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火鸡源性成分实时聚合酶链式反应检测方法ISO标准研制

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食品科学 2024年第1期45卷 217-224页

作者：潘良文宁雪王强蔡一村许镇坚张晨上海海关动植物与食品检验检疫技术中心上海200135

选择火鸡染色体Z DNA序列的特异片段作为检测靶序列,建立了实时聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction,real-time PCR)检测方法,该方法种间特异性和种内一致性良好。将靶序列克隆到pUC57质粒中,通过对不同稀释浓度的质粒... 详细信息

选择火鸡染色体Z DNA序列的特异片段作为检测靶序列,建立了实时聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction,real-time PCR)检测方法,该方法种间特异性和种内一致性良好。将靶序列克隆到pUC57质粒中,通过对不同稀释浓度的质粒样品进行real-time PCR测试,该方法绝对检测限为5拷贝/PCR反应。组织国际协同实验对方法进行验证,方法的假阳性率、假阴性率均为0%,绝对检测限为5拷贝/PCR反应。根据对各实验室不同稀释浓度的质粒样品的定性测试结果对方法进行分析,结果表明,实验室间标准偏差为0.30,低于最大允许值1;在检出概率为95%的情况下,方法的绝对检测限为3.2拷贝/PCR反应,低于最大允许值20拷贝/PCR反应。将该方法提交国际标准化组织(International Organization for Standardization,ISO),经过标准不同的制订阶段投票、征求意见,正式上升为ISO标准(ISO/TS20224-8:2022)。

关键词：火鸡实时聚合酶链式反应检测国际标准化组织

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检疫性真菌DNA条形码研究进展

菌物学报 2024年第9期43卷 20-35页

作者：高瑞芳汪莹钟友婷郑铭森刘建冼嘉恒章桂明深圳海关动植物检验检疫技术中心广东深圳518045 深圳市检验检疫科学研究院广东深圳518045

DNA条形码技术作为一项物种鉴定的新技术,在动物、植物、真菌等物种的快速准确鉴定方面日趋成熟,为进出境植物检疫及外来入侵物种鉴定提供了有力的工具。本文概述了真菌DNA条形码技术的研究进展,分析了中国、美国等5个主要贸易国家/地... 详细信息

DNA条形码技术作为一项物种鉴定的新技术,在动物、植物、真菌等物种的快速准确鉴定方面日趋成熟,为进出境植物检疫及外来入侵物种鉴定提供了有力的工具。本文概述了真菌DNA条形码技术的研究进展,分析了中国、美国等5个主要贸易国家/地区检疫性真菌物种DNA条形码收集现状,并从柄锈菌属、疫霉属等重要检疫性真菌所在类群DNA条形码现状分析了DNA条形码筛选、现有数据库资源等存在的问题,提出全基因组水平筛选检疫性真菌DNA条形码的思路,以期提高鉴定准确性,提出加强国际合作、建立检疫性真菌DNA条形码数据库等建议。

关键词：检疫性真菌 DNA条形码全基因组测序数据库

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永生化羔羊睾丸细胞的建立及应用

中国动物传染病学报 2024年

作者：于浩洋王彩霞吴绍强仇松寅刘晓飞冯春燕林祥梅中国检验检疫科学研究院动物检验与检疫研究所

旨在建立永生化羔羊睾丸细胞(lamb testis cell， LT)，为山羊痘病毒(goat pox virus， GTPV)疫苗等的疫苗研发及分子生物学研究提供有力的工具。研究采用酶消化法分离原代LT细胞，利用慢病毒载体分别包装含有hTERT和SV40-LT基因的两种... 详细信息

旨在建立永生化羔羊睾丸细胞(lamb testis cell， LT)，为山羊痘病毒(goat pox virus， GTPV)疫苗等的疫苗研发及分子生物学研究提供有力的工具。研究采用酶消化法分离原代LT细胞，利用慢病毒载体分别包装含有hTERT和SV40-LT基因的两种重组慢病毒，进一步共同感染原代LT细胞，经嘌呤霉素加压筛选，将hTERT和SV40-LT基因整合到原代LT细胞的染色体中，筛选并获得稳定传代的LT细胞。提取上述细胞的DNA和RNA，利用荧光PCR与IFA分别在基因水平与蛋白水平检测hTERT与SV40-LT的表达，鉴定为阳性的亚克隆即为永生化羔羊睾丸细胞(immortalized lamb testis cell， ILT)。检测ILT的细胞生长曲线、细胞存活率，传代稳定性等特性，进一步检测ILT细胞对GTPV的生长特性并与其在Vero细胞的生长特性进行比较。结果表明，本研究利用慢病毒载体将hTERT和SV40-LT基因成功转入原代LT细胞中，成功建立了稳定表达SV40-LT基因与hTERT基因的ILT细胞；传代实验表明ILT细胞至少可以稳定传40代；ILT细胞与原代LT细胞形态一致，细胞的生长速度比原代LT细胞速度快；GTPV能够很好的在ILT细胞中繁殖，在病毒感染后第5天，TCID50达到105.4TCID50/mL，比在Vero细胞中的生长速度快。该研究成功为GTPV的疫生产及后续病毒的分子生物学研究提供了重要的实验材料。

关键词： SV40-LT hTERT 羔羊睾丸细胞山羊痘病毒永生化细胞

基于RPA-CRISPR/Cas12a的美国白蛾可视化快速检测新方法

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环境昆虫学报 2024年第5期46卷 1051-1058页

作者：王雅娜于艳雪田茜张柳李红卫杨硕翟俊峰中国检验检疫科学研究院植物检验与检疫研究所北京100176

美国白蛾Hyphantria cunea Drury是我国重要林业害虫,寄主植物众多且分布范围广泛。本试验基于重组酶聚合酶扩增(RPA)和CRISPR检测技术,构建美国白蛾RPA-CRISPR/Cas12a分子检测体系。根据NCBI数据库中的美国白蛾及近缘种、近似种线粒体C... 详细信息

美国白蛾Hyphantria cunea Drury是我国重要林业害虫,寄主植物众多且分布范围广泛。本试验基于重组酶聚合酶扩增(RPA)和CRISPR检测技术,构建美国白蛾RPA-CRISPR/Cas12a分子检测体系。根据NCBI数据库中的美国白蛾及近缘种、近似种线粒体COⅠ基因片段信息以及昆虫样本CO I基因测序比对结果为模板,设计美国白蛾特异性RPA引物和CrRNA,通过RPA扩增目标序列,结合CRISPR检测技术并对反应条件进行优化,最终该体系灵敏度可检测的最低限度1.0×10^(-1) ng/μL,较RPA结合普通凝胶电泳提高了100倍,检测体系在30 min内即可实现对害虫的现场快速、可视化、精准鉴定。为美国白蛾现场检测提供理论和实践依据,有助于保护森林资源和生态环境的安全。

关键词：美国白蛾 RPA CRISPR Cas12a 可视化快速检测

CRISPR/Cas12a技术在动物疫病检测方面的应用

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中国兽医杂志 2024年第4期60卷 92-97页

作者：孔玉方王慧煜袁向芬许晓琳吴绍强中国检验检疫科学研究院动物检验与检疫研究所北京大兴100176

CRISPR/Cas系统是由簇状规则间隔的短回文重复序列(CRISPR)和CRISPR相关蛋白(Cas)组成的一种基因编辑技术,可以特异地切割和识别靶标核酸基因。该技术具有检测速度快、灵敏度高和特异性强的优势,因此被广泛应用于动物疫病检测领域。本文... 详细信息

CRISPR/Cas系统是由簇状规则间隔的短回文重复序列(CRISPR)和CRISPR相关蛋白(Cas)组成的一种基因编辑技术,可以特异地切割和识别靶标核酸基因。该技术具有检测速度快、灵敏度高和特异性强的优势,因此被广泛应用于动物疫病检测领域。本文就CRISPR/Cas12a结合等温核酸扩增技术和可视化技术在动物疫病检测中的应用进行综述,并对其应用前景进行展望,以期为我国的养殖业和进境动物疫病的监测提供技术支撑。

关键词：簇状规则间隔的短回文重复序列及其相关蛋白12a(CRISPR/Cas12a) 动物疫病核酸检测试纸条

乙烯利处理文心兰花瓣转录组分析及花衰老相关基因挖掘

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分子植物育种 2024年第7期22卷 2127-2136页

作者：裴小华赵龙田阳阳王帅薛唯佳曲飞鸿翟珂吴双李梦桃张恒潘英文夏志强刘进平海南大学热带作物学院海南省热带生物资源可持续利用重点实验室海口570228 海南出入境检验检疫局热带植物隔离检疫中心海口570311

为挖掘花衰老相关基因,揭示乙烯调控花瓣衰老的分子机制,利用乙烯利处理文心兰南茜种(Oncidium gower ramsey)盛开前期的切花花瓣,并进行RNA测序和转录组分析。测序结果共得到234 619个unigene。利用NR、GO、COG/KOG、KEGG和Swissprot... 详细信息

为挖掘花衰老相关基因,揭示乙烯调控花瓣衰老的分子机制,利用乙烯利处理文心兰南茜种(Oncidium gower ramsey)盛开前期的切花花瓣,并进行RNA测序和转录组分析。测序结果共得到234 619个unigene。利用NR、GO、COG/KOG、KEGG和Swissprot数据库分别进行基因功能注释,分别注释到31 027 (77.22%)、11 126 (27.69%)、10 152 (25.27%)、5 523 (13.75%)和18 830 (46.86%)条unigenes。检测到差异表达基因有7 319条。GO功能富集分析共有4 622条差异表达基因注释到生物过程、细胞组分和分子功能3个功能群组;KEGG功能富集分析将差异表达基因主要参与15个代谢通路,其中植物激素信号转导富集的基因最多。鉴定出一批可能在乙烯调控文心兰花瓣衰老中发挥作用的植物激素信号转导关键成分基因和转录因子基因。本研究所获得的乙烯调控文心兰花瓣衰老转录组数据,有助于了解花衰老相关基因功能和阐明花衰老分子机制。

关键词：文心兰乙烯花瓣衰老 RNA测序转录组

政府部门集成管理模式创建研究:以山东出入境检验检疫局为例

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中国行政管理 2014年第6期 37-39页

作者：周建安山东出入境检验检疫局

文章从集成思想出发,结合政府部门管理特点,选取三种管理理论作为集成要素,以过程集成和组织集成为主要集成手段并就其进行集成分析,总结阐述了三种理论在过程上的具体集成以及组织集成的内容。此外,通过简要概括山东出入境检验检疫局... 详细信息

文章从集成思想出发,结合政府部门管理特点,选取三种管理理论作为集成要素,以过程集成和组织集成为主要集成手段并就其进行集成分析,总结阐述了三种理论在过程上的具体集成以及组织集成的内容。此外,通过简要概括山东出入境检验检疫局综合管理体系的构建思路,展示了集成管理理论的实践应用,更加深刻的体现了政府部门集成管理的价值意义。

关键词：政府部门集成管理检验检疫局山东省

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山东检验检疫局广域网络联网技术

计算机系统应用 2001年第10期10卷 44-45,16页

作者：时长江山东检验检疫局济南250000

1前言山东出入境检验检疫局(以下简称山东局)是国家质量监督检验检疫总局设在山东的直属机构,是负责山东地区出入境卫生检疫、动植物检疫和进出口商品检验、鉴定、认证和监督管理的行政执法机关,实行垂直管理体制.山东局及下辖的22个分... 详细信息

1前言山东出入境检验检疫局(以下简称山东局)是国家质量监督检验检疫总局设在山东的直属机构,是负责山东地区出入境卫生检疫、动植物检疫和进出口商品检验、鉴定、认证和监督管理的行政执法机关,实行垂直管理体制.山东局及下辖的22个分支局、11个办事处都已组建了局域网络.

关键词：广域网联网进出口商品检验检验检疫局山东

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基于海关实验室事故推演的事件本体模型研究

实验室研究与探索 2024年第9期43卷 247-252页

作者：蔡伊娜宋蕴哲熊贝贝林燕奎包先雨深圳市检验检疫科学研究院广东深圳518045 深圳海关食品检验检疫技术中心广东深圳518000

为提升海关实验室安全管理水平,研究事件本体模型在该领域的应用,进而构建适用于海关实验室事故推演的事件本体模型。通过提取“人员、事件、时间、地点、物品”5种基础事故因子,构建了简约型5元组模型;利用蝴蝶结结构推演事故致因、过... 详细信息

为提升海关实验室安全管理水平,研究事件本体模型在该领域的应用,进而构建适用于海关实验室事故推演的事件本体模型。通过提取“人员、事件、时间、地点、物品”5种基础事故因子,构建了简约型5元组模型;利用蝴蝶结结构推演事故致因、过程和后果,采用“巡、办、督”控制措施持续改进模型,以某海关实验室为应用场景进行了事故推演分析。研究结果表明,该模型可从事故发生前、发生中、发生后3个阶段进行推演,将人员和物品2个因子在蝴蝶结结构中映射。经对比,该模型具有基础事故因子划分清晰、内容易懂、研判简单、可持续改进等优点。该模型能及时排查并消除实验室风险,有效保障人员和财产的安全。

关键词：事件本体蝴蝶结实验室事故基础事故因子控制措施

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