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电针对心肌肥厚小鼠心肌组织瞬时受体电位通道的影响

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针刺研究 2024年第6期49卷 558-565页

作者：谢玉华邢馨玉钟文吴生兵周美启崔帅安徽中医药大学研究生院合肥230012 经脉脏腑相关安徽省重点实验室合肥230038 安徽中医药大学针灸推拿学院合肥230012

目的:观察电针“内关”对心肌肥厚小鼠心功能、心脏形态和心肌组织中瞬时受体电位通道(TRPCs)蛋白表达的影响,探讨电针治疗心肌肥厚的作用机制。方法:C57BL/6小鼠随机分为空白组、模型组和电针组,每组15只。皮下注射盐酸异丙肾上腺素(15... 详细信息

目的:观察电针“内关”对心肌肥厚小鼠心功能、心脏形态和心肌组织中瞬时受体电位通道(TRPCs)蛋白表达的影响,探讨电针治疗心肌肥厚的作用机制。方法:C57BL/6小鼠随机分为空白组、模型组和电针组,每组15只。皮下注射盐酸异丙肾上腺素(15 mg·kg^(-1)·d^(-1))制备心肌肥厚模型。电针组电针双侧“内关”,每次20 min,每日1次,连续14 d。测量小鼠体质量、胫骨长度和心脏质量;超声心动图测量小鼠心室射血分数(EF)、短轴缩短指数(FS)、收缩末期左心室容积(LVEV)、收缩末期左心室内径(LVID)和收缩末期左心室后壁厚度(LVPW)以评价心功能;WGA染色法检测小鼠心肌相对细胞个数和相对细胞平均表面积;HE染色法观察心肌细胞形态变化;qPCR及Western blot法检测心肌组织中TRPC1、TRPC3、TRPC4、TRPC6的mRNA和蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组小鼠心体比和心胫比均增加(P<0.05,P<0.01),EF、FS、LVPW降低(P<0.01),LVEV、LVID升高(P<0.01),心肌相对细胞个数减少(P<0.05),心肌相对细胞表面积增加(P<0.01),左心室面积比值升高(P<0.05),左心室后壁比值降低(P<0.05),心肌细胞排列紊乱,心肌间质炎性细胞浸润明显,心肌组织TRPC1、TRPC3、TRPC4、TRPC6 mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.01)。与模型组相比,电针组小鼠心体比和心胫比均减小(P<0.01),EF、FS、LVPW升高(P<0.01),LVEV、LVID降低(P<0.01),心肌相对细胞个数增加(P<0.05),相对细胞表面积减小(P<0.05),左心室面积比值降低(P<0.05),左心室后壁比值升高(P<0.05),心肌病理损伤程度减轻,心肌组织TRPC1、TRPC3、TRPC4、TRPC6 mRNA和蛋白表达降低(P<0.01,P<0.05)。结论:电针“内关”能够改善心肌肥厚小鼠的心脏形态和功能,其机制可能与下调TRPCs有关。

关键词：心肌肥厚电针瞬时受体电位通道心脏功能

基于HSPA5/GPX4信号通路探讨针刀干预膝关节骨关节炎兔软骨细胞铁死亡的作用机制

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中国针灸 2024年第5期44卷 555-564页

作者：孟德鸿卢曼吴三兵栾国瑞丁双赵汉卿张芬杨永晖安徽中医药大学第一临床医学院合肥230031 安徽中医药大学第二临床医学院骨二科合肥230061 安徽中医药大学研究生院

目的:观察针刀疗法对膝关节骨关节炎(KOA)兔膝关节软骨细胞热休克蛋白A家族成员5(HSPA5)/谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)信号通路的影响,探讨针刀干预KOA软骨细胞铁死亡的作用机制。方法:将27只新西兰兔随机分为正常组、模型组和针刀组,每组... 详细信息

目的:观察针刀疗法对膝关节骨关节炎(KOA)兔膝关节软骨细胞热休克蛋白A家族成员5(HSPA5)/谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)信号通路的影响,探讨针刀干预KOA软骨细胞铁死亡的作用机制。方法:将27只新西兰兔随机分为正常组、模型组和针刀组,每组9只。采用改良Videman法连续固定兔左侧后肢6周建立KOA模型。造模后,针刀组给予针刀干预,每周1次,连续3周。运用奎森功能障碍指数(Lequesne MG评分)评估兔膝关节局部症状、体征及功能;HE染色法与番红-固绿染色法分别观察兔软骨细胞与组织形态;透射电镜观察兔软骨细胞线粒体结构;运用铁离子试剂盒检测兔软骨组织铁含量;流式细胞仪检测兔软骨组织线粒体膜电位(Δψm)和活性氧(ROS)水平,并计算线粒体损伤率;实时荧光定量PCR检测兔软骨组织HSPA5、GPX4、Ⅱ型胶原α1链(COL2A1)、基质金属蛋白酶(MMP)3、MMP13 mRNA表达;Western blot法检测兔软骨组织HSPA5、GPX4、Ⅱ型胶原蛋白(COL-Ⅱ)、MMP3、MMP13蛋白表达;免疫荧光法检测兔软骨组织HSPA5、GPX4平均荧光强度。结果:干预前,与正常组比较,模型组和针刀组兔膝关节Lequesne MG评分升高(P<0.01);干预后,与模型组比较,针刀组兔膝关节Lequesne MG评分降低(P<0.01)。与正常组比较,模型组兔膝关节软骨细胞数量减少且排列紊乱,软骨结构层次不清,潮线紊乱、模糊不清,线粒体皱缩、线粒体嵴减少甚至消失;与模型组比较,针刀组软骨细胞数量较多,软骨结构层次清楚,潮线恢复,线粒体数量较多,结构正常,有较多的嵴。与正常组比较,模型组软骨组织铁含量增加(P<0.01),细胞呈低Δψm,线粒体损伤率增高(P<0.01),ROS平均荧光强度升高(P<0.01),软骨组织HSPA5、GPX4、COL2A1 mRNA及相应蛋白表达降低(P<0.01),软骨组织MMP3、MMP13 mRNA及蛋白表达升高(P<0.01),软骨组织HSPA5、GPX4平均荧光强度降低(P<0.01);与模型组比较,针刀组软骨组织铁含量减少(P<0.01),软骨细胞Δψm升高,线粒体损伤率降低(P<0.01),ROS平均荧光强度降低(P<0.01),软骨组织HSPA5、GPX4、COL2A1 mRNA及相应蛋白表达升高(P<0.01),软骨组织MMP3、MMP13 mRNA和蛋白表达降低(P<0.01),软骨组织HSPA5、GPX4平均荧光强度升高(P<0.01)。结论:针刀干预能够缓解KOA模型兔膝关节软骨损伤,其机制可能与调节HSPA5/GPX4信号通路维持关节软骨铁稳态,从而抑制软骨细胞铁死亡,缓解细胞外基质(ECM)降解有关。

关键词：膝关节骨关节炎针刀软骨细胞铁死亡细胞外基质 HSPA5/GPX4信号通路

人参皂苷Rg_(1)通过IRE1-JNK-CHOP通路抑制自噬改善OGD/R诱导的PC12细胞损伤

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中国中药杂志 2024年第10期49卷 2745-2753页

作者：李雨晴魏梁丽袁雨琪杨子腾汪宁蔡标汪光云安徽中医药大学中西医结合学院安徽合肥230012 安徽中医药大学药学院安徽合肥230012

探讨人参皂苷Rg_(1)(ginsenoside Rg_(1),GRg_(1))对氧糖剥夺/复氧(oxygen and glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)损伤大鼠嗜铬细胞瘤(rat adrenal pheochromocytoma,PC12)细胞的保护作用及其作用机制是否与调控肌醇需求酶1(inositol-requiring enzyme 1,IRE1)-c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)-C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)信号通路有关。在PC12细胞中建立OGD/R模型,将PC12细胞随机分组为对照组、模型组、OGD/R+GRg_(1)(0.1、1、10μmol·L^(-1))组,OGD/R+GRg_(1)+雷帕霉素(rapamycin,自噬激动剂)组、OGD/R+GRg_(1)+3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA,自噬抑制剂)组、OGD/R+GRg_(1)+衣霉素(tunicamycin,内质网应激激动剂)组、OGD/R+GRg_(1)+4-苯基丁酸(4-phenylbutyric acid,4-PBA,内质网应激抑制剂)组、OGD/R+GRg_(1)+3,5-二溴水杨醛(3,5-dibromosalicylaldehyde,DBSA,IRE1抑制剂)组。除对照组外,其他组都进行OGD/R处理,即氧糖剥夺6 h再复氧6 h。MTT法检测细胞活力,Hoechst 33342染色检测细胞凋亡情况,MDC法检测细胞自噬体的荧光强度。Western blot检测自噬相关蛋白Beclin1、LC3-Ⅱ、p62和通路相关蛋白IRE1、p-IRE1、JNK、p-JNK、葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)、CHOP的表达情况。结果显示,与模型组相比,0.1、1、10μmol·L^(-1)GRg_(1)剂量依赖性地提高了PC12细胞的活力,降低了自噬蛋白Beclin1、LC3-Ⅱ和通路相关蛋白p-IRE1、p-JNK、GRP78、CHOP表达,降低了细胞凋亡率和MDC荧光强度,同时也增加了p62蛋白表达。而分别干预自噬和内质网应激后,与OGD/R+GRg_(1)(10μmol·L^(-1))组相比,OGD/R+GRg_(1)+rapamycin组和OGD/R+GRg_(1)+tunicamycin组细胞凋亡率和MDC荧光强度增加,自噬蛋白Beclin1、LC3-Ⅱ和通路相关蛋白p-IRE1、p-JNK、GRP78、CHOP表达增加,细胞相对存活率和p62蛋白表达降低。3-MA、4-PBA和DBSA则发挥了相反作用。综上所述,GRg_(1)可能通过IRE1-JNK-CHOP通路抑制自噬而改善OGD/R诱导PC12细胞的损伤。

关键词：人参皂苷Rg_(1)(GRg_(1)) 氧糖剥夺/复氧(OGD/R) 内质网应激自噬 IRE1-JNK-CHOP

运脾化浊方对Wilson病铜稳态影响及机制

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中国实验方剂学杂志 2024年

作者：陶庄汪美霞康帅王飞周佳锋贾淑培胡雅杨文明安徽中医药大学研究生院安徽中医药大学第一附属医院

目的：观察运脾化浊方对Wilson病(WD)铜稳态影响的临床作用特点，分析验证其作用机制，为临床有效方药的应用提供进一步的证据支持。方法：将2023年01月至2023年12月安徽中医药大学第一附属医院符合入组标准的60例WD患者分为观察组(30例... 详细信息

目的：观察运脾化浊方对Wilson病(WD)铜稳态影响的临床作用特点，分析验证其作用机制，为临床有效方药的应用提供进一步的证据支持。方法：将2023年01月至2023年12月安徽中医药大学第一附属医院符合入组标准的60例WD患者分为观察组(30例)和对照组(30例)，对照组予常规排铜保肝治疗，观察组在常规治疗的基础上加用运脾化浊方，共治疗4个疗程(32 d)。观察治疗前后两组患者铜生化指标(血清游离铜、铜蓝蛋白、铜氧化酶、血清铜、血清铜锌比、24 h尿铜、24 h尿锌、24 h尿铜锌比)、中医证候积分、临床有效率水平。利用网络药理学及分子对接技术，构建“疾病-中药-活性成分-核心靶点”相互作用网络图和PyMOL可视化分析图，分析验证其作用机制。结果：①与本组治疗前比较，治疗后观察组患者中医证候积分明显下降(P中医证候积分下降水平明显低于对照组(P中医证候积分、提高临床有效率，通过作用于多个关键靶点、多条信号通路发挥调节WD铜稳态的作用。

关键词：肝豆状核变性中医药运脾化浊方铜稳态临床疗效作用机制

芡实壳提取物的抗氧化活性及对口腔溃疡模型大鼠的治疗作用

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南方医科大学学报 2024年第4期44卷 787-794页

作者：王琼许凤清邓梦云任梦婷王桐生吴德玲安徽中医药大学药学院安徽合肥230012 安徽中医药大学中西医结合学院安徽合肥230012 安徽中医药大学中药研究与开发安徽省重点实验室安徽合肥230012 安徽中医药大学中药饮片制造新技术安徽省重点实验室安徽合肥230012

目的研究芡实壳对口腔溃疡模型大鼠的防治作用及其潜在作用机制。方法分别以福林酚法、硝酸铝比色法测定芡实壳-萃取物中多酚、黄酮含量;以DPPH·、ABTS^(+)·、·OH和·O_(2)4种自由基清除实验评价体外抗氧化活性;冰醋酸灼伤法建立口... 详细信息

目的研究芡实壳对口腔溃疡模型大鼠的防治作用及其潜在作用机制。方法分别以福林酚法、硝酸铝比色法测定芡实壳-萃取物中多酚、黄酮含量;以DPPH·、ABTS^(+)·、·OH和·O_(2)4种自由基清除实验评价体外抗氧化活性;冰醋酸灼伤法建立口腔溃疡大鼠模型。采用酶联免疫法检测血清中氧化因子水平;HE染色观察溃疡黏膜组织病理变化;Western blot方法检测溃疡黏膜组织中Keap1、Nrf2、Nes-Nrf2和HO-1蛋白表达水平。结果乙酸乙酯萃取物中多酚、黄酮含量为306.74±1.04 mg/g、23.43±0.61 mg/g,其清除DPPH·、ABTS^(+)·自由基的IC50分别是3.42±0.97µg/mL、3.32±0.90µg/mL(P<0.01);乙酸乙酯组能明显改善模型动物口腔黏膜损伤,提高血清中CAT水平、降低MDA水平(P<0.01),显著增加血清中NEs-Nrf2(P<0.01)以及HO-1(P<0.05)蛋白表达量、降低Keap1(P<0.01)蛋白表达量显著。结论芡实壳提取物对口腔溃疡有一定治疗作用,其作用机制可能是通过激活Keap1/Nrf2/HO-1信号通路。

关键词：芡实壳抗氧化活性口腔溃疡 Nrf2 HO-1 Keap1

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肝豆汤联合言语训练治疗湿热内蕴型Wilson病构音障碍的临床疗效

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中国实验方剂学杂志 2024年第10期30卷 83-89页

作者：马守亮李悦悦董童雨戎荣杨文明韩辉盛玉琴安徽中医药大学第一附属医院合肥230031 太和县中医院安徽阜阳236600 安徽中医药大学研究生院合肥230012

目的:通过观察肝豆汤(GDD)联合言语训练治疗Wilson病(WD)湿热内蕴型构音障碍患者的临床疗效,评价GDD的有效性,为WD湿热内蕴型构音障碍患者选择合适的治疗方案提供更多临床数据及理论支持。方法:抽取符合条件的WD湿热内蕴型患者且存在构... 详细信息

目的:通过观察肝豆汤(GDD)联合言语训练治疗Wilson病(WD)湿热内蕴型构音障碍患者的临床疗效,评价GDD的有效性,为WD湿热内蕴型构音障碍患者选择合适的治疗方案提供更多临床数据及理论支持。方法:抽取符合条件的WD湿热内蕴型患者且存在构音障碍症状者60例,依照随机分组法将其分为对照组和观察组,每组30例。对照组为言语训练+二巯基丙磺酸钠(DMPS),观察组在对照组的基础上联合肝豆汤治疗,8 d为1个疗程,共治疗4个疗程。比较两组治疗前后临床总有效率(Goldstein临床分级)、中国康复研究中心构音障碍分级评定评分、中医证候积分、24 h尿铜含量、改良Frenchay构音障碍评定量表评分。结果:治疗后,观察组患者总有效率为90.0%(27/30),对照组患者总有效率为70.0%(21/30),观察组患者总有效率明显高于对照组(Z=-1.986,P研究中心构音障碍分级评定、24 h尿铜均明显升高(P中医证候积分显著降低(P研究中心构音障碍分级、24 h尿铜含量均显著升高(P研究期间患者DPMS排铜治疗及口服GDD过程中均未出现发热、皮疹、口腔及眼睑黏膜红肿、剥脱性皮炎、呕吐腹泻或过敏性休克等严重不良反应,无病例脱落情况。结论:GDD联合言语训练治疗可以使湿热内蕴型WD构音障碍患者症状改善,疗效提高,在一定程度上提升患者的生活水平,可广泛运用于临床。

关键词：肝豆汤言语训练湿热内蕴型 Wilson病构音障碍

基于Mas/PKA/CREB通路探讨颈椎横突尖针刺法治疗后循环缺血性眩晕模型大鼠的作用机制

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北京中医药大学学报 2024年第2期47卷 288-296页

作者：欧小燕柳刚杨丽芳文林月汪生志李娜杨骏张闻东安徽中医药大学研究生院合肥230031 安徽中医药大学第二附属医院安徽中医药大学第一附属医院

目的基于Mas原癌基因(Mas)/蛋白激酶A(PKA)/环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)通路探讨颈椎横突尖针刺法对后循环缺血性眩晕(PCIV)模型大鼠的作用机制。方法将32只雄性SD大鼠按照随机数字表法分为假手术组、模型组、尼莫地平组、电针组,... 详细信息

目的基于Mas原癌基因(Mas)/蛋白激酶A(PKA)/环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)通路探讨颈椎横突尖针刺法对后循环缺血性眩晕(PCIV)模型大鼠的作用机制。方法将32只雄性SD大鼠按照随机数字表法分为假手术组、模型组、尼莫地平组、电针组,每组各8只。除假手术组外,其余各组大鼠均结扎右侧颈总动脉(CCA)和锁骨下动脉(SCA)建立PCIV模型,假手术组仅剥离右侧CCA和SCA。尼莫地平组大鼠灌胃尼莫地平混悬液(12 mg/kg);电针组大鼠于第2颈椎(C2)、第4颈椎(C4)、第6颈椎(C6)横突尖针刺,于双侧C2、C6进行电针治疗,20 min/次;假手术组和模型组不予任何干预措施,连续14 d。观察各组大鼠右侧前庭神经核脑血流量、脑血流量下降率及跳台躲避时间,采用TUNEL染色法观察右侧脑干前庭神经核细胞凋亡情况,蛋白质印迹法检测右侧脑干前庭神经核Mas、蛋白激酶A⁃C亚基同工型a(PKA⁃Ca)、CREB、磷酸化CREB(p⁃CREB)、B细胞淋巴瘤(Bcl)⁃2和Bcl⁃2相关X蛋白(Bax)的蛋白表达情况。结果干预前,与假手术组对比,其余3组大鼠右侧前庭神经核脑血流量下降、右侧前庭神经核脑血流下降率升高(均P<0.05),提示造模成功。干预后,与假手术组比较,模型组大鼠右侧前庭神经核脑血流量降低、右侧前庭神经核脑血流下降率升高、右侧脑干前庭神经核细胞凋亡率及Bax蛋白表达水平升高,Bcl⁃2、Mas、PKA⁃Ca、p⁃CREB/CREB蛋白表达水平降低(均P<0.05);与模型组比较,电针组和尼莫地平组大鼠右侧前庭神经核脑血流量升高、右侧前庭神经核脑血流下降率降低、跳台躲避时间缩短、右侧脑干前庭神经核细胞凋亡率及Bax蛋白表达水平降低,Bcl⁃2、Mas、PKA⁃Ca、p⁃CREB/CREB蛋白表达水平升高(均P<0.05);与尼莫地平组比较,电针组大鼠右侧前庭神经核脑血流量升高、右侧前庭神经核脑血流下降率降低、跳台躲避时间缩短、右侧脑干前庭神经核细胞凋亡率及Bax蛋白表达水平降低,Bcl⁃2、Mas、PKA⁃Ca、p⁃CREB/CREB蛋白表达水平升高(均P<0.05)。结论颈椎横突尖针刺法能够有效抑制PCIV大鼠前庭神经核的细胞凋亡,其机制可能与改善前庭神经核脑血流量、激活Mas/PKA/CREB信号通路后调控相关蛋白抑制前庭神经核细胞的凋亡相关。

关键词：颈椎横突尖针刺后循环缺血眩晕细胞凋亡 Mas原癌基因/蛋白激酶A/环磷腺苷效应元件结合蛋白通路大鼠

艾灸“心俞”“肺俞”对慢性心力衰竭大鼠心肌瞬时受体电位香草酸亚型1、降钙素基因相关肽表达的影响

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针刺研究 2024年第6期49卷 551-557页

作者：朱玲高兵宫甜甜刘攀李澜夏冉王茎安徽中医药大学新安医学与中医药现代化研究所合肥230012 安徽中医药大学针灸推拿学院合肥230012 安徽中医药大学中医学院合肥230012 安徽中医药大学新安医学教育部重点实验室合肥230038 经脉脏腑相关安徽省重点实验室合肥230012

目的:观察艾灸“心俞”“肺俞”对慢性心力衰竭(CHF)大鼠心肌组织瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)、降钙素基因相关肽(CGRP)及血清白细胞介素-10(IL-10)的影响,探讨艾灸“心俞”“肺俞”治疗CHF的作用机制。方法:SD大鼠随机分为正常组... 详细信息

目的:观察艾灸“心俞”“肺俞”对慢性心力衰竭(CHF)大鼠心肌组织瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)、降钙素基因相关肽(CGRP)及血清白细胞介素-10(IL-10)的影响,探讨艾灸“心俞”“肺俞”治疗CHF的作用机制。方法:SD大鼠随机分为正常组、模型组、艾灸组、辣椒素组、艾灸+辣椒素组、艾灸+溶媒组,每组10只。采用冠状动脉左前降支结扎致心肌梗死法制备CHF大鼠模型。艾灸组每日艾灸“心俞”“肺俞”30 min;辣椒素组每日穴区涂抹辣椒素;艾灸+辣椒素组、艾灸+溶媒组分别将辣椒素、溶媒于艾灸前涂于穴区,艾灸方法同艾灸组。各组均治疗4周。采用小动物彩色多普勒超声仪检测各组大鼠射血分数(EF)及左室短轴缩短率(FS);HE染色法观察大鼠心肌细胞形态结构;实时荧光定量PCR和Western blot法检测大鼠心肌组织中TRPV1、CGRP、半乳糖凝集素-3(Gal-3)mRNA和蛋白表达水平;ELISA法检测大鼠血清IL-10含量。结果:与正常组比较,模型组大鼠心肌纤维紊乱,炎性细胞浸润明显,EF及FS降低(P<0.01),心肌TRPV1、CGRP mRNA和蛋白表达水平及血清IL-10含量降低(P<0.01),心肌Gal-3 mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.01)。与模型组比较,艾灸组、辣椒素组、艾灸+辣椒素组上述指标均逆转(P<0.01)。与艾灸组、辣椒素组比较,艾灸+辣椒素组效果更佳(P<0.05,P<0.01)。结论:艾灸“心俞”“肺俞”可以改善CHF大鼠心肌损伤,其作用可能与调控TRPV1通路,升高TRPV1、CGRP mRNA和蛋白表达,促进抗炎因子IL-10上调,降低Gal-3 mRNA和蛋白表达水平,从而减轻心肌纤维化有关。

关键词：慢性心力衰竭心肌纤维化艾灸瞬时受体电位香草酸降钙素基因相关肽

基于下丘脑-脊髓-结肠轴探讨艾灸改善腹泻型肠易激综合征大鼠内脏高敏感的作用机制

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针刺研究 2024年第1期49卷 47-56页

作者：廖路敏邹玲李奎武阮静茹王娇娇陈进雨祝姗姗储浩然安徽中医药大学合肥230038 安徽中医药大学第二附属医院合肥230061 安徽省中医药科学院针灸临床研究所合肥230038

目的:观察艾灸干预对腹泻型肠易激综合征(IBS-D)大鼠下丘脑-脊髓-结肠轴的影响,探讨艾灸改善IBS-D大鼠内脏高敏感的作用机制。方法:将36只SD大鼠随机分为正常组、模型组、艾灸组,每组12只。采用母子分离+醋酸刺激+慢性束缚法复制IBS-D... 详细信息

目的:观察艾灸干预对腹泻型肠易激综合征(IBS-D)大鼠下丘脑-脊髓-结肠轴的影响,探讨艾灸改善IBS-D大鼠内脏高敏感的作用机制。方法:将36只SD大鼠随机分为正常组、模型组、艾灸组,每组12只。采用母子分离+醋酸刺激+慢性束缚法复制IBS-D模型。艾灸组大鼠给予艾灸双侧“天枢“”上巨虚”15 min,每日1次,连续7 d。分别于实验第34、45、53天检测各组大鼠体质量、稀便率和腹部回撤反射(AWR)的最小容量阈值;HE染色法检测结肠组织病理学变化;甲苯胺蓝染色法检测结肠黏膜肥大细胞(MC)数量;免疫组织化学染色法检测类胰蛋白酶阳性表达水平;ELISA、Western blot、实时荧光定量PCR和免疫荧光染色法分别检测大鼠下丘脑、脊髓、结肠组织中促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)、P物质(SP)、降钙素基因相关肽(CGRP)的含量、蛋白和mRNA相对表达量、阳性表达。结果:干预结束后与正常组比较,模型组大鼠稀便率升高(P<0.01),体质量和AWR的最小容量阈值降低(P<0.01),结肠组织局部炎性细胞浸润明显,结肠组织中MC数量及类胰蛋白酶阳性表达水平升高(P<0.01),下丘脑、脊髓和结肠组织中CRF、SP、CGRP含量、阳性表达、蛋白和mRNA表达水平升高(P<0.01,P<0.05);与模型组比较,艾灸组大鼠稀便率降低(P<0.01),体质量和AWR的最小容量阈值升高(P<0.01),结肠黏膜下炎性细胞减少,结肠组织中MC数量及类胰蛋白酶阳性表达水平降低(P<0.01),下丘脑、脊髓和结肠组织中CRF、SP、CGRP含量、阳性表达、蛋白及mRNA表达水平降低(P<0.01,P<0.05)。结论:艾灸可改善IBS-D大鼠内脏高敏感,其作用机制可能与艾灸调节下丘脑-脊髓-结肠轴,减少CRF、SP、CGRP释放,降低结肠组织中MC数量有关。

关键词：艾灸腹泻型肠易激综合征促肾上腺皮质激素释放因子 P物质降钙素基因相关肽肥大细胞