大黄鱼C型凝集素受体Clec4e的分子鉴定及凝集特性

作     者：张鑫洛 王永阳 吴子良 黄小红 陈新华 张伟妮 ZHANG Xinluo;WANG Yongyang;WU Ziliang;HUANG Xiaohong;CHEN Xinhua;ZHANG Weini

作者机构：海水养殖生物育种全国重点实验室福建省海洋生物技术重点实验室 福建农林大学中西兽医结合与动物保健福建省高校重点实验室 

出 版 物：《水产学报》 (Journal of Fisheries of China)

年 卷 期：2024年第48卷第2期

页      面：31-45页

核心收录：

学科分类：0908[农学-水产] 09[农学] 

基　　金：国家自然科学基金(31802333)~~ 

主　　题：大黄鱼 C型凝集素受体(CTLR) Clec4e 红细胞凝集 细菌凝集 

摘      要：为了揭示硬骨鱼C型凝集素受体(C-type lectin receptor,CTLR)的生物学功能，实验以从大黄鱼转录组数据库中筛选出的一个CTLR基因—C型凝集素结构域家族4成员E基因(Clec4e)为研究对象，研究其分子特征、表达分布和凝集特性。结果显示，LcClec4e cDNA全长1 546 bp，开放阅读框(ORF)771 bp，编码254个氨基酸。LcClec4e的N端有一个跨膜区，无信号肽，C端含有一个糖识别结构域(CRD)，其中含有糖结合位点EPN和WFD以及6个可形成二硫键的保守半胱氨酸。系统发育分析表明，LcClec4e与多种鲈形目鱼类Clec4e具有较近的亲缘关系。荧光定量PCR结果显示，LcClec4e在所检测的10种组织中呈组成型分布，且在肝脏中表达量最高；LcClec4e在来源于大黄鱼头肾组织的原代巨噬细胞、淋巴细胞和粒细胞中均有表达，且在巨噬细胞中表达量最高；经灭活溶藻弧菌刺激后，LcClec4e在3种免疫细胞中的表达均极显著上调。原核表达的重组LcClec4e胞外段(recombinant LcClec4e-extracellular domain,rLcClec4e-ex)具有Ca2+依赖性的凝集活性，可凝集小鼠、家兔的红细胞，以及嗜水气单胞菌、变形假单胞菌、溶藻弧菌和坎氏弧菌等4种水产常见的革兰氏阴性菌。D-葡萄糖、D-果糖、D-甘露糖、D-麦芽糖、α-乳糖和脂多糖均可抑制rLcClec4e-ex对大黄鱼重要病原菌变形假单胞菌的凝集作用，说明LcClec4e可能与变形假单胞菌表面的糖类物质结合。上述结果提示，LcClec4e可能作为一种模式识别受体，通过结合病原菌表面的糖类病原体相关分子模式来识别病原，参与大黄鱼抗细菌感染的免疫防御。