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多靶点抗原肽自体免疫细胞治疗原发性肝细胞癌的临床安全性

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中国肿瘤生物治疗杂志 2016年第1期23卷 11-16页

作者：黄静胡晓云陈晓薇张明霞陈逢生郭亚兵南方医科大学南方医院感染科广东广州510515 南方医科大学南方医院器官衰竭研究国家重点实验室广东广州510515 南方医科大学中西医结合医院广东广州510515

目的:评价多靶点抗原肽自体免疫细胞技术(multiple antigen stimulating cellular therapy,MASCT^(TM))治疗原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的临床安全性。方法:回顾性分析2012年1月至2014年12月南方医院肝病中心收治的接受MASCT^(TM)治疗且治疗前的末次治疗结束最少1个月以上、未接受其他免疫治疗的45例HCC患者的临床资料。第0天分离患者外周血单个核细胞,其中贴壁细胞诱导培养为成熟树突状细胞(muture dendritic cell,mDC),负载14种抗原肽,小部分mDC于第8天经患者腹股沟淋巴结周围区皮下注射;未贴壁细胞第7天与大部分mDC共培养诱导为杀伤性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL),对mDC及CTL进行质量控制检测,第26天经静脉回输患者体内,分析输注细胞后患者的不良反应和血常规、肝肾功能变化。结果:mDC中CD80^+细胞比例为(98.5±5)%、CD83^+细胞为(88.0±10)%、CD86^+细胞为(98.4±3)%、HLA-DR^+细胞为(98.8±2)%,mDC分泌高水平IL-12[(985±312)pg/ml]、低水平IL-10[(53±10)pg/ml]。CTL中CD3^+CD8^+细胞为(83.0±10)%、CD3^+CD56^+细胞为(24.0±5)%,CTL分泌高水平IFN-γ[(1 222±650)pg/ml]、低水平IL-10[(7±5)pg/ml]。MASCT^(TM)治疗后,绝大多数患者的精神、食欲、睡眠和体力较前好转,有2名(4.4%)患者在输注CTL细胞1 h后出现轻中度发热,未观察到其他严重明显不良反应。患者的血常规、肝肾功能均无明显异常变化。结论:MASCT^(TM)成功诱导培养典型mDC和CTL,行MASCT^(TM)治疗的HCC患者不良反应较少,临床应用安全性良好。

关键词：肝细胞癌多靶点抗原肽免疫细胞治疗安全性临床试验

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SPECT仪验收测试若干问题的探讨

中华核医学杂志 1997年第2期17卷 127-128页

作者：李小华吴克宁苏敏胡清伦广州军区广州总医院核医学科中山医科大学附属第一医院核医学科广东医学院核医学教研室中山医科大学附属肿瘤医院核医学科

ＳＰＥＣＴ仪验收测试若干问题的探讨李小华吴克宁苏敏胡清伦ＳＰＥＣＴ仪安装后的验收测试是ＳＰＥＣＴ质量控制的一个首要内容。本研究通过对９台单探头ＳＰＥＣＴ仪的验收测试，探讨其中的一些主要技术问题。资料与方法一、验收测试... 详细信息

ＳＰＥＣＴ仪验收测试若干问题的探讨李小华吴克宁苏敏胡清伦ＳＰＥＣＴ仪安装后的验收测试是ＳＰＥＣＴ质量控制的一个首要内容。本研究通过对９台单探头ＳＰＥＣＴ仪的验收测试，探讨其中的一些主要技术问题。资料与方法一、验收测试指标按目前国际公认的ＮＥＭＡ标准〔...

关键词：医用CT机质量控制

运动训练对脊髓损伤后痉挛大鼠脊髓内钾-氯离子协同转运体2表达的影响

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中国康复医学杂志 2017年第12期32卷 1326-1330页

作者：方露李向哲王红星谢财忠丁洁王彤南京医科大学第一临床医学院江苏南京210029 南京医科大学第一附属医院康复中心南京军区南京总医院

目的:研究运动训练对脊髓损伤(SCI)后痉挛大鼠行为学表现及脊髓内钾-氯离子协同转运体2(KCC2)表达的影响,探讨KCC2在运动训练的解痉效应中的作用。方法:将30只雌性SD大鼠随机分为假手术组、对照组、实验组。采用改良Allen撞击法建立脊... 详细信息

目的:研究运动训练对脊髓损伤(SCI)后痉挛大鼠行为学表现及脊髓内钾-氯离子协同转运体2(KCC2)表达的影响,探讨KCC2在运动训练的解痉效应中的作用。方法:将30只雌性SD大鼠随机分为假手术组、对照组、实验组。采用改良Allen撞击法建立脊髓损伤后痉挛模型,使用BBB评分、Ashworth评分来评估三组大鼠术后行为学变化,并于术后5周用免疫组化技术检测各组大鼠损伤远段脊髓KCC2表达。结果:假手术组术后行为学评分一直保持正常。术后1d—5周,对照组和实验组的BBB评分均持续升高,且2组组内不同时间点的BBB评分差异均有显著性意义(P实验组评分均高于对照组,且差异均有显著性意义(P实验组在术后1周左右出现痉挛,后痉挛程度逐渐加重,至术后5周左右降低,2组组内不同时间点的Ashworth评定结果差异均有显著性意义(P实验组,差异有显著性意义(P实验组能够明显上调KCC2蛋白的表达(P<0.05),但仍低于假手术组(P<0.05)。结论:运动训练可以促进脊髓损伤后运动功能恢复,有效缓解痉挛,并可抑制KCC2表达的下调,运动训练的解痉效应可能是通过增加KCC2表达实现的。

关键词：运动训练脊髓损伤痉挛钾-氯离子协同转运体2

二甲双胍调控miRNA-133b对多囊卵巢综合征患者卵丘颗粒细胞增殖和凋亡的影响

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二甲双胍调控miRNA-133b对多囊卵巢综合征患者卵丘颗粒细胞增殖和...

作者：宋霁广州医科大学

学位级别：硕士

目的多囊卵巢综合征(PCOS),发病率高达5%-10%,主要特点是稀发排卵或无排卵、高雄激素血症及超声下卵巢呈多囊样改变,目前PCOS已严重影响到女性的生殖与健康,但该病发病机制尚不明确,现认为PCOS发病与胰岛素抵抗和高胰岛素血症、免疫因... 详细信息

目的多囊卵巢综合征(PCOS),发病率高达5%-10%,主要特点是稀发排卵或无排卵、高雄激素血症及超声下卵巢呈多囊样改变,目前PCOS已严重影响到女性的生殖与健康,但该病发病机制尚不明确,现认为PCOS发病与胰岛素抵抗和高胰岛素血症、免疫因子失衡、环境及心理因素改变等有关。已知卵丘颗粒细胞在卵泡发育成熟中起重要作用,PCOS患者卵泡发育和成熟障碍导致无排卵是其不孕的重要原因之一。近几年发现二甲双胍在改善PCOS患者胰岛素抵抗的同时也可有效改善PCOS患者的排卵的作用。有学者对PCOS患者血清中miRNA打谱研究发现,PCOS患者血清中miRNA-133b表达下降,而本课题组近年来对miRNA-133b的相关研究发现,miRNA-133b在人类MI期卵母细胞中呈高表达;在小鼠卵母细胞中发现miRNA-133b可影响卵泡发育;在ICSI患者卵丘颗粒细胞体外培养研究发现,miRNA-133b可促进颗粒细胞增殖,抑制颗粒细胞凋亡,且在颗粒细胞中miRNA-133b与caspase-3表达呈相反趋势。但本课题组未在PCOS疾病患者卵丘颗粒细胞中进行miRNA-133b与caspase-3表达的研究,也未对二甲双胍对PCOS疾病患者卵丘颗粒细胞中miRNA-133b与caspase-3表达的具体影响进行研究。由于二甲双胍影响卵泡生长发育的机制还不明确,所以探究二甲双胍是否通过干扰PCOS患者卵丘颗粒细胞中miRNA-133b的表达进而影响颗粒细胞增殖和凋亡状态,具有重要意义。方法收集2016年09月至2017年04月就诊于广州医科大学附属第三医院生殖医学中心,年龄在20-40岁,行IVF-ET治疗的非PCOS,PCOS及近三个月口服二甲双胍治疗的PCOS女性不孕症患者的卵泡液,分离提取其中颗粒细胞进行体外培养及如下研究:(1)采用光学显微镜观察人卵丘颗粒细胞体外培养过程中的生长情况,用CCK-8法检测细胞活性。(2)用Q-PCR法检测颗粒细胞体外培养过程中miRNA-133b及caspase-3的表达。(3)体外二甲双胍干预后观察颗粒细胞活性及生长状态,同时检测细胞中miRNA-133b及caspase-3的表达。结果1、正常状态下(二甲双胍未在体外干预)三组颗粒细胞(non-PCOS,PCOS,PCOS+metformin组)的生长状态、活性及细胞内miRNA-133b与caspase-3的表达情况(1)经光学显微镜观察发现,三组颗粒细胞在0h-192h体外培养过程中生长状态近似,无显著差异。(2)用CCK-8法检测细胞活性发现,整体上三组细胞生长趋势相同,与光学显微镜观察的生长状态结果近似。只是在72h和96h时PCOS组细胞的活性显著低于non-PCOS组(p0.05),但在细胞培养后期PCOS患者的颗粒细胞活性依旧低于non-PCOS组(p<0.05)。(3)Q-PCR结果:整体上三组细胞中miRNA-133b与cleaved caspase-3表达呈相反趋势;具体的,non-PCOS组颗粒细胞中二者表达趋势较正常情况下相比不变,而PCOS组和PCOS+metformin组颗粒细胞中miRNA-133b表达在d8天表达下降(p<0.05)。结论1、人卵泡液中颗粒细胞体外培养过程中,正常生长周期只有8天,生长状态在72h时最佳,这与患者的病种无关

关键词：多囊卵巢综合征颗粒细胞 miRNA-133b cleaved caspase-3 细胞活性细胞增殖细胞凋亡

心肌缺血和有氧运动训练诱导VEGF表达时间规律的实验研究

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中国康复医学杂志 2008年第3期23卷 193-197页

作者：邱峰励建安陆晓黄澎吴涛孟祥博高晶刘鹏南京医科大学第一附属医院康复医学科南京210029

目的:研究心肌缺血和有氧运动训练诱导血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达的时间规律。方法:成功建模的健康成年巴马小型猪24只,体重23.7±4.0kg,随机分为对照组、缺血组和运动组。将可控性水囊梗阻器安装在猪冠状动脉钝缘支处,建立可控性... 详细信息

目的:研究心肌缺血和有氧运动训练诱导血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达的时间规律。方法:成功建模的健康成年巴马小型猪24只,体重23.7±4.0kg,随机分为对照组、缺血组和运动组。将可控性水囊梗阻器安装在猪冠状动脉钝缘支处,建立可控性猪心肌缺血模型。对照组不进行缺血刺激和有氧运动训练;缺血组进行单纯缺血刺激,2min/次,2次/d,持续缺血刺激8周;运动组除进行缺血刺激外,每天进行一次平板有氧运动训练,每次30min。每两周取动脉血,采用ELISA法检测血液VEGF。实验终点时采用WesternBlot检测缺血区心肌VEGF。结果:缺血组第2周血液中VEGF的表达量明显高于实验前(P0.05)。运动组中第2-4周血液中VEGF的表达量持续增高(P0.05)。缺血区心肌VEGF表达和血液VEGF表达呈正相关(r=0.826,P<0.01)。结论:心肌缺血和有氧运动训练诱导的血液VEGF增高分别在第2周和第4周达到高峰,然后进入平台期。

关键词：心肌缺血有氧运动血管内皮细胞生长因子

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中华实验外科杂志 2011年第6期28卷 929-931,F0003页

作者：王俊华卢晓梅张传山魏绪法温浩林仁勇新疆医科大学第一附属医院医学研究中心新疆包虫病基础医学重点实验室乌鲁木齐830054

目的探讨泡球蚴感染宿主病灶旁免疫细胞中转化生长因子-β1（TGF-p1）、凋亡及相关因子Caspase-3的变化及其意义。方法8例配对泡型包虫患者和泡球蚴感染小鼠均采用苏木素-伊红（HE）染色观察病理变化，免疫组织化学技术检测病灶旁免疫细... 详细信息

目的探讨泡球蚴感染宿主病灶旁免疫细胞中转化生长因子-β1（TGF-p1）、凋亡及相关因子Caspase-3的变化及其意义。方法8例配对泡型包虫患者和泡球蚴感染小鼠均采用苏木素-伊红（HE）染色观察病理变化，免疫组织化学技术检测病灶旁免疫细胞TGF-β1以及凋亡相关因子Caspase-3的表达与分布，原位末端标记技术（TUNEL）检测病灶旁免疫细胞凋亡。结果泡型包虫患者及泡球蚴感染小鼠病灶旁及汇管区均有大量炎性细胞灶性浸润，TGF—β1（P〈0．01）和凋亡相关因子Caspase-3（P〈0．01）高表达，TUNEL结果表明病灶旁免疫细胞发生凋亡，与对照比较差异有统计学意义（P〈0．01）。结论泡球蚴在感染宿主过程中可能通过引起宿主TGF—β1高表达，造成免疫细胞发生凋亡而达到逃避宿主免疫反应长期寄生的目的。

关键词：肝泡球蚴免疫细胞转化生长因子-β1

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广州地区儿童腹泻轮状病毒的流行病学研究

现代预防医学 2014年第18期41卷 3334-3336+3359页

作者：陈波黄海樱周强嘉红云冀天星广州医科大学附属第二医院检验科

目的了解广州地区儿童腹泻中轮状病毒（RV）感染的情况,为临床诊断和治疗提供可靠实验数据。方法收集某院2010年1月至2012年12月住院和门诊的腹泻儿童粪便标本1 878,采用免疫层析双抗体夹心法进行A组轮状病毒（RV）抗原检测,并比较分析... 详细信息

目的了解广州地区儿童腹泻中轮状病毒（RV）感染的情况,为临床诊断和治疗提供可靠实验数据。方法收集某院2010年1月至2012年12月住院和门诊的腹泻儿童粪便标本1 878,采用免疫层析双抗体夹心法进行A组轮状病毒（RV）抗原检测,并比较分析检测数据。结果 1 878例腹泻标本中[年龄范围在（1.99±2.37）岁],有616例RV结果阳性,阳性率为32.80%;其中0;岁组腹泻患儿童阳性率可达36.21%（构成比69.48%）,其次为1;岁年龄组腹泻儿童占31.92%（构成比15.91%）,2;岁年龄组腹泻儿童占33.74%（构成比9.09%）,可见0;岁年龄段腹泻儿童（构成比共占94.48%）年龄段为高发期。以每年秋冬季节10、11、12和1月份（4个月构成比为82.46%）为发病高峰。结论轮状病毒是本地区儿童腹泻（0;4岁）的主要病原,0;岁儿童是轮状病毒的易感人群,以秋冬季节10、11、12和1月份为流行高峰。

关键词：轮状病毒儿童腹泻免疫层析粪便

利用iPS技术构建类脑器官模型以探索神经发育中的表观遗传机制

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利用iPS技术构建类脑器官模型以探索神经发育中的表观遗传机制

作者：黄俊驹广州医科大学

学位级别：硕士

研究背景:神经发育受到表观遗传与基因的精细时空调控。神经发育障碍病人大规模基因组研究表明表观遗传信息的改变与疾病高度相关。因而,采用有效模型来揭示神经发育表观遗传调控机制是研究的突破口。研究目的:本研究旨在利用iPS与类脑... 详细信息

研究背景:神经发育受到表观遗传与基因的精细时空调控。神经发育障碍病人大规模基因组研究表明表观遗传信息的改变与疾病高度相关。因而,采用有效模型来揭示神经发育表观遗传调控机制是研究的突破口。研究目的:本研究旨在利用iPS与类脑器官技术联合多组学分析,通过致病表观遗传基因KMT2D与CHD8,分别探究神经发育障碍KABUKI综合征与孤独症的表观遗传机制。研究方法:我们首先通过重编程技术诱导病人家系iPSCs,通过q PCR,免疫荧光以及拟胚体实验等方法进行细胞验证,然后使用基因编辑对人ESC或iPSC进行疾病基因型模拟,再诱导制备类脑器官,通过qPCR,免疫荧光以及多组学分析等手段对类脑器官体系进行验证,通过这一套体系,我们可以深入研究单个或多个基因缺陷在神经发育过程中的表观遗传调控机制。各章节研究结果:文章主要围绕KMT2D分子机制与CHD8孤独症类脑器官建立两个部分进行。第一部分,我们构建歌舞伎综合征类脑器官模型进行组蛋白H3K4甲基转移酶KMT2D的致病机制的探究。前期研究中,实验室在人胚胎干细胞系HN4中通过CRISPR-Cas9基因敲除KMT2D SET结构域,构建KMT2D SET细胞并诱导类脑器官,通过免疫荧光与RNA-seq发现KMT2D的敲除引起WNT信号配体表达下降以及GABAergic interneuron的过量产生。为了探究KMT2D是否通过WNT通路影响GABAergic interneuron的分化,我们利用WNT激动剂在KMT2D SET类脑器官中激活WNT通路,发现GABAergic interneuron的过量产生的现象得到挽救;利用WNT抑制剂IWP发现能使野生型细胞GABAergic interneuron的过量产生。这些结果为后续研究发现KMT2D靶标Roof plate的WNT增强子提供了依据与思路,从而为KABUKI综合征提供了新见解。第二部分,我们拟采用第一部分的研究范式,研究孤独症基因CHD8在类脑器官中的作用机制。孤独症谱系障碍是一类神经发育疾病,其主要表现为神经系统失调影响到大脑功能而导致的终身发展障碍。染色质域-解旋酶-DNA结合蛋白8(CHD8)是孤独症的高危基因之一。我们与合作医院进行临床病例分析,采集CHD8家系的血液样本分离外周血单核细胞(PBMCs),目前已运用iPS重编程技术,取得了患者及其亲本PBMCs重编程的iPSCs。得到了病人及亲本的iPSCs后我对其进行了验证,通过q PCR和免疫荧光检测其多能性基因的表达;制备拟胚体进行分化潜能检测;确定了两株细胞可用后,我们进行了类脑器官体系构建的摸索,并成功制备了类脑器官,通过观察形态及检测神经相关标志基因,我们确立了初步的类脑器官制备体系。随后,我运用CRISPR-Cas9-ss ODN基因编辑技术对患者iPSCs突变位点进行修复。通过制备EB检测其分化潜能,发现其向外胚层及内胚层分化能力存在缺陷,通过核型检测,发现其存在平衡易位现象。接下来,我们拟结合单细胞测序技术,破译CHD8引起的发育时空轨迹中表观调控异常及机制。另外,我通过iPSCs重编程技术验证了实验室自主开发的i CD1培养基的优越性,通过该系统产生的iPSCs在克隆形态、细胞功能、细胞标记物和转录组方面与胚胎干细胞几乎一致,因此适合用于下游生物学研究。我们的方法能够简单使用地制备小鼠iPSCs,为进一步改进iPSCs技术提供了起点。研究结论:本论文通过从iPSC重编程到类脑器官模型建立来探究神经发育疾病的表观机制,发现KMT2D通过WNT信号通路调控GABAergic interneuron过度表达。此外还构建了CHD8类脑器官模型。这些研究将为神经发育障碍致病的机理研究提供了新的研究思路及范式。

关键词：孤独症 CHD8 重编程诱导多能干细胞(iPSCs) 外周血单核细胞(PBMC) 类脑器官基因编辑单细胞测序

Bundles模式在胎盘植入患者孕期管理中的作用分析

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Bundles模式在胎盘植入患者孕期管理中的作用分析

作者：王云广州医科大学

学位级别：硕士

研究背景:胎盘植入是产科的严重并发症,是导致孕产妇严重产后出血和围产期子宫切除的主要原因。前置胎盘和既往剖宫产史是胎盘植入的主要危险因素。近些年,随着生育政策的调整,既往有剖宫产史的女性选择再次妊娠,胎盘植入发病率也因此... 详细信息

研究背景:胎盘植入是产科的严重并发症,是导致孕产妇严重产后出血和围产期子宫切除的主要原因。前置胎盘和既往剖宫产史是胎盘植入的主要危险因素。近些年,随着生育政策的调整,既往有剖宫产史的女性选择再次妊娠,胎盘植入发病率也因此呈上升趋势。如何对胎盘植入的孕产妇进行管理,降低围产期不良妊娠结局,已成为近些年来产科领域的研究热点。已有证据表明,围手术期的多学科团队管理能够降低并发症发病率和孕产妇死亡率,但尚无院外管理的相关报道。基于此,为提高胎盘植入孕产妇的安全分娩,自2017年开始,广州医科大学附属第三医院规范的对胎盘植入的孕妇在孕期施行Bundles模式管理,将胎盘植入的院内、院外管理整合成系统性、连续性管理模式,旨在通过这些管理模式的临床推进能够降低围产期不良妊娠结局。研究目的:探究施行Bundles模式管理对胎盘植入孕产妇妊娠结局的影响。研究对象与方法:2017年开始,本院产科对既往有剖宫产史,此次妊娠诊断为前置胎盘合并胎盘植入的孕妇,在妊娠期全面正规施行Bundles模式管理,该模式经过一年的完善和各环节的配合已成熟运行。将2018年1月1日至2018年12月31日施行Bundles模式管理并在广州医科大学附属第三医院分娩,产后确诊为前置胎盘合并胎盘植入的孕产妇共140例纳入研究组,收集临床资料;将2015年1月1日至2016年12月31日未经Bundles模式进行综合管理的183例胎盘植入孕产妇纳入对照组,收集临床资料。采用横断面对比研究方法,对两组孕产妇妊娠结局进行分析,比较Bundles模式在该类病人管理中的优势。分析指标:两组孕妇一般资料(包括年龄、孕次、剖宫产次数、人工流产次数、分娩孕周)、围产期结局(包括术前血红蛋白、术前输血比例、术中出血量、术后输血量、失血性休克比例、转ICU比例、二次手术比例、术后至出院时间、住院费用)等临床资料。Bundles模式介绍:1.院内与院外的绑定(In to Out):将诊断为胎盘植入的孕妇纳入广州医科大学附属第三医院院外管理系统,并收入院进行病情评估,制定治疗方案并告知病情,病情平稳后出院,同时在急诊以及手术室做好应急备案(备案内容:院外随访的孕妇姓名,血型,血红蛋白等一般资料,2周更新一次),以应对急诊情况。纳入管理的孕妇需要居住在5分钟内可以达到救治中心的地方,每2周门诊产检并且交叉配血以保证血制品储备,随诊医生通过院外管理系统对孕妇进行严密随访。当出现阴道活动性出血时,急诊开放绿色通道可5分钟内入院,30分钟内开展手术。2.医生--护士快速绑定(Doctor-to-Nurse):打造产科快速反应团队,当发生紧急情况时,快速组建抢救团队对孕产妇施行紧急处理措施。3.多种控制性出血措施的绑定(产科-麻醉科-泌尿科):通过多学科合作以及产科的多种控制性出血手术联合应用来提高孕产妇的预后。结果:1.两组一般资料包括平均年龄、孕次、剖宫产次数、人工流产次数、分娩孕周的差异均无统计学意义(P>0.05)。2.两组围产期结局:研究组术前HGB水平较对照组高,研究组术前输血比例、术中出血量、输血量、失血性休克比例、转ICU比例、术后住院时间、住院费用均较对照组低,差异有统计学意义(P0.05)。结论:通过对胎盘植入的孕产妇施行Bundles模式的管理可改善围产期结局,包括提高术前血红蛋白水平,减少术前输比例、术中出血量、术后输血量、失血性休克比例、转ICU比例、术后住院时间、住院费用。

关键词：胎盘植入 Bundles 管理围产期结局