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乳酸干预破骨细胞条件培养基促进内皮细胞血管的生成

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中国组织工程研究 2024年

作者：黄宏莉聂闻麦昱颖覃媛廖红兵 1.广西医科大学口腔医学院/附属口腔医院口腔修复科 2.广西口腔颌面修复与重建研究重点实验室广西医科大学口腔医学院/附属口腔医院口腔修复科广西口腔颌面修复与重建研究重点实验室

背景：聚乳酸作为可降解的骨组织工程支架材料被广泛用于组织再生与修复研究，在促进组织愈合与新骨形成、血管生成中具有重要作用。目的：观察聚乳酸降解终产物乳酸对破骨细胞的作用，以及乳酸干预后破骨细胞条件培养基对血管内皮细胞... 详细信息

背景：聚乳酸作为可降解的骨组织工程支架材料被广泛用于组织再生与修复研究，在促进组织愈合与新骨形成、血管生成中具有重要作用。目的：观察聚乳酸降解终产物乳酸对破骨细胞的作用，以及乳酸干预后破骨细胞条件培养基对血管内皮细胞增殖、迁移和小管形成功能的影响。方法：(1)取对数生长期的小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7，贴壁后分别加入含0,5,10,20 mmol/L乳酸的破骨诱导培养基(含核因子κB受体活化因子配体、体积分数10%胎牛血清的DMEM培养基)，培养5 d后分别进行抗酒石酸酸性磷酸酶与细胞骨架纤维状肌动蛋白染色，培养24 h后采用RT-PCR检测抗酒石酸酸性磷酸酶5 mRNA表达。(2)取对数生长期的RAW264.7细胞，贴壁后分2组培养：对照组加入破骨诱导培养基，实验组加入含10 mmol/L乳酸的破骨诱导培养基，培养5 d后更换为无血清DMEM培养基继续培养24 h，离心取上清液，分别与等体积含体积分数10%胎牛血清DMEM培养基混合后作用条件培养基备用。取对数生长期的人脐静脉内皮细胞，分别与对照组、实验组条件培养基共培养，通过CCK-8、Transwell、划痕、成管实验观察细胞的增殖、迁移和成管能力，通过RT-PCR和Western Blot检测血管生成相关基因和蛋白的表达。结果与结论：(1)抗酒石酸酸性磷酸酶与肌动蛋白染色结果显示，5,10 mmol/L乳酸可促进RAW264.7细胞破骨向分化，其中以10 mmol/L乳酸的促进作用更显著；RT-PCR检测结果显示，5,10,20 mmol/L乳酸均可提高酒石酸酸性磷酸酶5 mRNA的表达，其中以10 mmol/L乳酸的提高作用最显著；(2)与对照组条件培养基相比，实验组条件培养基可促进人脐静脉内皮细胞的增殖、迁移与成管能力(P <0.05)，提高血管内皮生长因子、血管生成素1的mRNA和蛋白表达(P <0.05);(3)结果表明，乳酸诱导分化的破骨细胞条件培养基可促进内皮细胞的血管生成，机制可能与提高血管内皮生长因子、血管生成素1表达相关。

关键词：破骨细胞条件培养基乳酸人脐静脉内皮细胞血管生成内皮细胞

罗汉果苷V调控高糖状态巨噬细胞M1极化促进骨髓间充质干细胞的成骨分化

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中国组织工程研究 2024年

作者：叶枝茂惠久莹钟晓霞麦昱颖李昊广西医科大学口腔医学院/附属口腔医院口腔修复科广西口腔颌面修复与重建研究重点实验室

背景：糖尿病微环境会造成巨噬细胞过度M1极化，这种高糖炎症状态会抑制骨髓间充质干细胞的成骨分化，从而影响糖尿病骨缺损的愈合。研究表明罗汉果苷Ⅴ具有抗炎、抗氧化、降血糖的作用，但其能否调节高糖炎症状态下巨噬细胞M1极化及骨... 详细信息

背景：糖尿病微环境会造成巨噬细胞过度M1极化，这种高糖炎症状态会抑制骨髓间充质干细胞的成骨分化，从而影响糖尿病骨缺损的愈合。研究表明罗汉果苷Ⅴ具有抗炎、抗氧化、降血糖的作用，但其能否调节高糖炎症状态下巨噬细胞M1极化及骨髓间充质干细胞的成骨分化尚不清楚。目的：探讨罗汉果苷Ⅴ在高糖炎症状态下调节巨噬细胞M1型极化对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响。方法：构建糖尿病C57BL/6小鼠模型，从正常和糖尿病小鼠分离骨髓来源巨噬细胞，分别培养于低糖和高糖培养基。使用脂多糖和干扰素γ作为炎症刺激诱导骨髓来源巨噬细胞的M1型极化，同时以160,320,640μmol/L罗汉果苷Ⅴ干预，用流式细胞术检测F4/80+CD86+细胞比例，qRT-PCR检测诱导型一氧化氮合酶、白细胞介素1β、白细胞介素6的mRNA表达水平，ELISA检测骨髓来源巨噬细胞上清液中肿瘤坏死因子α水平。分离C57BL/6小鼠骨髓间充质干细胞，分别使用低糖或高糖成骨诱导液诱导成骨分化，添加M1型巨噬细胞条件培养基作为炎症刺激，以及320μmol/L罗汉果苷Ⅴ干预，成骨诱导14 d后采用qRT-PCR检测碱性磷酸酶、Runt相关因子2、骨钙素、骨桥蛋白的mRNA表达水平，成骨诱导21 d后进行茜素红染色及定量分析。结果与结论：(1)流式细胞术结果显示320,640μmol/L罗汉果苷Ⅴ组的F4/80+CD86+细胞比例明显低于高糖炎症对照组(P <0.05);(2)qRT-PCR结果显示160,320,640μmol/L罗汉果苷Ⅴ组的诱导型一氧化氮合酶、白细胞介素6的mRNA相对表达量较高糖炎症对照组显著降低(P <0.05),320,640μmol/L罗汉果苷Ⅴ组白细胞介素1β的mRNA相对表达量较高糖炎症对照组显著降低(P <0.05);(3)ELISA结果显示160,320,640μmol/L罗汉果苷Ⅴ组的肿瘤坏死因子α分泌水平较高糖炎症对照组显著降低(P <0.05);(4)320μmol/L罗汉果苷Ⅴ干预后，高糖炎症状态下骨髓间充质干细胞的钙盐沉积增加(P <0.05)，且碱性磷酸酶、Runt相关因子2和骨桥蛋白的mRNA相对表达量增加(P <0.05)。结果表明，罗汉果苷Ⅴ可通过抑制高糖炎症状态下骨髓来源巨噬细胞的M1型极化及炎症因子表达，促进骨髓间充质干细胞的成骨分化。

关键词：罗汉果苷Ⅴ 巨噬细胞 M1型极化骨髓间充质干细胞炎症反应成骨分化高糖

甲基转移酶METTL3介导m6A甲基化调控犬JBMMSCs成骨分化

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海南医学院学报 2024年第11期30卷 811-816,823页

作者：陈翌蒋丽花黄旋平广西医科大学口腔医学院/附属口腔医院口腔颌面外科广西南宁530021 广西口腔颌面修复与重建研究自治区级重点实验室广西南宁530021 广西颅颌面畸形临床医学研究中心广西南宁530021

目的:探究甲基转移酶METTL3对颌骨骨髓间充质干细胞(Jaw bone marrow mesenchymal stem cells, JBMMSCs)增殖、迁移及成骨分化的影响。方法:体外培养JBMMSCs,慢病毒转染构建沉默METTL3基因细胞模型,转染后siMETTL3组JBMMSCs mRNA水平(P<... 详细信息

目的:探究甲基转移酶METTL3对颌骨骨髓间充质干细胞(Jaw bone marrow mesenchymal stem cells, JBMMSCs)增殖、迁移及成骨分化的影响。方法:体外培养JBMMSCs,慢病毒转染构建沉默METTL3基因细胞模型,转染后siMETTL3组JBMMSCs mRNA水平(P<0.001)及蛋白水平(P<0.01)下降。检测两组细胞的增殖、迁移、碱性磷酸酶活性、钙沉积以及成骨相关因子骨钙素(osteocalcin,OCN)mRNA及蛋白水平。结果:与沉默对照(siNC)组相比,siMETTL3组培养24、48、72、96 h的增殖活性降低(P<0.001),24 h后细胞迁移能力下降(P<0.05)。成骨诱导7 d后siMETTL3组碱性磷酸酶活性下降,21 d后矿化沉积较siNC组少。qRT-PCR及Western Blot显示,OCN的mRNA(P<0.001)和蛋白(P<0.05)表达水平降低。结论:沉默METTL3可抑制JBMMSCs的增殖、迁移及成骨分化。

关键词： METTL3 颌骨骨髓间充质干细胞成骨分化 m6A甲基化

METTL3调控miR-301a促进缺氧环境下内皮集落形成细胞血管生成

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广西医科大学学报 2024年第6期 841-848页

作者：蒋丽花陈翌黄旋平广西医科大学口腔医学院/附属口腔医院口腔颌面外科广西口腔颌面修复与重建研究重点实验室广西颅颌面畸形临床医学研究中心

目的：探讨缺氧环境对内皮集落形成细胞（ECFCs）血管生成能力的影响及甲基转移酶样3（METTL3）的调控作用。方法：分离、培养犬外周血ECFCs。实验分为正常对照组与缺氧实验组。缺氧实验组分别使用含50μmol/L、100μmol/L和200μmol/L... 详细信息

目的：探讨缺氧环境对内皮集落形成细胞（ECFCs）血管生成能力的影响及甲基转移酶样3（METTL3）的调控作用。方法：分离、培养犬外周血ECFCs。实验分为正常对照组与缺氧实验组。缺氧实验组分别使用含50μmol/L、100μmol/L和200μmol/L氯化钴（CoCl2）的培养基处理细胞24 h，对照组CoCl2浓度为0。CCK-8检测不同浓度CoCl2对ECFCs增殖的影响，实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）的表达，筛选适宜浓度的CoCl2用于缺氧环境构建。Transwell实验和管形成实验分别检测ECFCs迁移和血管生成能力。RT-qPCR和western blotting检测血管内皮生长因子（VEGF）、CD31、METTL3、miR-301a的表达情况。构建沉默METTL3慢病毒转染ECFCs，将ECFCs分为NC-shRNA组和METTL3-shRNA组。RT-qPCR和western blotting检测ECFCs细胞中VEGF、CD31、METTL3、miR-301a表达水平的变化。结果：与正常对照组比较，50μmol/L和100μmol/L的CoCl2培养ECFCs 24 h后可促进细胞增殖（均P<0.000 1）,HIF-1α随着CoCl2浓度升高而高表达（P<0.01）。100μmol/L CoCl2组中ECFCs迁移能力和血管生成能力提高（均P<0.01）,VEGF、CD31、METTL3、miR-301a mRNA水平表达升高（均P<0.01）,VEGF、CD31、METTL3蛋白表达升高（均P<0.01）。与NC-shRNA组比较，METTL3-shRNA组中VEGF、CD31、METTL3、miR-301a mRNA表达降低（均P<0.05）,VEGF、CD31、METTL3蛋白表达降低（均P<0.05）。结论：适宜的缺氧干预可提高ECFCs增殖、迁移和血管生成能力，METTL3/miR-301a轴可能参与调控血管生成。

关键词：缺氧内皮集落形成细胞血管生成甲基转移酶样3

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骨增量材料中血管新生性能的作用及认识

中国口腔种植学杂志 2024年第2期29卷 150-158页

作者：廖红兵麦昱颖广西医科大学附属口腔医院、广西口腔颌面修复与重建研究重点实验室 530021

骨增量是种植治疗中解决骨量不足状况的必要手段,骨增量成功的关键之一是植入的骨增量材料应能发生血管新生,形成与宿主组织有效血氧交换的网络。本文就骨增量材料的血管新生作用研究进展进行阐述,为促进骨增量材料的研发及其临床转化... 详细信息

骨增量是种植治疗中解决骨量不足状况的必要手段,骨增量成功的关键之一是植入的骨增量材料应能发生血管新生,形成与宿主组织有效血氧交换的网络。本文就骨增量材料的血管新生作用研究进展进行阐述,为促进骨增量材料的研发及其临床转化提供建议和参考。

关键词：骨增量材料血管新生组织工程

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改良龋病风险评估工具对龋病风险的预测效果

实用口腔医学杂志 2024年

作者：李伶许妮妮刘传瑾吴冬燕邓思成邱荣敏广西中医药大学第一附属医院广西医科大学口腔医学院/附属口腔医院广西口腔颌面修复与重建研究重点实验室广西颅颌面畸形临床医学研究中心广西壮族自治区卫生健康委员会口腔感染性疾病防治重点实验室广西玉林市第一人民医院

目的:探索改良龋病风险评估工具(MCAT)对南宁市儿童龋病风险的预测效果。方法:结合广西儿童龋病的特点,对美国儿童牙医学会(AAPD)推荐的龋病风险评估工具(CAT)进行改良,开发形成MCAT;分别采用CAT和Cariogram两种评分法对MCAT进行龋病风... 详细信息

目的:探索改良龋病风险评估工具(MCAT)对南宁市儿童龋病风险的预测效果。方法:结合广西儿童龋病的特点,对美国儿童牙医学会(AAPD)推荐的龋病风险评估工具(CAT)进行改良,开发形成MCAT;分别采用CAT和Cariogram两种评分法对MCAT进行龋病风险等级的评判。以广西南宁市江南区332例3岁儿童作为调查对象,通过问卷调查和口腔检查,追踪观察1.5年后龋病的发病情况。比较MCAT采用CAT评分法和Cariogram评分法对该群体新发龋的预测诊断效能。结果:两种方法评判的患龋风险等级有统计学差异(Z=-10.34, P<0.001),且一致性较差(Kappa=0.234, P<0.001)。1.5年后,CAT评分法中的低-高风险组、中-高风险组的龋病发病率及中-高风险组的新增龋均存在统计学差异(P<0.05);Cariogram评分法中的各组间龋病发病率及低-高风险组、中-高风险组的新增龋均存在统计学差异(P<0.05)。Cariogram评分法的AUC为0.722,显著大于CAT评分法的AUC(0.571)。在龋病风险预测模型中,CAT评分法的龋病风险预测模型的拟合度较差(P<0.001);Cariogram评分法的预测模型的拟合度较好(P=1.00),中、高风险组发生新龋的风险分别是低风险组的2.86倍和11.65倍。结论:对于3岁儿童的龋病风险评估, MCAT结合Cariogram评分法准确度高于CAT评分法。

关键词：龋病儿童风险评估预测

乳酸干预破骨细胞条件培养基促进内皮细胞血管的生成

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中国组织工程研究 2025年第11期29卷 2210-2217页

作者：黄宏莉聂闻麦昱颖覃媛廖红兵广西医科大学口腔医学院/附属口腔医院口腔修复科广西壮族自治区南宁市530021 广西口腔颌面修复与重建研究重点实验室广西壮族自治区南宁市530021

背景:聚乳酸作为可降解的骨组织工程支架材料被广泛用于组织再生与修复研究,在促进组织愈合与新骨形成、血管生成中具有重要作用。目的:观察聚乳酸降解终产物乳酸对破骨细胞的作用,以及乳酸干预后破骨细胞条件培养基对血管内皮细胞增殖... 详细信息

背景:聚乳酸作为可降解的骨组织工程支架材料被广泛用于组织再生与修复研究,在促进组织愈合与新骨形成、血管生成中具有重要作用。目的:观察聚乳酸降解终产物乳酸对破骨细胞的作用,以及乳酸干预后破骨细胞条件培养基对血管内皮细胞增殖、迁移和小管形成功能的影响。方法:(1)取对数生长期的小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7,贴壁后分别加入含0,5,10,20 mmol/L乳酸的破骨诱导培养基(含核因子κB受体活化因子配体、体积分数10%胎牛血清的DMEM培养基),培养5 d后分别进行抗酒石酸酸性磷酸酶与细胞骨架纤维状肌动蛋白染色,培养24h后采用RT-PCR检测抗酒石酸酸性磷酸酶5 m RNA表达。(2)取对数生长期的RAW264.7细胞,贴壁后分2组培养:对照组加入破骨诱导培养基,实验组加入含10 mmol/L乳酸的破骨诱导培养基,培养5 d后更换为无血清DMEM培养基继续培养24 h,离心取上清液,分别与等体积含体积分数10%胎牛血清DMEM培养基混合后作用条件培养基备用。取对数生长期的人脐静脉内皮细胞,分别与对照组、实验组条件培养基共培养,通过CCK-8、Transwell、划痕、成管实验观察细胞的增殖、迁移和成管能力,通过RT-PCR和Western Blot检测血管生成相关基因和蛋白的表达。结果与结论:(1)抗酒石酸酸性磷酸酶与肌动蛋白染色结果显示,5,10 mmol/L乳酸可促进RAW264.7细胞破骨向分化,其中以10 mmol/L乳酸的促进作用更显著;RT-PCR检测结果显示,5,10,20 mmol/L乳酸均可提高酒石酸酸性磷酸酶5 m RNA的表达,其中以10 mmol/L乳酸的提高作用最显著;(2)与对照组条件培养基相比,实验组条件培养基可促进人脐静脉内皮细胞的增殖、迁移与成管能力(P<0.05),提高血管内皮生长因子、血管生成素1的m RNA和蛋白表达(P<0.05);(3)结果表明,乳酸诱导分化的破骨细胞条件培养基可促进内皮细胞的血管生成,机制可能与提高血管内皮生长因子、血管生成素1表达相关。

关键词：破骨细胞条件培养基乳酸人脐静脉内皮细胞血管生成内皮细胞

miR-370-3p对口腔鳞癌细胞SCC-9增殖、迁移和侵袭的影响

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广西医科大学学报 2024年第1期41卷 32-39页

作者：万紫微粟小平韦珍夏黄旋平广西医科大学口腔医学院·附属口腔医院颌面外科广西口腔颌面修复与重建研究自治区级重点实验室广西颅颌面畸形临床医学研究中心南宁530021

目的:探究miR-370-3p对口腔鳞癌细胞(SCC-9)增殖、迁移和侵袭的影响,并分析其可能的作用机制。方法:比较人正常口腔鳞状上皮细胞(NOK)与SCC-9细胞miR-370-3p和NPC1表达。将SCC-9细胞分为miR-370-3p mimic组、miR-370-3p阴性对照(NC)组、... 详细信息

目的:探究miR-370-3p对口腔鳞癌细胞(SCC-9)增殖、迁移和侵袭的影响,并分析其可能的作用机制。方法:比较人正常口腔鳞状上皮细胞(NOK)与SCC-9细胞miR-370-3p和NPC1表达。将SCC-9细胞分为miR-370-3p mimic组、miR-370-3p阴性对照(NC)组、miR-370-3p inhibitor组、miR-370-3p inhibitor-NC组。采用克隆形成实验检测细胞集落形成能力,CCK-8法、划痕实验、Transwell实验分别检测细胞增殖、迁移和侵袭能力,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测细胞miR-370-3p表达,双荧光素酶实验检测miR-370-3p与NPC1的靶向关系,western blotting法检测NPC1蛋白表达。结果:与NOK细胞比较,SCC-9细胞miR-370-3p表达上调,NPC1表达下调(均P实验结果显示,miR-370-3p能够靶向结合NPC1的3’-UTR,并抑制NPC1蛋白表达(P口腔鳞癌细胞SCC-9增殖、迁移和侵袭,其机制可能与调控其下游靶基因NPC1的表达有关。

关键词： miR-370-3p 口腔鳞状细胞癌增殖迁移侵袭

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聚焦高黏附力骨黏合剂,促进口腔硬组织修复

中华口腔医学研究杂志（电子版） 2024年第1期18卷 1-4页

作者：李昊韦秀湘钟晓霞广西医科大学口腔医学院/附属口腔医院广西口腔颌面修复与重建研究重点实验室南宁530021

生物可降解骨黏合剂是目前生物材料研究领域的热点之一,在骨折固定和骨缺损治疗中已显示出巨大潜力,但在口腔医学领域应用较少。近期,有学者研发了一种黏附力优异、生物相容性好、可促进骨再生的生物可降解超级骨黏合剂,在口腔骨组织黏... 详细信息

生物可降解骨黏合剂是目前生物材料研究领域的热点之一,在骨折固定和骨缺损治疗中已显示出巨大潜力,但在口腔医学领域应用较少。近期,有学者研发了一种黏附力优异、生物相容性好、可促进骨再生的生物可降解超级骨黏合剂,在口腔骨组织黏附、牙体硬组织粘接和骨再生方面实现了新突破。本文评述其研究成果,并展望口腔骨黏合剂未来的研究方向。

关键词：骨黏合剂骨再生口腔骨缺损