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KRT18与mRNA及长链非编码RNA互作调控椎间盘髓核细胞损伤的机制

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中国组织工程研究 2025年第2期29卷 312-321页

作者：刘钟元李扬张志文湖北中医药大学针灸骨伤学院湖北省武汉市430061 湖北中医药大学附属医院、湖北省中医院、湖北省中医药研究院湖北省武汉市430061

背景:椎间盘中差异表达的RNA结合蛋白在椎间盘退变中发挥着关键作用,其中RNA结合蛋白KRT18水平的降低与椎间盘退行性病变相关,但其在椎间盘髓核细胞中的具体作用尚未完全确定。目的:探讨KRT18与mRNA及长链非编码RNA结合互作对椎间盘髓... 详细信息

背景:椎间盘中差异表达的RNA结合蛋白在椎间盘退变中发挥着关键作用,其中RNA结合蛋白KRT18水平的降低与椎间盘退行性病变相关,但其在椎间盘髓核细胞中的具体作用尚未完全确定。目的:探讨KRT18与mRNA及长链非编码RNA结合互作对椎间盘髓核细胞的影响及机制。方法:对因腰部骨折或椎间盘退行性病变而接受椎间融合术的患者进行人体髓核组织取样获得正常髓核细胞和退变髓核细胞,并进行iRIP-seq、功能富集分析以及DNA微阵列分析,随后根据分析结果在髓核细胞中敲低KRT18,通过蛋白免疫印迹及qRt-PCR在蛋白和RNA水平检测相关基因水平的表达。结果与结论:通过iRIP-seq分析发现GUAAUC和AGCCUC序列中存在大量的KRT18结合位点,表明KRT18可参与调控RNA的转录、翻译、稳定性或在细胞信号传导途径中发挥作用。其能够与成熟的mRNA稳定结合,其中表达较高的基因包括CRLF1及IGFBP4等,同时与其结合的长链非编码RNA的峰值基因包括SNHG25、SNHG12、NEAT1、USP32、EIF4A2和CDH4,这些基因多涉及细胞凋亡、炎症等多种生物过程,并且能介导细胞外基质代谢的相关通路,KRT18能够调控它们的稳定性、转运、翻译、剪接等多个方面的功能,进而影响基因的表达和细胞功能。实验结果验证了在髓核细胞中敲低KRT18,细胞外基质代谢水平被抑制出现失衡,导致体外椎间盘退变。该研究首次从KRT18与mRNA及长链非编码RNA结合的角度探讨其调控机制,并推测了KRT18在椎间盘退变发病机制中的潜在功能,为今后KRT18关键功能的研究奠定了基础。

关键词：椎间盘退行性变 RNA结合蛋白 KRT18 iRIP-seq mRNA 长链非编码RNA

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基于指纹图谱结合化学模式识别的精天颗粒质量评价

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中国药房 2025年第3期36卷 300-305页

作者：赵伟陈树和闫斌郑琼芳张伟欣巴元明湖北中医药大学药学院武汉430065 湖北省中医院/湖北中医药大学附属医院/湖北省中医药研究院药事部武汉430061

目的建立精天颗粒的超高效液相色谱(UPLC)指纹图谱,并结合化学模式识别法评价其质量。方法以Luna~?Omega Polar C18(150 mm×2.1 mm,1.6μm)为色谱柱,以乙腈-0.2%磷酸溶液为流动相进行梯度洗脱,流速为0.2 mL/min,柱温为30℃,检测波长... 详细信息

目的建立精天颗粒的超高效液相色谱(UPLC)指纹图谱,并结合化学模式识别法评价其质量。方法以Luna~?Omega Polar C18(150 mm×2.1 mm,1.6μm)为色谱柱,以乙腈-0.2%磷酸溶液为流动相进行梯度洗脱,流速为0.2 mL/min,柱温为30℃,检测波长为265 nm。以16号峰为参照峰,通过《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)》建立精天颗粒的UPLC指纹图谱,指认共有峰并进行相似度评价,同时确认每个共有峰的饮片归属。运用化学模式识别方法中的层次聚类分析(HCA)、主成分分析(PCA)对13批样品(S1~S13)进行分类,并采用正交偏最小二乘-判别分析(OPLS-DA)来识别导致不同批次样品间差异的关键性成分。结果所建UPLC方法精密度、重复性、稳定性的RSD均不大于4.4%。在13批精天颗粒指纹图谱中共标定出25个共有峰;通过与对照指纹图谱比对,指认了其中10个共有峰,分别为3号峰(5-羟甲基糠醛)、5号峰(红景天苷)、8号峰(绿原酸)、15号峰(肉桂酸)、19号峰(芦荟大黄素)、20号峰(甘草酸铵)、21号峰(大黄酸)、23号峰(大黄素)、24号峰(甘草次酸)、25号峰(大黄酚)。13批样品指纹图谱的相似度为0.955~0.996。HCA结果显示,13批样品可聚为3类,其中S1、S5、S7、S11~S13为一类,S4、S6为一类,S2、S3、S8~S10为一类。PCA结果显示,主成分1~7的累计方差贡献率为92.666%。OPLS-DA进一步确定了13个差异性成分,这些成分主要来源于酒黄精、红景天、熟大黄和炙甘草等。结论所建立的精天颗粒UPLC指纹图谱方法简便、稳定、重复性良好,结合化学模式识别方法能有效揭示精天颗粒不同批次间的整体质量差异。方中酒黄精、红景天、熟大黄、穿山龙、猪苓、桂枝、炙甘草的质量是影响精天颗粒整体质量的关键。

关键词：精天颗粒指纹图谱超高效液相色谱法层次聚类分析主成分分析正交偏最小二乘-判别分析质量评价

基于中西医临床病证特点的自身免疫性甲状腺炎动物模型分析

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中国实验方剂学杂志 2025年

作者：贾思锋张卓段昱宇颜克秋左新河李扬赵勇湖北中医药大学湖北中医药大学附属湖北省中医院湖北时珍实验室

目的：自身免疫性甲状腺炎（AIT）是一种复杂的免疫相关疾病，目前尚无明确的治疗方法，AIT的发病机理与治疗药物是中西医研究的重点，笔者基于AIT的中西医诊断和临床病证特点，立足于动物模型评价新方法，对现有AIT动物临床吻合度进行... 详细信息

目的：自身免疫性甲状腺炎（AIT）是一种复杂的免疫相关疾病，目前尚无明确的治疗方法，AIT的发病机理与治疗药物是中西医研究的重点，笔者基于AIT的中西医诊断和临床病证特点，立足于动物模型评价新方法，对现有AIT动物临床吻合度进行评价，并提出建议与展望。方法：通过数据库对现有AIT动物模型的相关文献进行检索，按照中西医诊断标准，对模型的核心症状及伴随症状进行赋值，综合评估其临床吻合度。结果：AIT模型实验动物的选择以鼠类居多，造模方法包括疫苗免疫法，单纯性碘剂诱导法，异源性甲状腺抗原免疫法和高碘水联合抗原免疫法，中西医临床病证的平均吻合度分别为40%、60%、54%、63%，高碘水联合抗原免疫法的西医吻合度最高。中医病理造模方法较少，仅有肝郁脾虚型大鼠模型，其与中西医临床吻合度较高。大多数模型基于西医理论设计，能满足西医的表面有效性和结构有效性标准，但在中医证候的细化与明确区分方面仍有所欠缺。结论：现有AIT病证结合动物模型的构建仍主要集中在西医的病理特征上，对中医证候的全面反映存在不足，今后可在西医病理特征的基础上融入中医的证候特征，构建多因素、动态的病证结合模型，更好地构建符合中医药理论的实验平台，为AIT的发病机制与治疗策略提供更加全面的支持和指导。

关键词：自身免疫性甲状腺炎动物模型中西医病证结合临床吻合度

基于海马神经炎症探讨安寐丹对睡眠剥夺大鼠模型神经元损伤的保护作用及机制

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中国实验方剂学杂志 2025年

作者：谢光璟徐子绚张军路张健夏婧徐波湖北中医药大学湖北时珍实验室湖北省中医院

目的：探讨安寐丹（AMD）对睡眠剥夺大鼠模型海马神经炎症的影响。方法：将SD大鼠随机分为空白组、模型组、安寐丹组和褪黑素组4组，10只/组。通过改良多平台水环境法制备睡眠剥夺模型，安寐丹组给药剂量18.18 g·kg-1·d-1，褪黑素组... 详细信息

目的：探讨安寐丹（AMD）对睡眠剥夺大鼠模型海马神经炎症的影响。方法：将SD大鼠随机分为空白组、模型组、安寐丹组和褪黑素组4组，10只/组。通过改良多平台水环境法制备睡眠剥夺模型，安寐丹组给药剂量18.18 g·kg-1·d-1，褪黑素组给药剂量100 mg·kg-1·d-1，空白组和模型组给予等容纯水，灌胃给药为4周。动物行为视频系统评估大鼠自发活动变化，酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠血清白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达水平，苏木素-伊红（HE）染色法观察海马锥体神经元形态结构变化，透射电镜观察海马神经元超微结构变化，免疫荧光检测海马脑源性神经营养因子（BDNF）及神经生长因子（NGF）的表达，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测核转录因子-κB（NF-κB）、磷酸化NF-κB（p-NF-κB）、NOD样受体蛋白3（NLRP3）、胱天蛋白酶-1（Caspase-1）的表达。结果：与空白组比较，模型组活动时间及活动次数增加，海马锥体细胞结构损伤增加，数量减少，同时海马超微结构损伤，线粒体嵴断裂，空泡化加重；p-NF-κB p65、NLRP3、Caspase-1蛋白表达上调，IL-1β、IL-6、TNF-α水平增加（P及活动次数减少，海马锥体细胞数量增多损伤减轻，海马超微结构损伤减轻，p-NF-κB p65、NLRP3、Caspase-1蛋白表达下调（P<0.01），血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平降低，BDNF、NGF蛋白的荧光强度增加（P<0.01）。结论：安寐丹缓解睡眠剥夺大鼠海马神经元损伤可能与下调NLRP3信号通路，减少细胞炎症因子释放和增加神经营养因子水平有关。

关键词：安寐丹睡眠剥夺神经炎症神经保护 NOD样受体蛋白3(NLRP3)信号通路

基于“肾—督脉—脑”轴探讨针灸防治阿尔茨海默病的研究进展

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中国针灸 2025年

作者：谈倩杜艳军游敏湖北中医药大学针灸骨伤学院湖北时珍实验室湖北省中医院

基于“肾—督脉—脑”轴探讨针灸防治阿尔茨海默病（AD）的研究进展。根据中医学AD肾虚髓减、神机失用的基本病机，以及督脉联络肾和脑两脏的关系，提出“肾—督脉—脑”轴的概念。根据督脉的循行和生理功能，以及三者相生互济的关系分... 详细信息

基于“肾—督脉—脑”轴探讨针灸防治阿尔茨海默病（AD）的研究进展。根据中医学AD肾虚髓减、神机失用的基本病机，以及督脉联络肾和脑两脏的关系，提出“肾—督脉—脑”轴的概念。根据督脉的循行和生理功能，以及三者相生互济的关系分析了“肾—督脉—脑”轴理论基础；从传统医学理论和现代生物学角度阐明AD与“肾—督脉—脑”轴的关系；结合“肾—督脉—脑”轴防治AD的临床和机制研究，认为“肾—督脉—脑”轴为未来AD的防治研究提供了有益的思路和参考。

关键词：阿尔茨海默病针灸脑病 “肾—督脉—脑”轴

Makorin环指蛋白3参与儿童中枢性性早熟的分子作用机制

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中国生物化学与分子生物学报 2025年第1期41卷 99-104页

作者：陈子琴张雪荣湖北中医药大学中医学院武汉430065 湖北省中医院儿科武汉430061 湖北时珍实验室武汉430061 湖北中医药大学附属医院儿科武汉430061

中枢性性早熟(central precocious puberty,CPP)的发病机制是由于下丘脑-垂体-性腺轴功能的提前启动,而该轴由来自下丘脑的促性腺激素释放激素(gonadotrophin-releasing hormone,GnRH)调控,GnRH分泌增加会促进垂体分泌促性腺激素,从而... 详细信息

中枢性性早熟(central precocious puberty,CPP)的发病机制是由于下丘脑-垂体-性腺轴功能的提前启动,而该轴由来自下丘脑的促性腺激素释放激素(gonadotrophin-releasing hormone,GnRH)调控,GnRH分泌增加会促进垂体分泌促性腺激素,从而导致生殖器官的发育和性激素的分泌。青春期启动的时间受到营养、环境和社会经济因素之间相互作用的影响。在致病基因的研究中,Makorin环指蛋白3(makorin ring finger protein 3,MKRN3)、lin-28同系物A和Delta-like 1同源物等基因的功能缺失性突变,均可导致青春发育期启动时间提前,其中MKRN3的功能丧失突变是家族性CPP最常见的单基因病因之一。自2013年首次在5个CPP家族中鉴定出MKRN 3突变以来,MKRN3在青春期中的作用逐渐被发现。MKRN3属于E3泛素连接酶家族成员,在多种真核生物的中枢神经系统中表达。MKRN3可能作为E3泛素连接酶发挥作用来抑制GnRH活性。最近,越来越多的研究探讨了MKRN3在CPP中的分子作用机制,揭示了多种与MKRN3相互作用的基因及蛋白质,利如MKRN3能抑制KISS1和TAC3活性,从而影响kisspeptin和神经激肽B表达以调控GnRH分泌;MKRN3还能通过泛素化PABPC1抑制GNRH 1 mRNA翻译;另外,还有MBD3、IGF2BP1及NPTX1等靶点,它们均在MKRN3下游参与GnRH调控过程。在MKRN 3上游,miR-30能与MKRN 3基因3′-非翻译区的3个位点结合,从而阻断MKRN 3转录。本文综述了MKRN3在CPP发病过程中的作用及其分子机制方面的研究进展,有助于更好地理解CPP的发病机制,也为进一步深入研究MKRN3分子作用机制奠定了理论基础。

关键词：中枢性性早熟 Makorin环指蛋白3 促性腺激素释放激素儿童

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中文版肌萎缩侧索硬化多域功能障碍量表信效度分析

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重庆医科大学学报 2025年

作者：万石磊杨丹刘念荃蒋千平徐丹丹赵焰周晶湖北中医药大学针灸骨伤学院湖北省中医院/湖北中医药大学附属医院推拿科/康复医学科

目的：汉化肌萎缩侧索硬化多域功能障碍量表（amyotrophic lateral sclerosis impairment multidomain scale,AIMS），并验证其在肌萎缩侧索硬化（amyotrophic lateral sclerosis,ALS）患者中的信度和效度。方法：纳入2023年8月至2024年7月在湖北省中医院运动神经元病中西医结合诊疗中心注册登记系统中的161例ALS患者作为研究对象，采用经翻译、修订后的中文版AIMS进行调查。使用Rasch模型对问卷进行单维性检验以及内部一致性、内容效度、结构效度、效标关联效度评价，依据经典测量理论进行项目分析、重测信度分析、效标关联效度分析。结果：单维度检验显示AIMS的3个维度均具备良好的单维性；除条目18以外，加权的均方拟合统计量（information-weighted fit statistic mean square,Infit MNSQ）和未加权的均方拟合统计量（outlier-sensitive fit statistic mean square,Outfit MNSQ）均在0.5～1.5，条目总分相关性（point-measure correlation,PT-Measure）在0.63～0.87；各条目相邻两选项的阈值>1.4 logit；怀特图显示条目难度在-2.24～2.08 logit；项目功能差异分析显示不同特征亚组患者差异值的绝对值均0.9，个体信度均>0.7，除呼吸维度分离指数为1.56外，总量表和其余维度分离指数均>2；项目分析显示各维度的条目与其所在维度的相关系数在0.622～0.865(P<0.01)；总量表与延髓、运动、呼吸3个维度的重测信度分别为0.994、0.970、0.990、0.972(P<0.01)；效标关联效度分析结果显示中文版AIMS与修订版肌萎缩侧索硬化功能评分量表（amyotrophic lateral sclerosis impairment multidomain scale,ALSFRS-R）总分和相应维度分数的相关系数分别为0.863、0.829、0.876、0.755(P<0.01)。结论：中文版AIMS具有良好的拟合度和较高的信效度，其条目难度适中，选项设置合理，整体质量良好，适用于我国ALS患者的功能评估。

关键词：肌萎缩侧索硬化 Rasch模型经典测量理论信度效度

基于非靶标代谢组学探讨安寐丹对失眠模型大鼠认知功能及代谢谱的影响

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中国实验方剂学杂志 2025年

作者：李非洲徐波叶子靖李连雨张安东王平陈林霖湖北省中医院湖北时珍实验室湖北中医药大学十堰市太和医院

目的：本研究从代谢水平解析经典名方安寐丹缓解失眠模型大鼠认知障碍的潜在效应机制。方法：60只SD大鼠随机分为空白组、模型组、安寐丹低、中、高剂量及苏沃雷生组，每组10只。除空白组，其余各组大鼠通过对氯苯丙氨酸腹腔注射进行失... 详细信息

目的：本研究从代谢水平解析经典名方安寐丹缓解失眠模型大鼠认知障碍的潜在效应机制。方法：60只SD大鼠随机分为空白组、模型组、安寐丹低、中、高剂量及苏沃雷生组，每组10只。除空白组，其余各组大鼠通过对氯苯丙氨酸腹腔注射进行失眠模型制备。苏沃雷生组给予苏沃雷生溶液30 mg·kg-1·d-1灌胃，安寐丹低、中、高剂量组分别给予安寐丹水煎液(4.55、9.09、18.18 g·kg-1·d-1)灌胃，空白组给予等容生理盐水。通过旷场实验检测大鼠空间探索及焦虑抑郁样行为；酶联免疫吸附测定检测大鼠血清表皮生长因子（EGF）、脑源性神经营养因子（BDNF）和血管活性肠肽（VIP）的含量；非靶标代谢组学筛选大鼠血清差异代谢物；结合系统生物学方法阐析安寐丹的潜在作用靶点和效应途径。结果：与空白组比较，模型组大鼠的总运动路程、平均速度、中央区进入次数、中央区停留时间和直立次数显著下降（P及IL-17信号通路等。结论：本研究揭示了安寐丹可回调失眠模型大鼠异常代谢轮廓发挥缓解认知损害的作用，其效应机制可能与调控免疫炎症、能量代谢和细胞凋亡等相关途径有关。

关键词：安寐丹失眠记忆代谢组学认知障碍

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茅苍术组培苗继代过程的退化机制研究

植物科学学报 2025年

作者：江宇慧王萌陈雷陈庆梅徐建中姚林英森林余坤湖北中医药大学药学院湖北省中医院湖北卫尔康现代中药有限公司

利用植物组织培养法，收集茅苍术(Atractylodes lancea （Thunb.） DC.)第3、10和17代的无菌苗，测定其外观形态与生理生化指标数据，并利用转录组测序分析基因的差异表达情况。结果显示，随着组织培养继代次数的增加，茅苍术组培苗的... 详细信息

利用植物组织培养法，收集茅苍术(Atractylodes lancea （Thunb.） DC.)第3、10和17代的无菌苗，测定其外观形态与生理生化指标数据，并利用转录组测序分析基因的差异表达情况。结果显示，随着组织培养继代次数的增加，茅苍术组培苗的增值率下降，生物量、株高、叶长宽比逐渐降低，出现表型退化。生理指标测定结果显示，端粒酶逆转录酶的活性降低，叶绿素荧光参数F_o、Fm逐渐下降，而可溶性糖含量、H2O2、MDA含量及SOD、POD、CAT等抗氧化酶活性逐渐升高；内源激素IAA、CTK、GA3含量也逐渐上升，进一步提示随着继代次数增加，组培苗退化程度加深。转录组分析结果表明，脂肪酸降解被抑制，乙酰辅酶A合成受阻，影响萜类骨架合成；赤霉素、乙烯通路基因表达下调，脱落酸、生长素通路基因表达上调，激素代谢出现紊乱，进而引起相关生理生化过程失调，造成茅苍术组培苗分子水平的退化。研究结果说明，茅苍术组培苗长期继代培养发生形态退化，代谢紊乱，体内氧化胁迫加重，影响了脂肪酸降解等初生代谢过程、萜类等次生代谢物生物合成及激素信号转导通路的相关基因表达，最终导致退化发生。

关键词：茅苍术无性繁殖继代培养生理生化转录组测序