在flashBAC杆状病毒表达系统中制备人GⅡ.4型诺如病毒样颗粒

作     者：刘志鹏 肖锦宁 段良伟 王琼梓 王向鹏 

作者机构：新乡医学院医学技术学院河南省免疫与靶向药物重点实验室 新乡医学院第三附属医院检验科 

出 版 物：《微生物学报》 (Acta Microbiologica Sinica)

年 卷 期：2024年第10期

页      面：3798-3808页

核心收录：

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100705[医学-微生物与生化药学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

基　　金：河南省科技攻关项目(232102311062  222102310688) 

主　　题：人诺如病毒 VP1蛋白 杆状病毒表达系统 病毒样颗粒 

摘      要：【目的】人诺如病毒(human norovirus， HuNoV)是全球范围内引起人急性胃肠炎的主要病原之一，目前尚无有效的疫苗对该病毒进行预防。本研究旨在利用flashBAC杆状病毒表达系统，制备HuNoV病毒样颗粒(virus-like particles， VLP)，为研发HuNoV疫苗奠定基础。【方法】将GⅡ.4型HuNoV的VP1蛋白全长基因序列进行密码子优化后合成，克隆至杆状病毒pBacPAK9转移载体，获得pBacPAK9-8his-VP1重组质粒。酶切、测序鉴定正确后将重组质粒与线性Baculovirus plasmid (Bacmid)共转染SF9细胞，获得含有VP1基因的重组杆状病毒。重组杆状病毒感染Hi-Five (HF)细胞进行表达，利用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis， SDS-PAGE)和Western blotting分析VP1蛋白的表达。用镍柱亲和层析方法纯化VP1蛋白；对纯化后的VP1蛋白进行SDS-PAGE和Western blotting检测。使用高效液相色谱(high performance liquid chromatography， HPLC)对纯化的VP1蛋白进行纯度鉴定。利用透射电镜观察VLP。【结果】构建了pBacPAK9-8his-VP1转移质粒，VP1蛋白在HF细胞中主要在细胞质内表达，分子量约为58 kDa。HPLC结果显示VP1蛋白纯度大于99%，透射电镜可以观察到形状规则、大小均一、直径约为30-40 nm的VLP。【结论】利用杆状病毒表达系统制备了GⅡ.4型HuNoV的VLP，为HuNoV疫苗的研发奠定了基础。