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大豆7S球蛋白-大枣多糖复合物的制备、表征及抗原性

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河北大学学报（自然科学版） 2024年第3期44卷 254-260页

作者：张晨婧张西瑞郭子瑶韩丹丹窦海洋河北大学基础医学院河北省炎性自身免疫性疾病发病机制及防治重点实验室河北保定071000 河北大学公共卫生学院河北保定071000

为了降低大豆的抗原性,通过糖基化反应制备了大豆7S球蛋白-大枣多糖(7S-JP)复合物.采用非对称场流分离技术在线联用紫外可见光检测器、多角度光散射检测器和示差折光检测器(AF4-UVMALS-dRI)研究糖基化反应温度、时间和物料比对7S-JP复... 详细信息

为了降低大豆的抗原性,通过糖基化反应制备了大豆7S球蛋白-大枣多糖(7S-JP)复合物.采用非对称场流分离技术在线联用紫外可见光检测器、多角度光散射检测器和示差折光检测器(AF4-UVMALS-dRI)研究糖基化反应温度、时间和物料比对7S-JP复合物结构的影响,对7S-JP复合物的回转半径、摩尔质量和构象进行表征;采用间接竞争酶联免疫吸附法探究7S-JP复合物的抗原性.AF4-UV-MALS-dRI结果表明:在反应温度为70℃、反应时间为20 min时,7S与JP糖基化反应效果最佳;当7S与JP的质量比为1∶3时,形成的7S-JP复合物结构紧密,有利于破坏其空间抗原表位,抗原抑制率为(69.1±0.99)%.

关键词：大豆7S球蛋白大枣多糖非对称场流分离

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马铃薯淀粉的场流分离表征过程回收率研究

河北大学学报（自然科学版） 2022年第4期42卷 376-383页

作者：张文惠宋天歌孙瑜珊申世刚窦海洋河北大学化学与环境科学学院河北保定071002 河北大学河北省炎性自身免疫性疾病发病机制及防治重点实验室基础医学院河北保定071000

采用场流分离技术探究了马铃薯(Solanum tuberosum L.)淀粉分离表征过程中样品间以及样品与超滤膜的交联,评价了载液离子强度、样品进样量、交叉流流速和聚集时间对马铃薯淀粉回收率的影响,并对结果重复性进行了考察.结果表明:在载液(含... 详细信息

采用场流分离技术探究了马铃薯(Solanum tuberosum L.)淀粉分离表征过程中样品间以及样品与超滤膜的交联,评价了载液离子强度、样品进样量、交叉流流速和聚集时间对马铃薯淀粉回收率的影响,并对结果重复性进行了考察.结果表明:在载液(含5 mmol/L NaNO_(3),3 mmol/L NaN_(3))pH 7.00,样品进样量15μg,交叉流流速1.0 mL/min,聚集时间2.5 min的条件下,马铃薯淀粉的回收率为(97.30±0.02)%,回转半径相对标准偏差为1.18%,分子摩尔质量的相对标准偏差为5.67%.

关键词：场流分离马铃薯淀粉回收率

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瘦素的生物学作用及其相关机制研究进展

医学研究与教育 2023年第4期40卷 1-10页

作者：周向阳吴迪米甜李文娟河北大学基础医学院河北保定071000 河北省炎性自身免疫性疾病发病机制及防治重点实验室河北保定071000

瘦素(leptin)是一种由白色脂肪细胞分泌的激素,作为脂肪组织和中枢神经系统网络联系的外周信号,影响人体的摄食、能量平衡、内分泌和免疫功能等。通过分析总结瘦素及其受体(leptin receptor,LEPR)分子结构和细胞内分布,对其在调节脂代... 详细信息

瘦素(leptin)是一种由白色脂肪细胞分泌的激素,作为脂肪组织和中枢神经系统网络联系的外周信号,影响人体的摄食、能量平衡、内分泌和免疫功能等。通过分析总结瘦素及其受体(leptin receptor,LEPR)分子结构和细胞内分布,对其在调节脂代谢、炎症与免疫、创伤愈合及肿瘤发展等方面的研究进展进行综述。

关键词：瘦素脂肪组织代谢炎症创伤愈合肿瘤

iNKT2细胞改善非酒精性脂肪肝小鼠肝脏脂质沉积的机制研究

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中华内分泌代谢杂志 2021年第9期37卷 813-819页

作者：滕景芳高翔王建国梁蕊陈冬志孟明河北大学基础医学院保定071000 河北大学附属医院检验科保定071000 河北大学医学部保定071000 河北省炎性自身免疫性疾病发病机制及防治重点实验室保定071000

目的探讨恒定自然杀伤T(invariant natural killer T,iNKT)2细胞改善非酒精性脂肪肝(NAFL)肝脂质沉积的机制。方法高脂饮食喂养C57BL/6J小鼠建立NAFL模型。以全自动生化分析仪分析小鼠外周血中血清总胆固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白胆固... 详细信息

目的探讨恒定自然杀伤T(invariant natural killer T,iNKT)2细胞改善非酒精性脂肪肝(NAFL)肝脂质沉积的机制。方法高脂饮食喂养C57BL/6J小鼠建立NAFL模型。以全自动生化分析仪分析小鼠外周血中血清总胆固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)水平。以苏木精-伊红(HE)进行常规肝病理染色。肝iNKT频率及iNKT1、iNKT2亚群频率采用流式细胞术检测。以Western印迹法检测肝脏组织中固醇调节元件结合蛋白1c(SREBP-1c)、过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)-α、核因子-κB(NF-κB)表达情况。结果与对照组相比,NAFL小鼠体重增加,总胆固醇、HDL-C、LDL-C、ALT水平升高,肝脏脂质沉积增加,肝脏SREBP-1c、PPAR-α蛋白表达升高,NF-κB蛋白磷酸化水平升高(P<0.05或P<0.01)。腹腔注射α-半乳糖基神经酰胺(α-GalCer)后,NAFL小鼠总胆固醇、HDL-C、LDL-C水平降低,肝脂质沉积减少,肝脏SREBP-1c下调,PPAR-α表达上调,肝脏iNKT2亚群比例增加(P<0.05或P<0.01)。结论iNKT2细胞改善NAFL肝脂质沉积与下调肝组织SREBP-1c和上调PPAR-α有关。

关键词：非酒精性脂肪肝病非酒精性脂肪肝恒定自然杀伤T2 α-半乳糖基神经酰胺

过继输注iNKT2细胞对RA小鼠胸腺iNKT亚群失衡的影响

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过继输注iNKT2细胞对RA小鼠胸腺iNKT亚群失衡的影响

类风湿关节炎发病不同时期cDC成熟状态研究

第十四届全国免疫学学术大会

作者：滕景芳刘慧芳徐文斌梁蕊李钊孟明河北大学基础医学院河北省炎性自身免疫性疾病发病机制及防治重点实验室

恒定自然杀伤T (invariant nature killer T,iNKT)细胞作为连接固有和适应性免疫的特殊细胞在自身免疫疾病中发挥重要作用。我们前期研究证实,活动期类风湿关节炎(RA)患者iNKT细胞频率和体外增殖能力明显低于健康人;RA小鼠iNKT细胞频率... 详细信息

恒定自然杀伤T (invariant nature killer T,iNKT)细胞作为连接固有和适应性免疫的特殊细胞在自身免疫疾病中发挥重要作用。我们前期研究证实,活动期类风湿关节炎(RA)患者iNKT细胞频率和体外增殖能力明显低于健康人;RA小鼠iNKT细胞频率降低,胸腺iNKT1亚群比例增高,iNKT2亚群比例下降;RA小鼠胸腺编码iNKT细胞发育分化的关键转录因子早幼粒细胞白血病锌指蛋白(PLZF)等基因启动子区组蛋白H3K27和H3K4甲基化修饰存在异常。过继输注具有特定表型和功能的iNKT细胞纠正了RA小鼠脾脏Th1/Th2/Th17亚群的失衡,有效改善了RA小鼠临床症状。那么,过继输注iNKT细胞是否会影响RA小鼠胸腺iNKT细胞频率及亚群的变化?目的研究过继输注脾脏来源的具有特定表型和功能的iNKT细胞对RA小鼠胸腺iNKT亚群失衡的影响,并初步探讨其作用机制。方法诱导分离纯化高表达GATA-3、分泌IL-4的iNKT2细胞;经尾静脉过继输注RA小鼠,同时设α-半乳糖神经酰胺(α-Galcer)对照组在体激活iNKT细胞;在不同时间点观察RA临床症状,FCM检测小鼠胸腺iNKT细胞频率及亚群变化;WB检测小鼠胸腺PLZF、T淋巴细胞上的T盒(T-bet)及组蛋白去甲基化酶(UTX)蛋白的表达;RT-PCR检测小鼠胸腺PLZF、T-bet mRNA的转录;ChIP-PCR检测Zbtb16(编码PLZF)和Tbx21(编码T-bet)基因启动子区组蛋白甲基化修饰水平。结果1、细胞治疗降低了RA小鼠胸腺iNKT1和iNKT17亚群的比例,提高了iNKT2亚群的比例;提升了胸腺DP细胞PLZF的表达,降低iNKT细胞T-bet的表达,且细胞治疗组显著高于α-Galcer组;2、细胞治疗降低了胸腺DP细胞Zbtb16和iNKT细胞Tbx21基因启动子区H3K27me3和H3K4me3修饰水平,且降低H3K4me3修饰水平的作用细胞治疗组尤为显著。3、细胞治疗上调了RA小鼠胸腺淋巴细胞中UTX的表达。结论iNKT2细胞过继治疗可能以直接或间接的方式通过影响RA小鼠胸腺iNKT发育分化关键转录因子基因启动子区组蛋白甲基化修饰水平,从而纠正RA小鼠胸腺iNKT亚群的失衡。研究结果为以iNKT细胞为靶标的RA治疗提供了新的依据和思路。

关键词： RA iNKT α-Galcer 过继治疗组蛋白甲基化 UTX

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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医学研究与教育 2021年第4期38卷 1-7页

作者：滕景芳陈胜德梁蕊徐文斌孟明河北大学基础医学院河北保定071000 河北省炎性自身免疫性疾病的发病机制及防治重点实验室河北保定071000

目的采用hGPI325-339和hGPI469-483混合多肽片段构建类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)小鼠模型,观测RA小鼠体内经典树突状细胞(conventional dendritic cells,cDC)的频率及成熟状态。方法流式细胞术检测RA模型小鼠发病时脾脏、淋... 详细信息

目的采用hGPI325-339和hGPI469-483混合多肽片段构建类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)小鼠模型,观测RA小鼠体内经典树突状细胞(conventional dendritic cells,cDC)的频率及成熟状态。方法流式细胞术检测RA模型小鼠发病时脾脏、淋巴结cDC的频率和CD80、CD86分子的表达情况。结果RA小鼠脾脏cDC频率在炎症4个时期均显著低于健康对照组;CD80分子的表达在炎症初期、高峰期和缓解期明显高于健康对照组,在炎症进展期明显低于健康对照组;CD86分子的表达在炎症的4个时期均明显高于健康对照组。淋巴结cDC频率在炎症4个时期均显著高于健康对照组;CD80分子的表达在炎症初期明显高于健康对照组,其余3个时期均低于健康对照组;CD86分子的表达在炎症初期、进展期和缓解期明显低于健康对照组,在炎症高峰期高于健康对照组。结论在RA发生中脾脏cDC的抗原提呈作用较之淋巴结可能更为重要;RA中脾脏和淋巴结cDC的成熟度存在先升高后降低的起伏波动现象。

关键词：类风湿关节炎 cDC CD80 CD86

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原代肝细胞脂肪变性细胞模型的构建

医学研究与教育 2021年第2期38卷 1-7页

作者：梁蕊滕景芳李钊徐文斌孟明河北大学基础医学院河北保定071000 河北省炎性自身免疫性疾病发病机制及防治重点实验室河北保定071000

目的为非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)发病机制和防治研究提供可靠的原代肝细胞脂肪变性细胞模型。方法采用Seglen两步灌流法及其改良方法分离获取小鼠原代肝细胞,体外培养48 h后,给予不同浓度的游离脂肪... 详细信息

目的为非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)发病机制和防治研究提供可靠的原代肝细胞脂肪变性细胞模型。方法采用Seglen两步灌流法及其改良方法分离获取小鼠原代肝细胞,体外培养48 h后,给予不同浓度的游离脂肪酸(free fatty acid,FFA)混合物(油酸∶棕榈酸=2∶1)诱导24 h,采用油红O染色,观察肝细胞内脂滴沉积情况,全自动生化分析仪测定细胞内三酰甘油(TG)含量。结果与对照组相比,模型组肝细胞内出现红色脂滴沉积,且与加入的FFA混合物浓度呈剂量依赖性;模型组肝细胞内TG含量明显高于对照组(P<0.05),且随着加入的FFA浓度升高而增加,提示肝细胞内脂质沉积随着加入的FFA浓度升高而增加。结论成功构建了原代肝细胞脂肪变性细胞模型,为NAFLD的研究提供了可靠的细胞模型。

关键词：非酒精性脂肪性肝病原代肝细胞肝脂肪变性细胞模型

DBA/1小鼠胸腺来源的iNKT细胞的增殖和定向分化

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DBA/1小鼠胸腺来源的iNKT细胞的增殖和定向分化

重组人瘦素蛋白的原核表达、纯化和生物学活性鉴定

第十四届全国免疫学学术大会

作者：陈冬志李钊梁蕊刘慧芳王园园史鸿云孟明河北大学基础医学院河北省炎性自身免疫性疾病发病机制及防治重点实验室河北大学附属医院

目的:iNKT细胞在体内的含量极低,直接从体内获得的细胞数量很难充分发挥其临床应用的潜力。通过体内刺激和体外定向诱导,激活和扩增小鼠胸腺中的iNKT细胞,旨在获得大量具有特定功能的iNKT细胞。方法:给予DBA/1小鼠不同方式注射α半乳糖... 详细信息

目的:iNKT细胞在体内的含量极低,直接从体内获得的细胞数量很难充分发挥其临床应用的潜力。通过体内刺激和体外定向诱导,激活和扩增小鼠胸腺中的iNKT细胞,旨在获得大量具有特定功能的iNKT细胞。方法:给予DBA/1小鼠不同方式注射α半乳糖神经酰胺(α-GalCer),分离并体外培养胸腺单个核细胞。采用流式细胞仪检测不同α-GalCer注射方式对小鼠胸腺iNKT细胞及亚群的影响,和体外培养后iNKT细胞及其亚群的改变,以及培养上清中细胞因子的变化。结果:与多次皮下注射组相比,α-GalCer单次皮下注射组iNKT细胞频率在α-GalCer刺激后4、6、8、10、12天均显著增加,其中iNKT1细胞亚群在第4天最高,而iNKT2细胞亚群在第8天达到高峰。α-GalCer单次皮下注射8天后胸腺单个核细胞体外培养14天组iNKT细胞频率显著高于其他各组,且iNKT1亚群频率达到峰值。培养上清中IFN-γ的含量与iNKT1细胞水平一致,表明体外诱导的iNKT细胞与体内的自然iNKT细胞在功能上无明显差异。结论:本实验通过体内α-GalCer刺激和体外诱导扩增相结合的方法,从小鼠胸腺中获得了高水平的具有特定功能的iNKT细胞,为体外大规模获取iNKT细胞提供了非常重要的研究思路和方法,也为iNKT细胞过继免疫治疗相关疾病提供了可能。

关键词：恒定自然杀伤T细胞（iNKT） α半乳糖神经酰胺（α-GaICer）胸腺诱导分化

来源： cnki会议评论

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河北大学学报（自然科学版） 2022年第5期42卷 511-518页

作者：周向阳李仲凯郝腾飞丁光硕郑文慧李文娟河北大学基础医学院河北保定071000 河北省炎性自身免疫性疾病发病机制及防治重点实验室河北保定071000 河北农业大学生命科学学院河北保定071001 河北大学公共卫生学院河北保定071000

为解决重组人瘦素蛋白(hLeptin)大规模生产过程中包涵体的形成以及体外重折叠过程中蛋白聚集导致的低产量,探究在大肠杆菌中hLeptin高水平可溶性的表达,并进行生物学活性检测.利用hLeptin成熟肽基因与pET-30a(+)-SUMO系统构建融合表达质... 详细信息

为解决重组人瘦素蛋白(hLeptin)大规模生产过程中包涵体的形成以及体外重折叠过程中蛋白聚集导致的低产量,探究在大肠杆菌中hLeptin高水平可溶性的表达,并进行生物学活性检测.利用hLeptin成熟肽基因与pET-30a(+)-SUMO系统构建融合表达质粒pET-30a(+)-SUMO-Lep,转化至大肠杆菌BL21(DE3),加入异丙基-β-D-硫代半乳糖(IPTG)进行诱导表达,之后经Ni金属亲和层析纯化,并切去SUMO融合标签后获得成熟hLeptin.重组hLeptin表达量高,主要以可溶形式存在.通过KM小鼠减肥实验和CCK8实验证明重组hLeptin具有生物学活性.综上,使用SUMO融合标签,以增强hLeptin在大肠杆菌中的高效可溶性高纯度的表达,为大规模生产hLeptin提供了一种新方法,同时为表达可溶性重组蛋白研究提供了一定的基础.

关键词：重组hLeptin SUMO 原核表达生物学活性