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富马酸二甲酯通过Nrf2/HO-1信号通路缓解细颗粒物对雌性大鼠胎盘的氧化损伤

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中国生物化学与分子生物学报 2024年第2期40卷 231-239页

作者：李江珂董恩恒张丰泉张俊强伍源新乡医学院公共卫生学院新乡市大气污染健康效应与干预重点实验室河南新乡453003

近年来,已有大量的流行病学调查证实,孕产妇暴露于PM_(2.5)可能导致妊娠并发症和不良妊娠结局的风险增加。本研究旨在探讨孕前PM_(2.5)暴露对大鼠胎盘的损伤及富马酸二甲酯(dimethyl fumarate,DMF)对其调控机制。40只6周龄SPF级雌性SD大... 详细信息

近年来,已有大量的流行病学调查证实,孕产妇暴露于PM_(2.5)可能导致妊娠并发症和不良妊娠结局的风险增加。本研究旨在探讨孕前PM_(2.5)暴露对大鼠胎盘的损伤及富马酸二甲酯(dimethyl fumarate,DMF)对其调控机制。40只6周龄SPF级雌性SD大鼠,随机分为对照组(生理盐水)、低剂量PM_(2.5)组(1.5 mg/kg PM_(2.5))、高剂量PM_(2.5)组(7.5 mg/kg PM_(2.5))、DMF对照组(生理盐水+50 mg/kg DMF)和DMF干预组(7.5 mg/kg PM_(2.5)+50 mg/kg DMF)。大鼠每2 d染毒1次,共持续40 d。经PM_(2.5)暴露后,高剂量PM_(2.5)组胎鼠数量、胎鼠平均体长、超氧化物歧化酶(SOD)活性和总抗氧化能力(T-AOC)、白细胞介素-10(IL-10)含量明显低于对照组(P干预组的T-AOC含量显著高于高剂量PM_(2.5)组(P损伤作用。H&E染色结果显示,暴露组胎盘组织迷路区血细胞有不同程度的减少,高剂量PM_(2.5)组血管脉络不清晰,DMF干预组胎盘迷路区的血细胞明显增多,血管脉络清晰整齐。Western印迹结果显示,低剂量PM_(2.5)组和高剂量PM_(2.5)组核因子E2相关因子(Nrf2)、血红素加氧酶1(HO-1)蛋白质水平低于对照组(P干预组的Nrf2、HO-1蛋白质含量明显增高(P损伤,提高机体的抗氧化能力。

关键词：细颗粒物富马酸二甲酯胎盘氧化损伤

在flashBAC杆状病毒表达系统中制备人GⅡ.4型诺如病毒样颗粒

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微生物学报 2024年第10期 3798-3808页

作者：刘志鹏肖锦宁段良伟王琼梓王向鹏新乡医学院医学技术学院河南省免疫与靶向药物重点实验室新乡医学院第三附属医院检验科

【目的】人诺如病毒(human norovirus， HuNoV)是全球范围内引起人急性胃肠炎的主要病原之一，目前尚无有效的疫苗对该病毒进行预防。本研究旨在利用flashBAC杆状病毒表达系统，制备HuNoV病毒样颗粒(virus-like particles， VLP)，为研... 详细信息

【目的】人诺如病毒(human norovirus， HuNoV)是全球范围内引起人急性胃肠炎的主要病原之一，目前尚无有效的疫苗对该病毒进行预防。本研究旨在利用flashBAC杆状病毒表达系统，制备HuNoV病毒样颗粒(virus-like particles， VLP)，为研发HuNoV疫苗奠定基础。【方法】将GⅡ.4型HuNoV的VP1蛋白全长基因序列进行密码子优化后合成，克隆至杆状病毒pBacPAK9转移载体，获得pBacPAK9-8his-VP1重组质粒。酶切、测序鉴定正确后将重组质粒与线性Baculovirus plasmid (Bacmid)共转染SF9细胞，获得含有VP1基因的重组杆状病毒。重组杆状病毒感染Hi-Five (HF)细胞进行表达，利用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis， SDS-PAGE)和Western blotting分析VP1蛋白的表达。用镍柱亲和层析方法纯化VP1蛋白；对纯化后的VP1蛋白进行SDS-PAGE和Western blotting检测。使用高效液相色谱(high performance liquid chromatography， HPLC)对纯化的VP1蛋白进行纯度鉴定。利用透射电镜观察VLP。【结果】构建了pBacPAK9-8his-VP1转移质粒，VP1蛋白在HF细胞中主要在细胞质内表达，分子量约为58 kDa。HPLC结果显示VP1蛋白纯度大于99%，透射电镜可以观察到形状规则、大小均一、直径约为30-40 nm的VLP。【结论】利用杆状病毒表达系统制备了GⅡ.4型HuNoV的VLP，为HuNoV疫苗的研发奠定了基础。

关键词：人诺如病毒 VP1蛋白杆状病毒表达系统病毒样颗粒

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网络药理学和分子对接法研究白杨素治疗肺动脉高压的机制

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华西药学杂志 2024年第05期 509-514页

作者：楚欣欣潘思雨郭绅陈宇静祝田田新乡医学院药学院河南省心血管重构与药物干预国际联合实验室新乡市心血管重构干预与分子靶向治疗药物研发重点实验室

目的基于网络药理学和实验验证研究白杨素防治肺动脉高压(PH)的效果和作用机制。方法运用PubChem数据库收集白杨素的靶点；采用DisGeNET、GeneCards数据库联合筛选PH的靶点；运用STRING平台构建蛋白-蛋白相互作用网络；使用DAVID和Met... 详细信息

目的基于网络药理学和实验验证研究白杨素防治肺动脉高压(PH)的效果和作用机制。方法运用PubChem数据库收集白杨素的靶点；采用DisGeNET、GeneCards数据库联合筛选PH的靶点；运用STRING平台构建蛋白-蛋白相互作用网络；使用DAVID和Metescape数据库进行靶点GO功能富集和KEGG通路富集分析；采用AutoDock进行分子对接。构建低氧PH模型，通过考察血流动力学、肺组织肺血管重构及胶原沉积情况来研究白杨素对PH的治疗作用；用蛋白质印迹法验证白杨素对关键靶点蛋白含量表达的影响。结果表皮生长因子受体(EGFR)、前列腺素内过氧化物合成酶2(PTGS2)、劳斯肉瘤癌基因(SRC)、雌激素受体1(ESR1)、基质金属蛋白酶9(MMP9)是白杨素治疗PH的关键靶点；白杨素与5个关键靶点均能较好地结合。白杨素能明显改善PH大鼠的血流动力学、肺组织肺中小动脉重构及胶原沉积情况，缓解PH引起的SRC、ESR1、EGFR、PTGS2、MMP9蛋白表达量的变化。结论白杨素治疗PH具有“多靶点-多通路”的特点，可通过与MMP9、EGFR、ESR1等关键靶点结合从而发挥治疗PH的作用。

关键词：白杨素低氧肺动脉高压肺血管重构胶原沉积网络药理学分子对接作用机制

CDC20通过稳定NLRP3的表达促进食管癌细胞增殖的研究

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中国癌症杂志 2024年第5期34卷 473-484页

作者：关瑞瑞郝茜张雅琦孙庆港陈怡恬李秀敏周祥韩涛新乡医学院健康中原研究院新乡市分子癌学重点实验室河南新乡453003 新乡医学院第三附属医院消化内科河南新乡453003 复旦大学附属肿瘤医院肿瘤研究所复旦大学上海医学院肿瘤学系上海200032 新乡医学院基础医学院河南新乡453003 新乡医学院第一附属医院消化内科河南新乡453003

背景与目的:食管癌(esophageal carcinoma,ESCA)是死亡率较高的恶性肿瘤之一,其发生、发展的机制不明。CDC20被认为具有癌基因功能,其表达失调与肿瘤的发生、发展密切相关。CDC20在多种肿瘤中表达升高,敲低CDC20能够抑制肿瘤细胞增殖。N... 详细信息

背景与目的:食管癌(esophageal carcinoma,ESCA)是死亡率较高的恶性肿瘤之一,其发生、发展的机制不明。CDC20被认为具有癌基因功能,其表达失调与肿瘤的发生、发展密切相关。CDC20在多种肿瘤中表达升高,敲低CDC20能够抑制肿瘤细胞增殖。NLRP3是炎症小体的主要成分之一,炎症小体失调与肿瘤的发生、发展也密切相关。本研究旨在探究CDC20是否通过NLRP3促进ESCA细胞增殖,同时分析其调控机制。方法:通过癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库和GTEx公共数据库分析ESCA患者中CDC20和NLRP3基因的表达水平。收集新乡医学院第一附属医院收治的80例ESCA患者的临床病理学资料和组织,通过免疫组织化学染色检测NLRP3在ESCA患者中的蛋白表达水平。本研究通过新乡医学院第一附属医院伦理委员会的审批(编号:EC-021-137)。通过短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)技术检测敲低CDC20和NLRP3基因后对食管鳞状细胞癌细胞系EC9706和KYSE150增殖能力的影响。通过免疫共沉淀(Co-immunoprecipitation,Co-IP)、蛋白酶体抑制剂和泛素化实验检测CDC20是否与NLRP3相互作用,以及阐明CDC20是否通过泛素化途径调控NLRP3表达。结果:TCGA数据库分析结果显示,ESCA组织中CDC20和NLRP3 mRNA表达水平明显高于癌旁组织。免疫组织化学结果也进一步显示,与癌旁组织相比,CDC20、NLRP3在ESCA组织中蛋白表达水平升高。敲低CDC20和NLRP3基因可抑制ESCA细胞增殖。Co-IP、蛋白酶体抑制剂和泛素化实验证实CDC20通过NLRP3的LRR区与NLRP3相互作用,且CDC20通过促进NLRP3泛素化稳定其表达。结论:CDC20和NLRP3在ESCA癌组织中表达上调,且CDC20通过泛素化NLRP3稳定其表达,从而促进ESCA细胞增殖,提示CDC20和NLRP3可能是ESCA潜在的诊断靶向标志物。

关键词：食管癌 CDC20 NLRP3 泛素化增殖

circ0001946靶向miR-610/LRRC1轴对乳腺癌细胞恶性表型的影响

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中国老年学杂志 2024年第18期 4532-4535页

作者：毋乃朴王晓慧李娜新乡医学院三全学院总教研室新乡医学院第一附属医院病理科新乡医学院病理学系

目的探讨circ0001946靶向微小RNA(miR)-610/富含亮氨酸的重复序列蛋白(LRRC)1轴对乳腺癌细胞恶性表型的影响。方法培养人乳腺癌细胞系(MCF-7细胞)、人正常乳腺上皮细胞(MCF-10A细胞),将MCF-7细胞分为空白对照组(常规培养基培养)、阴... 详细信息

目的探讨circ0001946靶向微小RNA(miR)-610/富含亮氨酸的重复序列蛋白(LRRC)1轴对乳腺癌细胞恶性表型的影响。方法培养人乳腺癌细胞系(MCF-7细胞)、人正常乳腺上皮细胞(MCF-10A细胞),将MCF-7细胞分为空白对照组(常规培养基培养)、阴性对照组(转染si-NC)、circ0001946低表达组(转染si-circ0001946);阴性对照组(转染mimics-NC)、miR-610过表达组(转染mimics-miR-610)及si-circ0001946+anti-miR-NC共转染细胞，si-circ0001946+anti-miR-610共转染细胞。检测MCF-7细胞增殖能力、凋亡水平及侵袭细胞数；反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测circ0001946、miR-610及LRRC1 mRNA表达；Western印迹检测LRRC1蛋白表达。结果乳腺癌细胞中circ0001946表达水平明显高于人正常乳腺上皮细胞，miR-610表达水平明显低于人正常乳腺上皮细胞(P细胞增殖率、细胞侵袭个数明显低于阴性对照组和空白对照组，细胞凋亡率明显高于阴性对照组和空白对照组(均P细胞增殖率、细胞侵袭个数明显低于空白对照组，细胞凋亡率明显高于空白对照组(P细胞增殖率、细胞侵袭个数明显高于si-circ0001946组、si-circ0001946+anti-miR-NC组，细胞凋亡率明显低于si-circ0001946组、si-circ0001946+anti-miR-NC组(P细胞LRRC1 mRNA和蛋白表达水平明显低于空白对照组(P细胞LRRC1 mRNA和蛋白表达水平明显高于si-circ0001946组、mimics-miR-610组(P细胞中高表达，可通过靶向结合miR-610来调控LRRC1的表达，进而影响乳腺癌细胞的恶性表型。

关键词：乳腺癌细胞 circ0001946 miR-610 富含亮氨酸的重复序列蛋白1 细胞增殖细胞凋亡细胞侵袭

白藜芦醇改善青春期酒精暴露导致的成年期大鼠认知功能损害

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中国细胞生物学学报 2024年第3期46卷 436-444页

作者：贾文歌刘媛王心雨李昊隆曾令宇杨一帆李晨晨陈红云赵斌魏来新乡医学院法医学院新乡市法医毒理重点实验室新乡453003

该文旨在研究白藜芦醇(RSV)对青春期间歇性酒精(AIE)暴露大鼠认知功能的影响及潜在的机制。通过25%酒精灌胃建立AIE暴露大鼠模型,并使用RSV进行干预。旷场实验结果显示,与Con+Veh组相比,Eth+Veh组大鼠进入中心区域的次数(P0.05)。Morri... 详细信息

该文旨在研究白藜芦醇(RSV)对青春期间歇性酒精(AIE)暴露大鼠认知功能的影响及潜在的机制。通过25%酒精灌胃建立AIE暴露大鼠模型,并使用RSV进行干预。旷场实验结果显示,与Con+Veh组相比,Eth+Veh组大鼠进入中心区域的次数(P实验结果显示,与Con+Veh组相比,Eth+Veh组大鼠开放臂停留时间(P0.05)。Morris水迷宫实验结果显示,与Con+Veh组相比,Eth+Veh组大鼠测试期逃避潜伏期增加(P<0.01)、穿越目标平台次数明显减少(P<0.05)。而RSV治疗后,Eth+RSV组大鼠较Eth+Veh组测试期逃避潜伏期降低(P<0.05)、穿越目标平台次数明显增多(P<0.05)。尼氏染色结果显示,与Con+Veh组相比,Eth+Veh组大鼠内侧前额叶皮层(mPFC)神经元数量显著减少(P<0.001)。与Eth+Veh组相比,Eth+RSV组大鼠mPFC神经元尼氏体数量显著增多(P<0.01)。Western blot结果显示,与Con+Veh组相比,Eth+Veh组大鼠mPFC内SIRT1(P<0.05)、BDNF(P<0.05)及PSD95(P<0.05)蛋白表达水平显著降低。与Eth+Veh组相比,Eth+RSV组大鼠mPFC内SIRT1(P<0.01)、BDNF(P<0.05)及PSD95(P<0.05)蛋白表达水平显著增高。该研究结果表明,RSV能够改善AIE导致的大鼠认知功能损害,并增加mPFC内神经元尼氏体数量,这种改善作用可能与mPFC中SIRT1、BDNF及PSD95的表达水平增加相关。

关键词：白藜芦醇青春期间歇性酒精暴露认知功能沉默信息调节因子1 脑源性神经营养因子突触后密度蛋白95

miR-221-5p靶向VDR调控肾透明癌上皮细胞-间充质转化的机制

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中国老年学杂志 2024年第17期 4283-4286页

作者：张群妹狄文玉王海峰焦路阳鲁广建新乡医学院第一附属医院输血科新乡医学院第一附属医院病理科新乡医学院第一附属医院肿瘤内科一病区新乡医学院第一附属医院新乡市实验诊断学重点实验室新乡医学院第一附属医院检验科

目的探讨微小RNA(miR)-221-5p靶向维生素D受体(VDR)调控肾透明癌上皮细胞-间充质转化的潜在机制。方法过表达或敲低miR-221-5p后，检测肾透明癌细胞786-O中VDR的表达水平。荧光素酶报告实验检测miR-221-5p是否靶向VDR。过表达或敲低mi... 详细信息

目的探讨微小RNA(miR)-221-5p靶向维生素D受体(VDR)调控肾透明癌上皮细胞-间充质转化的潜在机制。方法过表达或敲低miR-221-5p后，检测肾透明癌细胞786-O中VDR的表达水平。荧光素酶报告实验检测miR-221-5p是否靶向VDR。过表达或敲低miR-221-5p及过表达VDR或敲低VDR后，检测786-O中上皮细胞-间充质转化标志蛋白[E-钙黏蛋白(Cadherin)、β-连环蛋白(Catenin)和紧密连接蛋白(ZO)-1]表达水平、线粒体功能相关蛋白[电压依赖性阴离子通道蛋白(VDAC)1、线粒体内膜中视神经萎缩症蛋白(OPA)1和线粒体钙离子单向转运蛋白(MCU)]的表达水平及线粒体呼吸水平[基础呼吸、三磷酸腺苷(ATP)相关呼吸和最高呼吸]。结果过表达miR-221-5p在肾透明癌细胞中导致VDR的mRNA和蛋白水平明显下降(P0.05)。此外，miR-221-5p过表达或VDR的敲低会导致肾透明癌细胞中上皮细胞-间充质转化标志蛋白的水平明显上升，而反之则明显下降(P>0.05),共表达或共敲低miR-221-5p和VDR时以上蛋白水平未发生显著变化(P>0.05)。miR-221-5p过表达或VDR敲低会导致线粒体功能相关蛋白水平明显下降，反之则明显上升(P0.05)。miR-221-5p过表达或VDR敲低导致肾透明癌细胞中线粒体呼吸相关参数明显下降，反之则明显上升(P0.05)。结论 miR-221-5p通过调控VDR表达水平影响肾透明癌细胞的上皮细胞-间充质转化、线粒体功能及线粒体呼吸。

关键词：微小RNA(miR)-221-5p 维生素D受体(VDR) 肾透明癌上皮细胞-间充质转化线粒体

二甲双胍与三氧化二砷对KG1a细胞增殖的抑制作用

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中国实验血液学杂志 2024年第1期32卷 66-70页

作者：黄李文惠刘萌桂淑敏冯明明刘慧司晓慧牛新清新乡医学院医学技术学院河南省免疫与靶向药物重点实验室河南省分子诊断与医学检验技术协同创新中心河南新乡453003

目的:探讨二甲双胍协同三氧化二砷对急性髓系白血病KG1a细胞增殖的影响及其可能的机制。方法:采用CCK-8法检测二甲双胍、三氧化二砷以及联合应用对KG1a细胞的杀伤作用;Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术检测应用二甲双胍协同三氧化二砷... 详细信息

目的:探讨二甲双胍协同三氧化二砷对急性髓系白血病KG1a细胞增殖的影响及其可能的机制。方法:采用CCK-8法检测二甲双胍、三氧化二砷以及联合应用对KG1a细胞的杀伤作用;Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术检测应用二甲双胍协同三氧化二砷对KG1a细胞凋亡的影响;Western blot检测胞内凋亡、自噬相关蛋白的表达。结果:二甲双胍与三氧化二砷联合及单独应用均可抑制KG1a细胞增殖,诱导KG1a细胞凋亡,联合用药组增殖抑制率及凋亡率高于单独用药组(P细胞中Caspase 8和P62蛋白表达上调且高于单药组(P三氧化二砷杀伤KG1a细胞,其作用机制可能与诱导凋亡和增强自噬有关。

关键词：三氧化二砷二甲双胍急性髓系白血病 Caspase 8 P62

B细胞淋巴瘤因子-3对乳腺癌雌激素受体α信号通路及细胞增殖的影响

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新乡医学院学报 2024年第7期41卷 625-630页

作者：武丹凤朱建王辉新乡医学院医学检验学院河南省免疫与靶向药物重点实验室河南新乡453003

目的探讨B细胞淋巴瘤因子-3(Bcl-3)对乳腺癌雌激素受体α(ERα)信号通路以及细胞增殖的影响。方法取对数生长期MCF-7细胞,随机分为siControl组和siBcl-3#1组,分别滴加ControlsiRNA和siBcl-3#1siRNA,应用细胞转染试剂Lipofectamine TM 2... 详细信息

目的探讨B细胞淋巴瘤因子-3(Bcl-3)对乳腺癌雌激素受体α(ERα)信号通路以及细胞增殖的影响。方法取对数生长期MCF-7细胞,随机分为siControl组和siBcl-3#1组,分别滴加ControlsiRNA和siBcl-3#1siRNA,应用细胞转染试剂Lipofectamine TM 2000转染5 h。取稳定转染48 h后的siControl组和siBcl-3#1组MCF-7细胞,应用实时荧光定量聚合酶链反应检测MCF-7细胞中Bcl-3、乳腺癌雌激素调控基因1(GREB1)、PDZ结构域蛋白1(PDZK1)和ERα靶基因三叶因子1(TFF1)mRNA的表达,Western blot法检测MCF-7细胞中Bcl-3、ERα蛋白表达,细胞计数试剂盒-8实验检测MCF-7细胞增殖能力。取HEK293T细胞,随机分为Input组(即阳性对照组)、IP组(即免疫共沉淀组)和IgG组(即阴性对照组),共转染Bcl-3和ERα质粒48 h后,用100μL免疫共沉淀(Co-IP)细胞裂解液冰上裂解细胞后,分离上清液;Input组取90μL上清液,加入30μL 4×Loading buffer;IP组取450μL上清液,加入40μL Protein A/G和绿色荧光蛋白抗体0.5μL;IgG组取450μL上清液,加入0.5μL IgG、30μL Protein A/G琼脂糖磁珠;采用Co-IP实验检测细胞中Bcl-3和ERα结合效果。取对数生长期的MCF-7细胞,采用免疫荧光共定位实验检测Bcl-3和ERα是否存在共定位现象。结果si-Bcl-3#1组MCF-7细胞中Bcl-3、GREB1、TFF1和PDZK1 mRNA相对表达量显著低于siControl组(P细胞中Bcl-3蛋白和ERα蛋白相对表达量显著低于siControl组(P细胞增殖能力比较差异无统计学意义(P>0.05);培养48、72 h时,si-Bcl-3#1组MCF-7细胞增殖能力显著低于siControl组(P实验结果显示,Bcl-3和ERα存在相互作用。免疫荧光共定位实验结果显示,Bcl-3和ERα存在共定位现象。结论Bcl-3在乳腺癌细胞中呈高表达,其能够提高乳腺癌ERα信号通路的转导活性,促进ERα阳性乳腺癌细胞增殖。

关键词： B细胞淋巴瘤因子-3 乳腺癌雌激素受体α 细胞增殖