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生后不同时间乳鼠心肌细胞的形态结构和功能特征

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解剖学报 2009年第4期40卷 567-572页

作者：谭玉珍王海杰复旦大学上海医学院人体解剖学与组织胚胎学系

目的观察生后不同时间乳鼠心肌细胞的形态结构和功能特征,建立理想的分离和纯化乳鼠心肌细胞技术。方法采用胰蛋白酶消化和机械分离,结合两次差速贴壁法以及使用溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）,从生后1~7d乳鼠心脏分离和纯化心肌细胞。观察... 详细信息

目的观察生后不同时间乳鼠心肌细胞的形态结构和功能特征,建立理想的分离和纯化乳鼠心肌细胞技术。方法采用胰蛋白酶消化和机械分离,结合两次差速贴壁法以及使用溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）,从生后1~7d乳鼠心脏分离和纯化心肌细胞。观察细胞的形态和自发性搏动,并用心肌特异性肌钙蛋白丁（cTnT）免疫细胞化学染色进行鉴定。利用原位透射电镜术观察细胞超微结构,并观察其对肾上腺素和异丙肾上腺素的反应。结果从乳鼠心脏分离的细胞95%以上为心肌细胞,存活率为95%以上。乳鼠心肌细胞包括短柱状或杆状细胞和不规则形细胞。生后1~3d鼠大部分杆状细胞呈现幼稚心肌细胞的超微结构特征。6~7d鼠的杆状细胞具有类似于成熟心肌细胞的超微结构特征,cTnT呈高表达,横纹明显。不规则形细胞含有少量肌丝束,排列不规则。少数体积较小的细胞呈现未分化细胞的超微结构特征。培养72h后80%以上的细胞出现自发性搏动。肾上腺素和异丙肾上腺素刺激后,搏动细胞数目增多,搏动增强。生后6~7d鼠杆状细胞的药物反应较强。结论两类心肌细胞的超微结构特征、自发性搏动和对肾上腺素和异丙肾上腺素的反应不同。生后6~7d鼠心肌细胞较适合于成熟心肌细胞的体外实验研究。本实验建立...

关键词：心肌细胞超微结构自发性搏动细胞培养免疫细胞化学染色原位透射电镜术乳鼠

不同年龄大鼠骨髓源性心肌干细胞生物学特性的比较

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解剖学报 2009年第4期40卷 573-579页

作者：王存谭玉珍王海杰国海东张大勇崔晓军复旦大学上海医学院人体解剖学与组织胚胎学系

目的研究不同年龄大鼠骨髓源性心肌干细胞（MCSCs）形态和衰老相关指标的差异,探讨年龄因素对MCSCs增殖、存活和向心肌细胞分化的影响。方法利用单细胞克隆培养技术从幼年、成年和老年雄性SD大鼠骨髓中筛选MCSCs,透射电镜下观察细胞超... 详细信息

目的研究不同年龄大鼠骨髓源性心肌干细胞（MCSCs）形态和衰老相关指标的差异,探讨年龄因素对MCSCs增殖、存活和向心肌细胞分化的影响。方法利用单细胞克隆培养技术从幼年、成年和老年雄性SD大鼠骨髓中筛选MCSCs,透射电镜下观察细胞超微结构改变。SA-β-半乳糖苷酶染色和活性氧（ROS）染色检测细胞衰老变化,流式细胞术分析细胞周期分布。Annexin V/PI双标流式细胞术和Hochest33342染色检测细胞存活和凋亡。用骨形态发生蛋白-2（BMP-2）诱导不同年龄组MCSCs向心肌细胞分化,通过RT-PCR检测诱导后心肌早期转录因子和心肌特异基因的表达,并通过免疫细胞化学染色检测各年龄组细胞经（BMP-2）诱导后细胞内心肌特异性肌钙蛋T（cTnT）表达的变化。结果老年组MCSCs核质比减小,胞质内可见髓样小体。随着年龄增长,处于增殖期的MCSCs比例下降,β-半乳糖苷酶和ROS阳性细胞数目增多。老年组存活细胞比例较幼年组降低。用BMP-2诱导后4周,幼年组细胞的Nkx2.5、GATA-4和cTnT、Cx-43 mRNA表达明显,成年组和老年组细胞表达低于幼年组,差异有显著性意义。免疫细胞化学染色显示,BM...

关键词：骨髓源性心肌干细胞衰老骨形态发生蛋白-2 细胞分化 β-半乳糖苷酶活性氧流式细胞术

骨髓间充质干细胞的克隆培养及其向心肌细胞的诱导分化

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复旦学报（医学版） 2003年第6期30卷 519-522,526,F002页

作者：孙丽莉谭玉珍王海杰贺其志复旦大学上海医学院人体解剖与组织胚胎学系上海200032

目的建立骨髓间充质干细胞(MMSC)的单细胞克隆,筛选具有心肌特异性分化潜能的c-kit+MMSC克隆,进行体外心肌诱导分化研究。方法取成年雄性SD大鼠骨髓细胞,进行原代培养和单克隆培养。通过c-kit免疫细胞化学标记和RT-PCR检测,筛选出向... 详细信息

目的建立骨髓间充质干细胞(MMSC)的单细胞克隆,筛选具有心肌特异性分化潜能的c-kit+MMSC克隆,进行体外心肌诱导分化研究。方法取成年雄性SD大鼠骨髓细胞,进行原代培养和单克隆培养。通过c-kit免疫细胞化学标记和RT-PCR检测,筛选出向心肌特异性分化的MMSC克隆。然后用5-氮杂胞苷诱导分化,RT-PCR检测诱导前后心肌特异性基因表达的变化。结果骨髓中含有多种MMSC克隆,以不同形态和大小的成纤维细胞样克隆数目最多。较大的成纤维细胞样克隆和扁平多角形细胞克隆均表达c-kit。用5-氮杂胞苷诱导后,表达Nkx2.5的c-kit+MMSC克隆的细胞形态和排列方式发生变化。诱导后2周,细胞变为短柱状,且平行排列;第3周,相邻细胞间形成明显的细胞连接;第4周,由多个细胞相互连接形成肌管样结构,并可观察到肌管的自发性搏动。心室肌特异性肌球蛋白轻链(MLC-2v)mRNA从第3周开始明显表达。结论骨髓中含有多种干细胞克隆。筛选具有心肌特异性分化潜能的MMSC克隆并构建心肌干细胞库,将为临床干细胞移植治疗心肌梗死提供理想的干细胞来源。

关键词：骨髓间充质干细胞细胞培养心肌细胞细胞克隆心肌分化

淋巴管新生及其在相关疾病发生和治疗中的意义

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解剖学报 2007年第2期38卷 250-252,212页

作者：王海杰谭玉珍复旦大学上海医学院人体解剖学与组织胚胎学系上海200032

淋巴管在维持体内微环境衡定、免疫反应和肿瘤淋巴转移等方面起着重要作用,淋巴管新生与胚胎发育、外伤修复、炎症转归和肿瘤转移密切相关。在趋化因子和生长因子的作用下,淋巴管内皮细胞迁移、增殖和构成管腔,形成新的淋巴管。近年来... 详细信息

淋巴管在维持体内微环境衡定、免疫反应和肿瘤淋巴转移等方面起着重要作用,淋巴管新生与胚胎发育、外伤修复、炎症转归和肿瘤转移密切相关。在趋化因子和生长因子的作用下,淋巴管内皮细胞迁移、增殖和构成管腔,形成新的淋巴管。近年来发现淋巴管内皮祖细胞参与淋巴管新生。淋巴管内皮特异表达Prox-1、podoplanin、VEGFR-3和LYVE-1等,这些因子和受体调控淋巴管新生。VEGF-C/VEGFR-3或VEGF-D/VEGFR-3信号途径在淋巴管新生过程中起着重要作用。VEGF-C、VEGF-D和VEGFR-3可作为基因治疗的靶点,有望治疗淋巴管新生障碍性疾病以及抗移植后免疫排斥和抗肿瘤淋巴管转移。本文主要综述了胚胎发育、先天性淋巴水肿、炎性病变和肿瘤等状态下淋巴管新生的变化及其机制、淋巴管内皮祖细胞参与淋巴管新生的过程、淋巴管内皮细胞特异性转录因子和受体对于淋巴管新生的调控作用。

关键词：淋巴管新生淋巴管内皮祖细胞淋巴管内皮细胞淋巴管

PI3-K/Akt信号通路对骨髓源性心肌干细胞分化的调控作用

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解剖学报 2008年第4期39卷 508-513页

作者：国海东张贵焘王海杰王新艳谭玉珍复旦大学上海医学院人体解剖学与组织学胚胎学系上海200032

目的研究磷脂酰肌醇-3激酶/丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（PI3-K/Akt）信号通路在骨形态发生蛋白-2（BMP-2）诱导骨髓源性心肌干细胞（MCSCs）向心肌细胞分化中的调控作用,探讨MCSCs向心肌细胞分化的信号转导机制。方法利用单克隆培养技术从S... 详细信息

目的研究磷脂酰肌醇-3激酶/丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（PI3-K/Akt）信号通路在骨形态发生蛋白-2（BMP-2）诱导骨髓源性心肌干细胞（MCSCs）向心肌细胞分化中的调控作用,探讨MCSCs向心肌细胞分化的信号转导机制。方法利用单克隆培养技术从SD大鼠骨髓中筛选MCSCs,用BMP-2诱导其向心肌细胞定向分化,通过免疫细胞化学标记和Western blotting检测BMP-2诱导后细胞内p-Akt水平的变化,并通过RT-PCR检测心肌早期转录因子和心肌特异基因的表达。结果BMP-2诱导前MCSCs内p-Akt水平较低,诱导后渐增强,20~30min达高峰,1h后逐渐降低。用PI3-K抑制剂Ly294002预处理细胞后,p-Akt水平明显降低。RT-PCR检测显示,诱导前MCSCs的Nkx2.5和GATA-4呈低表达,诱导后2周表达增强,4周表达更加明显。cTnT和Cx-43 mRNA在诱导前未见表达,诱导后2周表达明显,4周表达增强。用Ly294002处理后,细胞的Nkx2.5、GATA-4和cTnT、Cx-43 mRNA的表达显著降低,细胞形态变化不明显。结论BMP-2能诱导MCSCs向心肌细胞分化,PI3-K/Akt信号通路在BMP-2诱导MCSCs向心肌细胞分化中发挥重要的调控作用。

关键词：磷脂酰肌醇-3激酶丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶骨髓源性心肌干细胞骨形态发生蛋白-2 细胞分化免疫组织化学大鼠

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细胞自噬的形态学特征和功能意义

解剖学报 2009年第5期40卷 844-849页

作者：王海杰谭玉珍复旦大学上海医学院人体解剖学与组织学胚胎学系上海200032

目的自噬是细胞受到刺激后吞噬自身的细胞质或细胞器,最终将吞噬物在溶酶体内降解的过程。按吞噬物进入溶酶体的途径,自噬可分为巨自噬、微自噬和分子伴侣介导的自噬3类。在巨自噬,自噬前体包裹细胞质或细胞器后形成自噬体,继而自噬体... 详细信息

目的自噬是细胞受到刺激后吞噬自身的细胞质或细胞器,最终将吞噬物在溶酶体内降解的过程。按吞噬物进入溶酶体的途径,自噬可分为巨自噬、微自噬和分子伴侣介导的自噬3类。在巨自噬,自噬前体包裹细胞质或细胞器后形成自噬体,继而自噬体与溶酶体结合形成自噬溶酶体,自噬体内容物被降解。在微自噬,溶酶体膜凹陷,直接吞噬细胞质、细胞器或细胞核,形成自噬体,然后被溶酶体酶降解。分子伴侣介导的自噬是通过溶酶体膜的受体将细胞质内的蛋白质转运入溶酶体。自噬从酵母至哺乳动物细胞均很保守,对于耐受饥饿和缺血,清除衰老细胞器,清除细菌和异物,维持细胞活性和延长寿命等起着重要作用。自噬活动受自噬基因的调控,自噬基因缺失或功能障碍时可导致某些疾病的发生。深入认识自噬过程以及由此产生的自噬体等结构及其功能有助于探讨自噬对于人体生理和病理作用的机制。本文综述了自噬的形态学特征及其功能意义。

关键词：自噬巨自噬微自噬分子伴侣介导的自噬溶酶体

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心脏淋巴管新生及其与心血管疾病预后的关系

复旦学报（医学版） 2017年第1期44卷 105-109,121页

作者：张海锋谭玉珍王海杰复旦大学上海医学院人体解剖与组织胚胎学系上海200032

心脏淋巴管的生理病理作用一直未引起人们的重视。但近年来,随着血管内皮生长因子受体-3(vascular endothelial growth factor receptor 3,VEGFR-3)、淋巴管内皮细胞透明质酸受体(lymphatic vessel endothelial hyaluronan receptor 1,LYVE-1)、果蝇同源基因转录因子(prospero homeobox protein 1,Prox-1)、肾小球足细胞膜黏蛋白(podoplanin)等淋巴管内皮细胞标志物的发现,心脏淋巴管的研究迅速发展。心脏淋巴管引流淋巴液,其功能异常可引起心肌水肿、动脉硬化、心律失常、间质纤维化等。深入认识心脏淋巴管的生理病理作用,对于治疗心肌梗死、改善心血管功能、预防心脏手术后并发症等有着重要意义。本文综述了心脏淋巴管的发生、分布以及与心血管疾病预后的关系。

关键词：淋巴管心脏淋巴管新生心肌梗死

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心脏淋巴管的分布、功能和病理意义

解剖学报 2020年第3期51卷 469-472页

作者：王海杰谭玉珍复旦大学上海医学院人体解剖学与组织学胚胎学系上海200032

心脏淋巴引流对于维持心肌内微环境稳定起着重要作用。在心肌梗死和心力衰竭等疾病,淋巴管损伤或功能障碍可引起心脏淋巴水肿,从而导致心肌纤维化,加重炎症反应和严重影响心功能。近年来,人们对于心脏淋巴水肿与心脏疾病的相互关系以及... 详细信息

心脏淋巴引流对于维持心肌内微环境稳定起着重要作用。在心肌梗死和心力衰竭等疾病,淋巴管损伤或功能障碍可引起心脏淋巴水肿,从而导致心肌纤维化,加重炎症反应和严重影响心功能。近年来,人们对于心脏淋巴水肿与心脏疾病的相互关系以及心脏淋巴管新生的生理、病理意义的研究非常重视。靶向刺激心脏淋巴管新生可作为缓解心脏淋巴水肿的可靠疗法。然而,刺激心脏淋巴管新生的优化策略有待深入研究。本文主要综述心脏淋巴管的分布和功能特点,讨论心脏淋巴水肿的病理作用,心脏淋巴管新生的机制以及促进心脏淋巴管新生的措施和临床意义。

关键词：心淋巴管淋巴水肿淋巴管新生

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营养缺乏对自由生活阿米巴自噬的影响

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2010年第6期28卷 427-430页

作者：王南宁谭玉珍王海杰复旦大学上海医学院人体解剖学与组织学胚胎学系上海200032

目的研究在营养缺乏的环境中自由生活阿米巴自噬的变化和自噬结构的形态学特征。方法对照组自由生活阿米巴用涂有大肠埃希菌的琼脂培养基培养。实验组将在大肠埃希菌中培养的阿米巴转移至不含大肠埃希菌的琼脂培养基上培养12 h。扫描电... 详细信息

目的研究在营养缺乏的环境中自由生活阿米巴自噬的变化和自噬结构的形态学特征。方法对照组自由生活阿米巴用涂有大肠埃希菌的琼脂培养基培养。实验组将在大肠埃希菌中培养的阿米巴转移至不含大肠埃希菌的琼脂培养基上培养12 h。扫描电镜下观察不提供细菌的培养环境中阿米巴的形态学变化,透射电镜下观察阿米巴自噬的变化及自噬前体、自噬体和自噬溶酶体的结构特点,图像分析仪测量虫体内自噬结构与细胞质的断面面积。单丹磺酰尸胺(MDC)染色法标记自由生活阿米巴虫体内的自噬体,在共聚焦激光扫描显微镜下观察和定量分析。结果对照组中自由生活阿米巴均为滋养体形式;实验组中,滋养体逐渐向包囊转变。对照组阿米巴虫体内充满细菌碎片,只发生轻微的自噬,自噬结构数目较少。与对照组比较,实验组阿米巴自噬水平显著提高,自噬结构数目增多,自噬前体、自噬体和自噬溶酶体与细胞质的断面面积比增大(P<0.05或0.01);部分阿米巴虫体内残存未消化的细菌碎片。结论在缺乏营养的环境中,自由生活阿米巴由滋养体向包囊转变,虫体内自噬功能显著增强。

关键词：营养缺乏自由生活阿米巴滋养体包囊自噬