METTL3调控miR-301a促进缺氧环境下内皮集落形成细胞血管生成

作     者：蒋丽花 陈翌 黄旋平 JIANG Lihua;CHEN Yi;HUANG Xuanping

作者机构：广西医科大学口腔医学院/附属口腔医院口腔颌面外科广西口腔颌面修复与重建研究重点实验室广西颅颌面畸形临床医学研究中心南宁530021 

出 版 物：《广西医科大学学报》 (Journal of Guangxi Medical University)

年 卷 期：2024年第41卷第6期

页      面：841-848页

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100104[医学-病理学与病理生理学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(No.82360187) 广西科技基地和人才专项(No.2021AC18031) 广西医疗卫生适宜技术开发与推广应用项目(No.S2021085) 南宁市青秀区科技计划项目(No.2021004) 

主　　题：缺氧 内皮集落形成细胞 血管生成 甲基转移酶样3 

摘      要：目的:探讨缺氧环境对内皮集落形成细胞(ECFCs)血管生成能力的影响及甲基转移酶样3(METTL3)的调控作用。方法:分离、培养犬外周血ECFCs。实验分为正常对照组与缺氧实验组。缺氧实验组分别使用含50μmol/L、100μmol/L和200μmol/L氯化钴(CoCl_(2))的培养基处理细胞24 h,对照组CoCl_(2)浓度为0。CCK-8检测不同浓度CoCl_(2)对ECFCs增殖的影响,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达,筛选适宜浓度的CoCl_(2)用于缺氧环境构建。Transwell实验和管形成实验分别检测ECFCs迁移和血管生成能力。RT-qPCR和western blotting检测血管内皮生长因子(VEGF)、CD31、METTL3、miR-301a的表达情况。构建沉默METTL3慢病毒转染ECFCs,将ECFCs分为NC-shRNA组和METTL3-shRNA组。RT-qPCR和western blotting检测ECFCs细胞中VEGF、CD31、METTL3、miR-301a表达水平的变化。结果:与正常对照组比较,50μmol/L和100μmol/L的CoCl_(2)培养ECFCs 24 h后可促进细胞增殖(均P0.0001),HIF-1α随着CoCl_(2)浓度升高而高表达(P0.01)。100μmol/L CoCl_(2)组中ECFCs迁移能力和血管生成能力提高(均P0.01),VEGF、CD31、METTL3、miR-301a mRNA水平表达升高(均P0.01),VEGF、CD31、METTL3蛋白表达升高(均P0.01)。与NC-shRNA组比较,METTL3-shRNA组中VEGF、CD31、METTL3、miR-301a mRNA表达降低(均P0.05),VEGF、CD31、METTL3蛋白表达降低(均P0.05)。结论:适宜的缺氧干预可提高ECFCs增殖、迁移和血管生成能力,METTL3/miR-301a轴可能参与调控血管生成。