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盐酸青藤碱诱导黏连性膝关节强直家兔成纤维细胞凋亡的机制研究

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生物化学与生物物理进展 2024年第4期51卷 959-968页

作者：侯新聚雷洪峰陈勇黎芙希孙敬宁刘佳铭马红梅南昌市洪都中医院南昌330008 广州中医药大学第四临床医学院广州510006 广州中医药大学第二临床医学院广州510006

目的观察盐酸青藤碱对膝关节黏连强直的家兔成纤维细胞增殖和相关基因表达的影响,并进一步尝试探讨其对抗膝关节黏连强直的作用机制。方法以体外培养法培养成纤维细胞,并设对照组、盐酸青藤碱低中高浓度实验组。CCK-8法检测成纤维细胞... 详细信息

目的观察盐酸青藤碱对膝关节黏连强直的家兔成纤维细胞增殖和相关基因表达的影响,并进一步尝试探讨其对抗膝关节黏连强直的作用机制。方法以体外培养法培养成纤维细胞,并设对照组、盐酸青藤碱低中高浓度实验组。CCK-8法检测成纤维细胞增殖的情况;实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)法检测经过盐酸青藤碱处理后,成纤维细胞相关基因mRNA表达的改变,用ELISA法检测药物的作用对血清中炎症因子等水平的影响,蛋白质印迹法(Western blot)检测相关蛋白质的表达。结果盐酸青藤碱能降低成纤维细胞存活率,且随浓度升高存活率逐渐降低。盐酸青藤碱中各个组的效果均十分明显(P<0.05)。在相关基因的mRNA表达层面,与对照组比较,盐酸青藤碱各组炎症因子均显著下调(P<0.05),凋亡蛋白的表达量显著上升、Bcl-2的mRNA表达量下降(P<0.05),而PI3K/mTOR/AKT3信号通路分子的mRNA表达量均下降(P<0.05)。在蛋白质表达层面,与对照组相比较,中、高剂量盐酸青藤碱组血清中炎症因子IL-6、IL-8、IL-1β、TGF-β的水平均明显下调(P<0.05),凋亡蛋白cleaved-PARP、cleaved caspase-3/7及Bax的表达量均上调,并且与给药剂量成正相关,而抗凋亡蛋白Bcl-2、PI3K/AKT3/mTOR信号通路的表达量则与给药剂量成负相关。盐酸青藤碱对家兔膝关节成纤维细胞的存活表现为显著的抑制作用,作用机制或与下调炎症因子IL-6、IL-8、IL-1β的表达,并促进凋亡蛋白cleaved-PARP、cleaved caspase-3/7及Bax的表达,抑制Bcl-2的表达,抑制其下游PI3K/AKT3/mTOR信号通路的基因表达有关。结论盐酸青藤碱可抑制黏连性膝关节强直家兔膝关节成纤维细胞的炎症反应和加速成纤维细胞的凋亡,或可通过该机制为改善和治疗黏连性膝关节强直提供新的方法。

关键词：盐酸青藤碱黏连性膝关节强直家兔成纤维细胞

1株伤口分离贪铜菌的分类鉴定及生物学特征分析

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中华微生物学和免疫学杂志 2024年第6期44卷 510-518页

作者：康世越邓晨晖陈晓慰林美莲屈平华周强广州中医药大学第二临床医学院广州510006 广州中医药大学第二临床医学院/广东省中医院麻醉科广州510006 重庆医科大学检验医学院重庆400016 广州中医药大学第二临床医学院/广东省中医院检验医学部广州510006

目的对从临床伤口标本中分离出的贪铜菌SZY C1进行形态学及分子生物学鉴定和分析,了解其微生物学特性及明确分类学地位。方法将菌株SZY C1复苏培养后,依次进行形态学、生理生化鉴定、16S rRNA基因测序、全基因组测序,并应用生物信息学... 详细信息

目的对从临床伤口标本中分离出的贪铜菌SZY C1进行形态学及分子生物学鉴定和分析,了解其微生物学特性及明确分类学地位。方法将菌株SZY C1复苏培养后,依次进行形态学、生理生化鉴定、16S rRNA基因测序、全基因组测序,并应用生物信息学软件对其基因组和毒力基因进行分析。结果菌株SZY C1为不发酵糖革兰阴性菌,菌体无鞭毛、不形成芽孢,可在哥伦比亚血琼脂平板上培养24 h呈现灰白色、圆形、突起、不透明、边缘整齐的菌落。基于16S rRNA基因序列分析结果显示,菌株SZY C1与耐金属贪铜菌(Cupriavidus metallidurans)的相似度为98.52%。菌株SZY C1测得基因组大小为5515517 bp,G+C含量为67.87%,全基因系统发育分析显示,菌株SZY C1与根际贪铜菌亲缘化关系最近,两者之间平均核苷酸一致性值84.76%,数字DNA-DNA杂交值为29.1%,低于原核生物物种的鉴定阈值。基因预测显示菌株SZY C1携带多种毒力基因、耐药基因和抗重金属基因。结论根据表型和基因组分析,菌株SZY C1为贪铜菌属中潜在的新种。

关键词：贪铜菌属菌种鉴定全基因组测序

1株血液分离的油葫芦苍白杆菌的鉴定及系统发育分析

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中华微生物学和免疫学杂志 2024年第8期44卷 680-688页

作者：刘健龙韩德兴李顺光刘雅宋春荣陈晓慰付敏胡琼屈平华湖南省儿童医院检验中心长沙410007 广州中医药大学第二临床医学院广州510006 广州中医药大学第二临床医学院/广东省中医院检验医学部广州510006

目的对临床血液标本分离的细菌7712(=CGMCC 1.17031=NBRC 113783=KCTC 15766)进行生物学特性和系统进化分析,明确其分类学地位。方法观察菌株的培养特性并进行形态学、生理生化鉴定、基质辅助激光解吸电离子飞行时间质谱鉴定和基因组测... 详细信息

目的对临床血液标本分离的细菌7712(=CGMCC 1.17031=NBRC 113783=KCTC 15766)进行生物学特性和系统进化分析,明确其分类学地位。方法观察菌株的培养特性并进行形态学、生理生化鉴定、基质辅助激光解吸电离子飞行时间质谱鉴定和基因组测序鉴定,并构建基因组发育树以分析其分类学位置。采用在线毒力基因数据库和抗生素抗性数据库,分别对分离株及近缘菌株进行基于全基因组的毒力基因和耐药基因的比较分析。结果分离株7712为脲酶阳性的需氧革兰阴性非发酵菌,VITEK GN鉴定为人苍白杆菌。16S rRNA基因序列分析显示,分离株7712与苍白杆菌属及布鲁菌属均具有较高的序列一致性;而基于全基因系统发育分析显示,分离株7712与油葫芦苍白杆菌LCB8T和嗜血苍白杆菌CCUG 38531T聚类成一个分支,并与其他苍白杆菌属细菌和布鲁菌属聚类成一个大的分支。基因组亲缘性指数分析显示,分离株7712和油葫芦苍白杆菌LCB8T的平均核苷酸一致性为98.22%,高于原核生物物种的鉴定阈值95%。分离株7712携带多种毒力基因和耐药基因,其中OCH基因可能与头孢菌素耐药有关。结论确定了1例由油葫芦苍白杆菌引起的临床感染,丰富了苍白杆菌属生物多样性信息。

关键词：苍白杆菌 16S rRNA 全基因组测序系统发育树

基于概念操作化的以证统病干预性临床研究方法学框架的构建

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中国循证医学杂志 2024年第10期24卷 1192-1197页

作者：黄仟禤美玲郭晓慧曹文聪刘冰清邱幸莹周莉温泽淮广州中医药大学第二附属医院/广东省中医院广州510120 广州中医药大学第二临床医学院广州510405

目的借鉴社会学领域的概念操作化方法,建立中医以证统病干预性临床研究方法学框架。方法对以证统病临床研究模式进行操作化定义,明确方法学框架构建的范围和方向。开展概况性评价总结以证统病临床研究的设计特征,归纳方法学框架的基本... 详细信息

目的借鉴社会学领域的概念操作化方法,建立中医以证统病干预性临床研究方法学框架。方法对以证统病临床研究模式进行操作化定义,明确方法学框架构建的范围和方向。开展概况性评价总结以证统病临床研究的设计特征,归纳方法学框架的基本结构与内容,并通过深度访谈获取中医专家的观点及建议,完善充实方法学框架。开展问卷调查初步评价方法学框架的合理性。结果共纳入74项以证统病临床研究进行分析,访谈了12位中医临床及科研领域专家,综合文献及访谈研究的结果形成了初步方法学框架;共32位专家参与问卷调查,大多数专家对方法学框架的合理性持积极评价,根据专家意见修订确立的最终方法学框架为四级结构,共25个细目。结论本研究遵循国际通用的方法学框架开发步骤,建立了合理、可行的以证统病干预性临床研究方法学框架,为未来同类研究提供了设计、实施和评价的技术参考。

关键词：异病同治以证统病临床研究概念操作化方法学框架

肺结节中西医结合恶性风险预测模型的建立与验证

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中国实验方剂学杂志 2024年

作者：杨倩肖晶旻陈远彬吴蕾广州中医药大学第二临床医学院广东省中医院

目的：基于临床数据探索肺结节恶性风险的危险因素，构建肺结节中西医结合恶性风险预测模型并使用列线图将预测结果可视化。方法：基于横断面调查研究设计，纳入2023年4月-2024年1月于广东省中医院呼吸与心胸外科住院的肺结节患者，按7... 详细信息

目的：基于临床数据探索肺结节恶性风险的危险因素，构建肺结节中西医结合恶性风险预测模型并使用列线图将预测结果可视化。方法：基于横断面调查研究设计，纳入2023年4月-2024年1月于广东省中医院呼吸与心胸外科住院的肺结节患者，按7∶3随机将数据集分成训练集和验证集。在训练集中，通过单因素Logistic回归分析及LASSO回归分析选择预测因素，经Logistic回归方法建模，对西医及中西医结合预测模型的区分度、校准度及临床决策曲线等性能进行比较，筛选出最优模型，并使用列线图对模型进行可视化呈现。结果：本研究共纳入366例患者，划分为训练集（258例）及验证集（108例），可纳入年龄、嗜食肥甘厚腻、环境或职业暴露史、气虚质、阳虚质、结节密度及结节直径等7个预测因素。采用Logistic回归构建模型，仅以年龄、环境或职业暴露史、结节密度及结节直径为预测因素建立的西医模型定义为model1，而在以上基础上增加嗜食肥甘厚腻、气虚质和阳虚质为预测因素建立的中西医结合模型定义为model2，model2在训练集及验证集中具有更好的预测效能，其训练集准确率为0.740，精确率为0.825，召回率为0.829，F1分数为0.827，曲线下面积（Area Under the Curve，AUC）为0.865（95%CI：0.815-0.915），布里尔评分为0.122；验证集准确率为0.731，精确率为0.776，召回率为0.831，F1分数为0.803，AUC为0.852（95%CI：0.776-0.927），布里尔评分为0.149，校准曲线及决策曲线分析显示该模型在预测中具有较好的一致性与临床效用性。构建方程为肺结节恶性概率p= eY/(1+eY)，其中Y=-4.187+0.022×（年龄）+1.079×（环境或职业暴露史）+0.718×（嗜食肥甘厚腻）+1.403×（气虚质）+0.732×（阳虚质）+0.349×（纯磨玻璃密度结节）+1.304×（部分实性密度结节）+0.148×（结节直径），并采用直观的列线图进行展示。结论：本研究开发了一个肺结节恶性风险的综合评估模型，结合了中医和西医的因素，将中医元素嵌入预测模型可以多维度评估结节恶变的相关危险因素，具有良好的诊断效能，为早期识别肺癌提供一定的参考价值。

关键词：肺结节中西医结合预测模型

多组学分析揭示溃疡性结肠炎缓解期脾虚湿困证与活动期湿热阻滞证间的潜在分子机制及靶向中药预测

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中草药 2024年第9期55卷 3041-3056页

作者：黎祖鸣封杰妮陈雪如陈剑坤卢月李际强冯艳广州中医药大学第二临床医学院广东广州510405 广州中医药大学第二附属医院(广东省中医院) 广东广州510006

目的综合分析溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)相关scRNA-seq和RNA-seq数据集,探讨UC缓解期脾虚湿困证与活动期湿热阻滞证间的潜在分子机制,并挖掘潜在干预中药。方法运用差异基因表达分析和韦恩图鉴定出UC缓解期脾虚湿困证和活动... 详细信息

目的综合分析溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)相关scRNA-seq和RNA-seq数据集,探讨UC缓解期脾虚湿困证与活动期湿热阻滞证间的潜在分子机制,并挖掘潜在干预中药。方法运用差异基因表达分析和韦恩图鉴定出UC缓解期脾虚湿困证和活动期湿热阻滞证相关基因及两者间的对话基因。通过京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)、基因集变异分析(gene set variation analysis,GSVA)及Spearman相关性分析深入探讨对话基因参与的生物过程及潜在功能。通过单细胞转录组分析探讨UC缓解期与活动期的差异情况及对话基因在其中的作用。基于循环算法构建UC缓解期脾虚湿困证向活动期湿热阻滞证发生发展的风险预测模型。运用外部数据集、动物实验与实时定量聚合酶链反应(realtime quantitative polymerase chain reaction,RT-PCR)进一步验证对话基因的表达情况。借助SoFDA数据库构建“基因-中医症状/现代医学症状”网络;借助TCMIP和COREMINE数据库预测对话基因的潜在靶向中药。结果鉴定出31个UC缓解期脾虚湿困证相关基因,其主要富集在代谢相关途径;鉴定出160个UC活动期湿热阻滞证相关基因,其主要富集在炎症免疫相关途径。鉴定出22个UC缓解期脾虚湿困证与活动期湿热阻滞证之间的对话基因,上调对话基因与炎症免疫相关途径呈显著相关性,下调对话基因与代谢途径呈显著相关性。单细胞转录组分析显示,相比于正常对照及UC缓解期,UC活动期中B细胞占比上调;B细胞在UC活动期湿热阻滞证中作用贡献较大,而在UC缓解期脾虚湿困证中的作用贡献较小;UC活动期B细胞的受体信号通路活性明显高于UC缓解期;上调的对话基因CD55在B细胞中表达水平较高,CD55+B细胞与CD55−B细胞之间存在差异的细胞通讯及细胞代谢水平。6个风险预测基因(CD55、PCSK1、SERPING1、ACAT1、SLC26A2、HMGCS2)可以较为准确预测UC缓解期脾虚湿困证向UC活动期湿热阻滞证发展,动物实验及RT-PCR验证了其表达水平。通过数据库检索得到人参、黄芪、枸杞子等45味潜在靶向中药。结论鉴定出22个关键对话基因,它们可能通过影响炎症免疫和代谢相关途径诱导UC缓解期脾虚湿困证向UC活动期湿热阻滞证发展。B细胞在UC缓解期脾虚湿困证向活动期湿热阻滞证发生发展过程中发挥重要作用。CD55可能通过影响炎症免疫和代谢相关途径,促进B细胞活性,从而促进UC缓解期脾虚湿困证向活动期湿热阻滞证发展。22个关键对话基因与UC相关中医症状和现代医学症状关联密切。

关键词：溃疡性结肠炎单细胞转录组转录组缓解期脾虚湿困证活动期湿热阻滞证人参黄芪枸杞子

腹腔镜胰十二指肠切除术中胰十二指肠下动脉处理方法的临床应用

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中华外科杂志 2024年第10期62卷 947-952页

作者：沈展涛喻志敏钟小生黄有星仇成江陈彦辰陈桂豪张生朱春宝刘张苑珠刘一峰谭志健广州中医药大学第二临床医学院胰腺中心广州510120

目的探讨腹腔镜胰十二指肠切除术(LPD)中妥善处理胰十二指肠下动脉(IPDA)的临床效果。方法本研究为回顾性病例系列研究。回顾性收集2022年1—12月广州中医药大学第二临床医学院胰腺中心连续收治的70例因胰头占位、壶腹部肿瘤或胆总管下... 详细信息

目的探讨腹腔镜胰十二指肠切除术(LPD)中妥善处理胰十二指肠下动脉(IPDA)的临床效果。方法本研究为回顾性病例系列研究。回顾性收集2022年1—12月广州中医药大学第二临床医学院胰腺中心连续收治的70例因胰头占位、壶腹部肿瘤或胆总管下段占位而接受LPD的患者的临床和病理学资料。男性47例(67.1%),女性23例(32.9%),年龄(59.9±12.8)岁(范围:13~87岁)。IPDA的解剖和处理方法:结肠上区采取中间入路,于肠系膜上动脉(SMA)和肠系膜上静脉(SMV)之间,鞘外解剖、显露SMA右侧,显露SMA右侧分支,暂不离断;结肠下区沿空肠动脉由足侧向头侧解剖追踪、显露SMA主干,判断IPDA与空肠动脉的关系,识别并离断IPDA,处理IPDA根部。采用门诊或电话方式进行随访,术后每1~3个月门诊随访1次。结果本组患者的LPD完成率为98.6%(69/70),所有患者获得根治性切除。术中联合血管切除重建9例(12.9%),其中1例(1.4%)经上腹部小切口完成血管重建和消化道重建。手术时间(432.7±115.4)min(范围:282~727 min),术中出血量(140.0±125.7)ml(范围:20~800 ml)。2例(2.9%)输注新鲜冰冻血浆。91.4%(64/70)的病例术中实现IPDA可靠结扎、根部安全处理,8.6%(6/70)合并IPDA损伤出血,无中转开腹病例。术后病理学检查结果显示,肿瘤最大径(3.3±1.6)cm(范围:1~7 cm),清扫淋巴结(17.0±7.3)枚(范围:0~46枚),合并淋巴结转移13例(18.6%)。术后发生B级胰瘘5例(13.2%),无C级胰瘘,胆瘘1例(1.4%),胃排空延迟2例(2.9%),淋巴漏2例(2.9%),腹腔感染9例(12.9%),切口脂肪液化1例(1.4%)。术后腹腔出血2例(2.9%,1例为胃小弯侧系膜血管出血,1例为肝固有动脉鞘滋养血管渗血),均为非IPDA相关性出血。术后住院时间(15.2±4.6)d(范围:9~28 d)。结论LPD术中采取妥善方法处理IPDA,可减少术中、术后IPDA相关性出血,提升LPD的安全性。

关键词：胰腺肿瘤胰十二指肠切除术腹腔镜胰十二指肠切除术胰十二指肠下动脉安全模式

缺氧对胃癌细胞生长和5-氟尿嘧啶化学治疗效果的影响

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中南大学学报（医学版） 2024年第3期49卷 392-399页

作者：周雅丽沈翌飞汪凯李一凡张静妍兰州大学第二医院/第二临床医学院萃英生物医学研究中心兰州730030 兰州大学第二医院/第二临床医学院兰州730030 兰州大学第二医院/第二临床医学院皮肤科兰州730030

目的:缺氧是造成胃癌化学治疗(以下简称“化疗”)耐药的重要原因,但目前对单纯缺氧环境下胃癌的生长情况了解甚少,本研究通过观察缺氧对胃癌细胞生长的影响,探讨缺氧环境中胃癌细胞对化疗药物5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)的反应。方... 详细信息

目的:缺氧是造成胃癌化学治疗(以下简称“化疗”)耐药的重要原因,但目前对单纯缺氧环境下胃癌的生长情况了解甚少,本研究通过观察缺氧对胃癌细胞生长的影响,探讨缺氧环境中胃癌细胞对化疗药物5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)的反应。方法:设置缺氧(1%氧气)及常规空气环境,将胃癌细胞MKN45分别置于上述环境中培养,同时设立化疗药物5-FU干预组。采用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)法、JC-1线粒体膜电位法及Annexin-V/PI双染法检测不同氧含量环境中、不同干预组胃癌细胞的增殖及凋亡情况,流式细胞术检测细胞周期的改变,在电镜下观察细胞线粒体变化情况。结果:不加5-FU干预的情况下,缺氧组与常氧组相比,JC-1线粒体膜电位法、Annexin-V/PI双染法及CCK-8检测结果显示胃癌细胞早期凋亡、晚期凋亡率更高,细胞死亡率更高;流式细胞术检测结果显示细胞周期被阻止在G0/G1期,不进展;电镜结果显示线粒体破坏更严重。而在加入5-FU干预的情况下,缺氧组与常氧组相比,凋亡率低,细胞周期更易进展,线粒体破坏更少。结论:缺氧环境促进胃癌细胞凋亡甚至死亡,但是缺氧环境对化疗药物5-FU的起效产生反作用,可能是造成5-FU化疗耐药的因素。

关键词：缺氧胃癌 5-氟尿嘧啶

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探讨活血养阴法调控Bcl-2/Bax通路改善精索静脉曲张大鼠生精功能的作用机制

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北京中医药大学学报 2024年

作者：梁仪春王文梁树麟付瑞杰覃湛耿立果何超拔袁少英广州中医药大学第二临床医学院广东省中医院珠海医院

目的基于Bcl-2/Bax通路探讨活血养阴法改善精索静脉曲张大鼠生精功能的作用机制。方法选取8周龄SD雄性大鼠30只，按随机数字表法分为假手术组、模型组、左卡尼汀组（1g/kg）、活血养阴法低剂量组（5.2g/kg）、活血养阴法中剂量组（10.... 详细信息

目的基于Bcl-2/Bax通路探讨活血养阴法改善精索静脉曲张大鼠生精功能的作用机制。方法选取8周龄SD雄性大鼠30只，按随机数字表法分为假手术组、模型组、左卡尼汀组（1g/kg）、活血养阴法低剂量组（5.2g/kg）、活血养阴法中剂量组（10.4g/kg）及活血养阴法高剂量组（20.8g/kg），每组5只。除假手术组外，其余大鼠均通过经典的Turner法复制精索静脉曲张模型。手术后4周，假手术组及模型组大鼠灌胃生理盐水，各给药组灌胃相应药物，每日1次，连续4周。灌胃结束后，使用计算机辅助精子分析仪检测精子质量，采用HE染色观察睾丸组织病理学形态并通过Johnsen评分评价睾丸生精功能，TUNEL法检测睾丸细胞凋亡情况，RT-qPCR检测睾丸组织Bcl-2及Bax mRNA表达，免疫组织化学法检测细胞色素C蛋白表达。结果与假手术组比较，模型组大鼠的精子总数、精子活动率及（a+b）级精子率均降低（P＜0.05）；睾丸组织中生精小管排列紊乱，有明显空泡样改变，Johnsen评分下降（P＜0.05）；睾丸细胞凋亡率增加（P＜0.05）；睾丸组织Bax mRNA表达上升（P＜0.05）；细胞色素C的阳性表达增加（P＜0.05）。与模型组比较，左卡尼汀组与各剂量活血养阴法组大鼠的精子总数、精子活动率及（a+b）级精子率均上升（P＜0.05）；大鼠睾丸病理学结构有不同程度的改善，活血养阴法中剂量组Johnsen评分增加（P＜0.05）；左卡尼汀组与各剂量活血养阴法组睾丸细胞凋亡率均下降（P＜0.05）；低剂量与高剂量活血养阴法组Bcl-2 mRNA表达上升（P＜0.05），左卡尼汀组与中剂量活血养阴法组BaxmRNA表达下降（P＜0.05）；中剂量活血养阴法组细胞色素C阳性表达下降（P＜0.05）。结论活血养阴法可提高精索静脉曲张大鼠的精子质量，修复损伤的睾丸组织结构，改善生精功能，其作用机制可能与激活Bcl-2/Bax凋亡通路、抑制细胞凋亡有关。

关键词：活血养阴法精索静脉曲张生精功能细胞凋亡 Bcl-2/Bax通路大鼠