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mA甲基转移酶METTL3通过调控GLUT4-mTORC1轴促进食管鳞癌细胞的糖酵解及增殖

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中国肿瘤生物治疗杂志 2022年

作者：周锡钟晓武高川力李青容程吉兵马强郭晓兰川北医学院检验系川北医学院附属医院检验科川北医学院转化医学研究中心

目的：探讨mA甲基转移酶METTL3在食管鳞癌中的表达水平及其对食管鳞癌细胞增殖能力的影响和潜在的分子机制。方法：基于TCGA数据库分析METTL3在食管鳞癌细胞中的表达及可能的富集通路。采用免疫组化验证食管鳞癌组织中METTL3的表达。采... 详细信息

目的：探讨mA甲基转移酶METTL3在食管鳞癌中的表达水平及其对食管鳞癌细胞增殖能力的影响和潜在的分子机制。方法：基于TCGA数据库分析METTL3在食管鳞癌细胞中的表达及可能的富集通路。采用免疫组化验证食管鳞癌组织中METTL3的表达。采用CCK-8和平板克隆形成实验检测干扰METTL3后食管鳞癌细胞增殖能力的变化。利用比色法检测干扰METTL3后食管鳞癌细胞总RNA中的mA的表达水平。使用甲基化RNA免疫沉淀定量PCR(Methylated RNA immunoprecipitation-qPCR，MeRIP-qPCR)检测METTL3对GLUT4基因mRNA的mA修饰水平的影响。利用WB和RT-qPCR等技术探索METTL3在食管鳞癌细胞糖酵解中的生物学机制。结果：METTL3在食管鳞癌组织以及细胞系中的表达水平显著升高(均P＜0.001)。干扰METTL3表达后，食管鳞癌细胞的增殖能力明显减弱，细胞内总RNA的mA修饰水平显著降低(均P＜0.001)。此外，干扰METTL3可显著抑制KYSE150和TE-1细胞中GLUT4基因mRNA的mA修饰水平(均P＜0.01)，并通过下调GLUT4的表达抑制葡萄糖的摄取以及乳酸的释放(均P＜0.01)，最终下调mTORC1通路活性并抑制食管鳞癌细胞的增殖。此外，在干扰METTL3的食管鳞癌细胞中，联合运用mTORC1通路抑制剂具有协同的抗癌作用。结论：METTL3介导的mA修饰通过调控GLUT4-mTORC1信号轴促进食管鳞癌细胞的糖酵解及增殖。

关键词：食管鳞状细胞癌 METTL3 糖酵解 GLUT4 mTORC1通路

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信号素4A对SLE患者T细胞功能的影响

中国免疫学杂志 2023年第4期39卷 822-826,832页

作者：谭雪玲何仁栋向江圆邢艳(指导) 川北医学院医学检验系南充637000 川北医学院附属医院检验科南充637000 川北医学院转化医学研究中心南充637000

目的:分析信号素4A(Sema4A)在系统性红斑狼疮(SLE)患者的表达水平,探讨Sema4A对SLE患者T细胞的影响。方法:(1)收集37例SLE患者为实验组,28例健康体检者为对照组。采用ELISA检测血浆中可溶性Sema4A的浓度,流式细胞术(FCM)分析各组外周血... 详细信息

目的:分析信号素4A(Sema4A)在系统性红斑狼疮(SLE)患者的表达水平,探讨Sema4A对SLE患者T细胞的影响。方法:(1)收集37例SLE患者为实验组,28例健康体检者为对照组。采用ELISA检测血浆中可溶性Sema4A的浓度,流式细胞术(FCM)分析各组外周血细胞中CD3+CD8-IFN-γ+(Th1)、CD3+CD8-IL-4+(Th2)、CD3+CD8-IL-17+(Th17)细胞在Th细胞中的占比;(2)采用密度梯度离心法和免疫磁珠法分选SLE患者及健康体检者外周血CD4+T细胞后加入抗人CD3和抗人CD28,并在有或无人重组Sema4A蛋白/抗Sema4A抗体的条件下培养5 d后,采用FCM检测CD4+T细胞膜上CD25的表达;在上述相同培养体系中加入荧光染料CFSE,同样培养5 d,采用FCM检测CD4+T细胞CFSE的平均荧光强度;ELISA检测培养上清中Th细胞亚型相关细胞因子的表达。结果:(1)SLE患者血浆中可溶性Sema4A的浓度显著高于正常对照组,Th2、Th17占比升高,且Th1/Th2降低。可溶性Sema4A水平与Th2、Th17比例呈正相关;(2)Sema4A能诱导CD4+T细胞活化和增殖,促进细胞因子IL-4、IL-17分泌,抑制IFN-γ分泌。结论:SLE患者高表达的Sema4A可能通过影响T细胞的活化、增殖和分化参与机体免疫调节,从而参与SLE的发病过程。

关键词：系统性红斑狼疮信号素4A CD4+T细胞 Th1 Th2 Th17

miR-18a和miR-21在食管癌中的表达及其对食管癌的诊断价值

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中华肿瘤杂志 2019年第2期41卷 107-111页

作者：姚丽华汪光蓉蔡燕马强王东生徐磊郭晓兰川北医学院附属医院检验科川北医学院医学检验系南充637000 川北医学院转化医学研究中心南充637000

目的探讨miR-18a和miR-21在食管癌中的表达及其对食管癌的诊断价值。方法采用逆转录聚合酶链反应检测miR-18a和miR-21在食管癌细胞系ECA109、KYSE150、TE1和正常食管上皮细胞HET-1A,45例食管癌组织、癌旁组织,45例食管癌患者和50名正常... 详细信息

目的探讨miR-18a和miR-21在食管癌中的表达及其对食管癌的诊断价值。方法采用逆转录聚合酶链反应检测miR-18a和miR-21在食管癌细胞系ECA109、KYSE150、TE1和正常食管上皮细胞HET-1A,45例食管癌组织、癌旁组织,45例食管癌患者和50名正常对照者外周血血清中的表达。采用化学发光免疫分析仪检测食管癌患者和健康对照者外周血血清中食管癌传统肿瘤标志物癌胚抗原(CEA)、鳞癌抗原(SCC)、Cyrfa21-1和组织多肽抗原(TPA)的浓度。评价miR-18a和miR-21与血清中传统肿瘤标志物对食管癌的诊断效能。结果食管癌细胞ECA109、KYSE150和TE1中miR-18a和miR-21的表达水平分别为1.64±0.17、1.62±0.19、1.46±0.12和20.52±1.48、6.73±0.73、1.43±0.19,高于正常食管上皮细胞(均P<0.01)。食管癌组织中miR-18a和miR-21的表达分别为32.48±28.62和8.67±11.98,显著高于癌旁组织(均P<0.001)。食管癌患者外周血血清中miR-18a和miR-21表达水平分别为12.66±11.92和9.15±8.14,显著高于正常对照组(均P<0.001)。受试者工作特征(ROC)曲线分析显示,miR-18a和miR-21诊断食管癌的曲线下面积分别为0.948和0.9135。与传统食管肿瘤标志物比较,血清miR-18a和miR-21对食管癌诊断的灵敏度更高,而联合传统食管肿瘤标志物可进一步提高食管癌诊断的灵敏度和准确度,分别为97.8%和68.4%。结论miR-18a和miR-21对食管癌具有诊断价值,可能成为潜在的新型生物标志物。

关键词：食管肿瘤 miR-18a miR-21 :肿瘤标志物诊断

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端粒酶逆转录酶组分与肝癌研究

中华肝脏病杂志 2016年第7期24卷 555-560页

作者：蔡嘉镜郭晓兰川北医学院医学检验系川北医学院转化医学研究中心川北医学院附属医院检验科南充637000

端粒是真核细胞染色体末端的DNA串联重复序列，在维持染色体的稳定性和完整性方面起重要作用。随着细胞的增殖，端粒逐渐缩短，当缩短至一定程度，细胞便出现衰老和凋亡，但少数细胞能通过端粒长度维持机制（激活端粒酶或其他机制）使... 详细信息

端粒是真核细胞染色体末端的DNA串联重复序列，在维持染色体的稳定性和完整性方面起重要作用。随着细胞的增殖，端粒逐渐缩短，当缩短至一定程度，细胞便出现衰老和凋亡，但少数细胞能通过端粒长度维持机制（激活端粒酶或其他机制）使端粒延长并恢复功能，部分细胞出现永生化，因此端粒及端粒酶被认为与肿瘤的发生、发展有密切联系。已证实端粒酶激活是原发性肝癌发生的早期事件，尤其是端粒酶的重要组分TERT具有重要作用。现就近年端粒酶功能及其调节机制，以及TERT在原发性肝癌，主要是肝细胞癌（简称为肝癌）的发生、发展与治疗中的作用研究进展进行综述，以期为干预肝癌的发生与靶向治疗提供分子遗传学基础。

关键词：端粒肝肿瘤端粒酶

甲基转移酶样因子3通过调控GLUT4-mTORC1轴影响食管鳞状细胞癌细胞的糖酵解及增殖

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中国肿瘤生物治疗杂志 2022年第12期29卷 1076-1086页

作者：周锡钟晓武高川力李青容程吉兵马强郭晓兰川北医学院检验系四川南充637000 川北医学院检验科四川南充637000 川北医学院转化医学研究中心四川南充637000

目的:探讨甲基转移酶样因子3(METTL3)在食管鳞状细胞癌(ESCC)组织和细胞中的表达水平及其对ESCC细胞糖酵解和增殖能力的影响和潜在的分子机制。方法:基于TCGA数据库分析METTL3在ESCC细胞中的表达及可能的富集通路。收集2021年1月至2021... 详细信息

目的:探讨甲基转移酶样因子3(METTL3)在食管鳞状细胞癌(ESCC)组织和细胞中的表达水平及其对ESCC细胞糖酵解和增殖能力的影响和潜在的分子机制。方法:基于TCGA数据库分析METTL3在ESCC细胞中的表达及可能的富集通路。收集2021年1月至2021年6月间在北川医学院附属医院外科手术切除的34例ESCC组织及相应癌旁组织,采用免疫组化法验证ESCC组织中METTL3的表达。采用CCK-8法和平板克隆形成实验检测干扰METTL3后ESCC细胞增殖能力的变化,利用比色法检测干扰METTL3后ESCC细胞总RNA中m6A的表达水平,采用甲基化RNA免疫沉淀定量PCR(MeRIP-qPCR)检测METTL3对葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)基因mRNA的m6A修饰水平的影响,采用WB和qPCR等技术探索METTL3参与ESCC细胞糖酵解的生物学机制。结果:METTL3在ESCC组织以及细胞中均呈高表达(均P<0.001)。干扰METTL3表达后,ESCC细胞的增殖能力明显减弱、细胞内总RNA的m6A修饰水平显著降低(均P<0.001)。此外,干扰METTL3可显著抑制KYSE150和TE-1细胞中GLUT4基因mRNA的m6A修饰水平(均P<0.01),并通过下调GLUT4的表达抑制葡萄糖的摄取以及乳酸的释放(均P<0.01),最终下调mTORC1通路活性并抑制ESCC细胞的增殖;在干扰METTL3的ESCC细胞同时联合运用mTORC1通路抑制剂显示有协同的抗癌作用。结论:METTL3介导的m6A修饰通过调控GLUT4-mTORC1信号轴影响ESCC细胞的糖酵解及增殖。

关键词：食管鳞状细胞癌甲基转移酶样因子3 葡萄糖转运蛋白4 糖酵解 mTORC1通路

GICA和CLIA联合检测SARS-CoV-2特异性抗体的检测策略研究

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病毒学报 2022年第1期38卷 21-27页

作者：卢小岚汪光蓉牟代勇杜琴郭晓兰王强川北医学院附属医院检验科南充637000 川北医学院医学检验系南充637000 川北医学院转化医学研究中心南充637000 南充市中心医院检验科南充637000

评价胶体金免疫层析法(GICA)与化学发光法(CLIA)联合检测对降低新型冠状病毒(SARS-CoV-2)特异性抗体假阳性的效果。收集2020年1月22日至2020年3月5日就诊于川北医学院附属医院及南充市中心医院的19例SARS-CoV-2确诊患者不同时段的血清33... 详细信息

评价胶体金免疫层析法(GICA)与化学发光法(CLIA)联合检测对降低新型冠状病毒(SARS-CoV-2)特异性抗体假阳性的效果。收集2020年1月22日至2020年3月5日就诊于川北医学院附属医院及南充市中心医院的19例SARS-CoV-2确诊患者不同时段的血清33份,55例非SARS-CoV-2、其他病原体感染及自身免疫性疾病患者的血清55份,采用GICA和CLIA分别对血清SARS-CoV-2 IgM、IgG进行检测,并对结果进行分析。GCIA检测SARS-CoV-2 IgM、IgG的敏感性分别为100.0%、94.74%,与CLIA(92.86%和100.0%)比较没有差异(P>0.05);GCIA检测SARS-CoV-2 IgM、IgG的特异性分别为70.91%、74.55%,明显低于CLIA的特异性(98.18%和89.09%)(P<0.01);两种方法检测SARS-CoV-2 IgM、IgG结果具有一致性(P<0.001),Kappa值分别为0.434,0.406;ROC曲线分析发现,GCIA检测SARS-CoV-2 IgM、IgG的AUC分别为0.855、0.846,明显低于CLIA(0.955和0.945)(P<0.05)。两种方法联合检测SARS-CoV-2 IgM、IgG的敏感性分别为92.86%、94.74%,特异性分别为100.0%、100.0%;ROC曲线分析显示,联合检测SARS-CoV-2 IgM、IgG的AUC分别为0.964、0.974,高于两种方法的单独检测。GICA和CLIA联合检测能有效提高SARS-CoV-2 IgM和IgG的检测特异性,值得临床推广应用。

关键词：新型冠状病毒(SARS-CoV-2) 胶体金免疫层析法化学发光法免疫球蛋白M 免疫球蛋白G

临床微生物学检验技术课程思政设计与实践路径

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现代职业教育 2023年第35期 49-52页

作者：蒋瑶雷燕谢宁祝静郭晓兰邢艳川北医学院医学检验系川北医学院附属医院检验科川北医学院转化医学研究中心

为进一步完善临床微生物学检验技术专业课程中的思政教育，提出了整体性思政教育教学设计。围绕设定的育人目标，通过深入挖掘专业课程中的思政元素，构建思政案例库，从课前、课中和课后三个阶段将思政教育贯穿到理论及实验教学的全过... 详细信息

为进一步完善临床微生物学检验技术专业课程中的思政教育，提出了整体性思政教育教学设计。围绕设定的育人目标，通过深入挖掘专业课程中的思政元素，构建思政案例库，从课前、课中和课后三个阶段将思政教育贯穿到理论及实验教学的全过程。探索了微生物学检验专业教育与思政工作有机融合的路径及方法，并对学生进行问卷调查，该教学模式的总体满意度大于90%，为检验医学专业课程思政教育改革和医学教育新模式转变提供了新的思路。

关键词：临床微生物学检验课程思政教学设计教学实践

碲钨酸盐磁性纳米复合材料选择性分离鸡蛋清中卵清蛋白

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分析化学 2019年第9期47卷 1302-1308页

作者：车峥岳诗雨吴南徐嘉蔚陈晴沈阳医学院转化医学研究中心

将碲钨酸盐(Na;[TeW;O;]·22H;0, TeW)通过静电作用负载到支状聚乙烯亚胺（PEI）修饰的磁性纳米粒子（MNP）表面,得到新型的基于多金属氧酸盐的复合材料（TeW@MNP）,采用红外光谱、能谱、扫描电镜等对其进行表征。蛋白质吸附研究结果表... 详细信息

将碲钨酸盐(Na;[TeW;O;]·22H;0, TeW)通过静电作用负载到支状聚乙烯亚胺（PEI）修饰的磁性纳米粒子（MNP）表面,得到新型的基于多金属氧酸盐的复合材料（TeW@MNP）,采用红外光谱、能谱、扫描电镜等对其进行表征。蛋白质吸附研究结果表明,该磁性纳米复合材料对卵清蛋白具有选择性吸附作用。考察了吸附时间、离子强度、洗脱剂种类和用量等对分离纯化效率的影响,在pH 4.0时,0.5 mg TeW@MNP对200μL 100μg/mL卵清蛋白的吸附效率为91.6%,最大理论吸附容量为373.4 mg/g,以0.1%SDS为洗脱剂时,对卵清蛋白的洗脱效率为98.1%。SDS-PAGE实验表明,采用此复合材料可成功地从卵清样品中分离出纯度较高的卵清蛋白。本研究以TeW@MNP复合物为固相萃取剂,建立了从鸡蛋清中分离纯化卵清蛋白的方法,拓宽了多金属氧酸盐的应用范围。

关键词：碲钨酸盐磁性纳米材料卵清蛋白固相萃取

甲基化转移酶3对食管癌细胞增殖、迁移及谷氨酰胺代谢的影响

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中国生物制品学杂志 2024年第5期37卷 544-553,558页

作者：高川力周锡邹江杨密渊文继林袁梓纯王琴徐磊马强钟晓武郭晓兰川北医学院附属医院检验科四川南充637000 川北医学院检验医学院四川南充637007 川北医学院转化医学研究中心四川南充637007

目的探讨甲基化转移酶3(methyltransferase like-3,METTL3)在食管癌中的表达及其对细胞增殖、凋亡、迁移和谷氨酰胺代谢的影响。方法采用qRT-PCR、Western blot和免疫组化法检测食管癌组织及其癌旁组织中METTL3基因的表达;CCK8试验、克... 详细信息

目的探讨甲基化转移酶3(methyltransferase like-3,METTL3)在食管癌中的表达及其对细胞增殖、凋亡、迁移和谷氨酰胺代谢的影响。方法采用qRT-PCR、Western blot和免疫组化法检测食管癌组织及其癌旁组织中METTL3基因的表达;CCK8试验、克隆形成试验、划痕试验和Transwell试验检测METTL3抑制剂STM2457对人食管鳞状癌细胞系Eca109和KYSE150增殖及迁移的影响;流式细胞术、TUNEL染色试验检测其对细胞周期及凋亡的影响;TMT/iTRAQ定量蛋白质组法分析其对下游相关信号通路的影响;谷氨酰胺和谷氨酸检测试验及Western blot法分析其对食管癌细胞谷氨酰胺代谢的影响。结果METTL3在食管癌组织中的表达显著上调(t=5.024,P<0.0001)。STM2457抑制Eca109和KYSE150细胞的METTL3表达后,显著抑制了细胞的增殖及迁移能力,细胞周期在G0/G1期发生阻滞,细胞凋亡率增加,同时降低了谷氨酰胺摄取量和谷氨酸生成量,并下调了谷氨酰胺代谢相关蛋白丙氨酸-丝氨酸-半胱氨酸转运载体2(alanine-serine-cysteine transporter 2,ASCT2)、谷氨酰胺酶(glutaminase,GLS)和谷氨酸脱氢酶1(glutamate dehydrogenase 1,GLUD1)的表达。METTL3敲低后,Eca109和KYSE150细胞中谷氨酰胺摄取量和谷氨酸生成量显著降低(谷氨酰胺摄取量:t为24.52~41.01,P均<0.01;谷氨酸生成量:t为8.431~11.83,P均<0.01);METTL3过表达后,Eca109和KYSE150细胞中谷氨酰胺摄取量和谷氨酸生成量显著升高(谷氨酰胺摄取量:t分别为5.803和56.13,P均<0.01;谷氨酸生成量:t分别为11.06和4.695;P均<0.01)。METTL3敲低后,Eca109和KYSE150细胞中谷氨酰胺代谢相关蛋白ASCT2、GLS和GLUD1表达水平显著下调,而METTL3过表达后,ASCT2、GLS和GLUD1蛋白表达水平显著上调。结论METTL3在食管癌中高表达,并可能通过介导食管癌细胞谷氨酰胺代谢促进细胞增殖。

关键词：食管癌甲基化转移酶3 STM2457 谷氨酰胺代谢