 MAPK信号调控铁死亡参与运动改善T2DM小鼠非酒精性脂肪性肝病

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生物化学与生物物理进展 2024年

作者：张宝文李颖高原盛科研王志寇现娟武汉体育学院运动医学院运动训练监控湖北省重点实验室

目的从运动调控细胞铁死亡的角度，探究8周跑台运改善T2DM合并NAFLD小鼠肝细胞脂肪变性的分子机制。方法选取8只8周龄健康m/m小鼠作为Con组，32只同周龄db/db小鼠被随机分为db/db组、db+Exe组、db+SB203580组及db+Exe+SB203580组，每组... 详细信息

目的从运动调控细胞铁死亡的角度，探究8周跑台运改善T2DM合并NAFLD小鼠肝细胞脂肪变性的分子机制。方法选取8只8周龄健康m/m小鼠作为Con组，32只同周龄db/db小鼠被随机分为db/db组、db+Exe组、db+SB203580组及db+Exe+SB203580组，每组8只。db+Exe组、db+Exe+SB203580组进行持续8周的中等强度跑台运动干预(40 min/d，5 d/w)，db+SB203580组及db+Exe+SB203580组进行8周的p38 MAPK抑制剂SB203580腹腔注射处理(5 mg/kg，5 d/w)，实验期间每周定时检测小鼠体重及空腹血糖。8周干预结束后，油红O及HE染色观察小鼠肝脏病理性改变状况；相应的ELISA试剂盒测定血脂、肝功能、肝脏铁离子及氧化应激水平；qRT-PCR测定脂肪合成及氧化应激相关mRNA转录水平；免疫组织化学染色观察铁死亡相关蛋白的表达水平；Western blot检测肝组织中脂质合成及铁死亡相关蛋白表达水平。结果 8周跑台运动降低了db/db小鼠体重、血糖、肝指数及血脂水平，改善其肝脏脂肪变性，下调肝组织Fe2+、MDA、MCP-1、IL-6、SREBF1、ACC1表达水平，并上调了db/db小鼠肝组织中GSH含量及铁死亡相关蛋白NRF2、HO-1、SLC7A11、GPX4蛋白表达水平。运动联合p38 MAPK抑制剂干预显著下调db/db小鼠肝组织ACC1、MCP-1、IL-6的mRNA及Fe2+、MDA水平，并上调GSH水平。然而，与跑台运动组相比，运动联合p38 MAPK抑制剂组小鼠肝脏内Fe2+、MDA、MCP-1、SREBF1表达显著上升，GSH及铁死亡相关蛋白表达水平显著下降。此外，与单纯抑制剂组相比，运动联合抑制剂干预组小鼠肝组织铁蓄积及脂质过氧化现象明显改善。结论 8周跑台运动可能是通过p38 MAPK依赖途径抑制肝细胞铁死亡，缓解肝细胞脂质过氧化及脏脂肪变性，从而改善T2DM小鼠NAFLD。

关键词：跑台运动非酒精性脂肪性肝病铁死亡 p38 MAPK 糖尿病

抗阻运动通过TREM2/NF-κB/STAT3信号通路调控海马小胶质细胞极化进而改善2型糖尿病小鼠认知功能障碍

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生理学报 2024年

作者：张宝文李颖寇现娟运动训练监控湖北省重点实验室武汉体育学院运动医学院

本文旨在探究抗阻运动对改善2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus, T2DM)小鼠认知功能障碍的影响及作用机制。取6只8周龄雄性m/m小鼠作对照(Con)组，12只同周龄db/db小鼠随机分为模型对照(db/db)组和抗阻运动(db+RE)组，每组6只，给予db... 详细信息

本文旨在探究抗阻运动对改善2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus, T2DM)小鼠认知功能障碍的影响及作用机制。取6只8周龄雄性m/m小鼠作对照(Con)组，12只同周龄db/db小鼠随机分为模型对照(db/db)组和抗阻运动(db+RE)组，每组6只，给予db+RE组小鼠8周抗阻运动干预，每周检测小鼠空腹血糖及体重。干预结束后，用水迷宫实验检测小鼠空间学习记忆能力，Nissl染色检测小鼠海马组织神经元损伤，Westernblot检测小鼠海马组织中PSD93、PSD95、BDNF、CREB、IL-6、IL-1β、TNF-α、Iba-1、i NOS、CD206、Arg1、TREM2、NF-κB、p-STAT3、STAT3蛋白表达水平，q RT-PCR检测海马组织炎症因子及髓系细胞触发受体2 (triggering receptor expressed on myeloid cells 2, TREM2)的m RNA表达水平，免疫荧光染色检测Iba-1、CD206、CD86、TREM2蛋白表达和共定位。结果显示，与Con组相比，db/db组小鼠空间学习记忆能力下降，海马神经元受损，PSD93、 PSD95、 BDNF、 CD206、 Arg1、 TREM2蛋白表达水平及pCREB/CREB比率显著下调，炎症因子IL-6、IL-1β、TNF-α的m RNA及蛋白表达水平显著上升，i NOS、Iba-1和NF-κB蛋白水平及p-STAT3/STAT3比率显著上升。8周抗阻运动可改善db/db小鼠的空间学习记忆能力，减轻海马神经元损伤，促进海马组织M2型小胶质细胞极化进而缓解神经炎症。上述结果提示，抗阻运动可以改善T2DM小鼠认知功能障碍，其机制可能是通过TREM2/NF-κB/STAT3信号通路调控海马组织小胶质细胞极化而实现。

关键词：抗阻运动糖尿病认知功能障碍小胶质细胞极化 TREM2

XLαs通过影响线粒体功能调控颅骨发育的研究

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口腔医学研究 2024年第7期40卷 587-592页

作者：左祎怡何青口颌系统重建与再生全国重点实验室口腔生物医学教育部重点实验室口腔医学湖北省重点实验室武汉大学口腔医(学)院湖北武汉430079

目的:本研究旨在探究超大型刺激性G蛋白α亚单位(extra-large stimulatory G protein alpha subunit, XLαs)在小鼠颅骨发育和成骨分化中的功能及分子机制。方法:通过构建XLαs第一外显子敲除的小鼠模型,运用阿尔新蓝茜素红染色技术分... 详细信息

目的:本研究旨在探究超大型刺激性G蛋白α亚单位(extra-large stimulatory G protein alpha subunit, XLαs)在小鼠颅骨发育和成骨分化中的功能及分子机制。方法:通过构建XLαs第一外显子敲除的小鼠模型,运用阿尔新蓝茜素红染色技术分析颅骨表型变化。从小鼠颅骨中分离原代颅骨成骨细胞,进行体外培养并诱导成骨分化,同时通过实时荧光定量聚合酶链反应和RNA测序技术对基因表达及其功能进行分析。结果:实验结果显示,XLαs敲除小鼠颅缝宽度增加(P<0.05),颅骨未矿化区域明显增多(P<0.001),且成骨分化能力受抑制(P<0.01)。RNA测序进一步揭示XLαs缺失影响了线粒体功能。结论:本研究证实了XLαs在调节颅骨发育和成骨分化中的关键作用,特别是通过影响线粒体功能来发挥其调控效应。这一发现为针对GNAS突变导致的颅骨发育异常提供了新的治疗策略,具有潜在的临床应用价值。

关键词：超大型刺激性G蛋白α亚单位颅骨发育矿化线粒体

双调蛋白经PI3K/AKT通路促进ATDC5细胞成骨分化

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口腔医学研究 2024年第7期40卷 599-604页

作者：王心怡王心茹王硕王家伟口颌系统重建与再生全国重点实验室口腔生物医学教育部重点实验室口腔医学湖北省重点实验室武汉大学口腔医(学)院湖北武汉430079

目的:探究双调蛋白(amphiregulin, Areg)对ATDC5细胞增殖和成骨分化的影响。方法:实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(quantitative real time polymerase chain reaction, qRT-PCR)检测ATDC5细胞诱导成骨分化过程中Areg的表达;免疫组织化... 详细信息

目的:探究双调蛋白(amphiregulin, Areg)对ATDC5细胞增殖和成骨分化的影响。方法:实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(quantitative real time polymerase chain reaction, qRT-PCR)检测ATDC5细胞诱导成骨分化过程中Areg的表达;免疫组织化学染色分析胫骨生长板Areg表达量。Areg过表达或敲低慢病毒感染ATDC5细胞,CCK-8检测Areg对ATDC5细胞增殖的影响;qRT-PCR和Western blot分别从mRNA和蛋白水平检测Areg对ATDC5细胞诱导成骨分化7 d或14 d相关标志物Sox9、Ⅱ型胶原蛋白(collagentypeⅡalpha1chain, Col2α1)、Ⅹ型胶原蛋白(collagentypeⅩalpha1chain, ColⅩα1)、骨桥蛋白(osteopontin, OPN)和Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor 2,Runx2)的影响;甲苯胺蓝、阿尔新蓝和茜素红染色检测细胞外基质形成。Western blot和染色检测ATDC5细胞诱导成骨分化7 d及加入p-蛋白激酶B(p-protein kinase B,p-AKT)抑制剂MK2206后磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase, PI3K)/AKT通路的磷酸化水平和细胞外基质变化。结果:Areg在ATDC5细胞成骨分化过程中始终表达,并于7 d达到峰值;胫骨生长板可见软骨细胞高表达Areg;过表达Areg后细胞活力,细胞成骨分化能力和细胞外基质形成显著增加;敲低Areg后则表现为相反的结果;Areg过表达激活了PI3K/AKT通路,p-AKT抑制剂部分逆转了PI3K/AKT通路的激活和Areg过表达对软骨细胞外基质生成的促进作用。结论:Areg促进ATDC5细胞增殖,且部分经PI3K/AKT通路促进ATDC5细胞成骨分化。

关键词：软骨细胞细胞增殖成骨向分化磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B信号通路

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以藏药红景天为碳源的碳点制备及表征研究

生物学杂志 2024年

作者：樊金昊许仙明孙桂鸿郭明雄西藏大学生态环境学院青藏高原生物多样性与生态环境保护教育部重点实验室武汉大学生命科学学院细胞稳态湖北省重点实验室武汉大学泰康医学院(基础医学院)过敏及免疫相关疾病湖北省重点实验室

为探究不同溶剂提纯对红景天碳点性质的影响,通过水热法对藏药红景天粉末高温碳化,而后分离纯化制备了红景天水溶性碳点(RWW-CDs)和红景天醇溶性碳点(RWE-CDs)。采用TEM、紫外-可见光光谱、荧光光谱、FTIR、XPS、XRD比较分析两种不同方... 详细信息

为探究不同溶剂提纯对红景天碳点性质的影响,通过水热法对藏药红景天粉末高温碳化,而后分离纯化制备了红景天水溶性碳点(RWW-CDs)和红景天醇溶性碳点(RWE-CDs)。采用TEM、紫外-可见光光谱、荧光光谱、FTIR、XPS、XRD比较分析两种不同方法制备的红景天-CDs的表征数据。发现RWE-CDs的尺寸大于RWW-CDs。两种红景天碳点的荧光性能良好,但RWW-CDs的荧光性能优于RWE-CDs。XPS结果显示,两种红景天碳点的主要构成均为C、O、N等3种元素,RWE-CDs中N元素含量极低且C元素含量高于RWW-CDs。XRD结果显示,制备的两种红景天碳点结晶相与CQD的{10.0}平面一致,但RWE-CDs的特征峰优于RWW-CDs。分析其傅里叶红外光谱发现RWW-CDs的谱图出峰较为均一和稳定,RWE-CDs则杂峰较多,这可能是由于两种碳点提取的溶剂不同而造成的。同时使用CCK-8法和Calcein/PI染色法确定了两种方法提纯的红景天碳点无明显生物学毒性差异。还对两种碳点的p H荧光稳定性和细胞成像进行了探究。

关键词：藏药红景天碳点 TEM XRD XPS

富血小板纤维蛋白对牙龈成纤维细胞生物学功能的影响

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口腔医学研究 2024年第7期40卷 611-616页

作者：王玉花柴纪华张好建口颌系统重建与再生全国重点实验室口腔生物医学教育部重点实验室口腔医学湖北省重点实验室武汉大学口腔医(学)院湖北武汉430079

目的:探究冷冻干燥富血小板纤维蛋白(freeze-dried platelet-rich fibrin, FD-PRF)对人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblasts, hGFs)功能的影响以及其抗菌性能,为口腔黏膜炎的防治提供新思路。方法:采用流式细胞术、CCK-8检测细... 详细信息

目的:探究冷冻干燥富血小板纤维蛋白(freeze-dried platelet-rich fibrin, FD-PRF)对人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblasts, hGFs)功能的影响以及其抗菌性能,为口腔黏膜炎的防治提供新思路。方法:采用流式细胞术、CCK-8检测细胞增殖(cell counting kit-8,CCK-8)、细胞划痕和Transwell实验,检测FD-PRF对hGFs细胞周期、增殖和迁移的影响;采用倾注平板法和振荡培养法研究FD-PRF的抗菌作用。结果:CCK-8实验结果表明,随着FD-PRF浓度升高,hGFs的细胞数量显著增加。细胞周期结果显示,S-G2/M期的细胞比例:5%FD-PRF组>1%FD-PRF组>对照组,而G0-G1期细胞则相反。迁移实验结果显示,FD-PRF显著提升了hGFs的迁移速度。抗菌实验结果显示,FD-PRF组相比于对照组的大肠杆菌和金黄色葡萄球菌数量明显减少。结论:FD-PRF促进hGFs进入细胞分裂期,进而促进细胞增殖。FD-PRF促进hGFs迁移。此外,本研究还证实FD-PRF具有一定的抗菌性。提示FD-PRF可以促进口腔黏膜炎的愈合。

关键词：冷冻干燥富血小板纤维蛋白成纤维细胞抗菌性口腔黏膜炎