基于RPA-CRISPR/Cas12a的美国白蛾可视化快速检测新方法

作     者：王雅娜 于艳雪 田茜 张柳 李红卫 杨硕 翟俊峰 WANG Ya-Na;YU Yan-Xue;TINA Qian;ZHANG Liu;LI Hong-Wei;YANG Shuo;ZHAI Jun-Feng

作者机构：中国检验检疫科学研究院植物检验与检疫研究所北京100176 

出 版 物：《环境昆虫学报》 (Journal of Environmental Entomology)

年 卷 期：2024年第46卷第5期

页      面：1051-1058页

学科分类：07[理学] 09[农学] 0904[农学-植物保护] 090402[农学-农业昆虫与害虫防治] 0713[理学-生态学] 

基　　金：中国检验检疫科学研究院基本科研业务费项目(2024JK023) 

主　　题：美国白蛾 RPA CRISPR Cas12a 可视化 快速检测 

摘      要：美国白蛾Hyphantria cunea Drury是我国重要林业害虫,寄主植物众多且分布范围广泛。本试验基于重组酶聚合酶扩增(RPA)和CRISPR检测技术,构建美国白蛾RPA-CRISPR/Cas12a分子检测体系。根据NCBI数据库中的美国白蛾及近缘种、近似种线粒体COⅠ基因片段信息以及昆虫样本CO I基因测序比对结果为模板,设计美国白蛾特异性RPA引物和CrRNA,通过RPA扩增目标序列,结合CRISPR检测技术并对反应条件进行优化,最终该体系灵敏度可检测的最低限度1.0×10^(-1) ng/μL,较RPA结合普通凝胶电泳提高了100倍,检测体系在30 min内即可实现对害虫的现场快速、可视化、精准鉴定。为美国白蛾现场检测提供理论和实践依据,有助于保护森林资源和生态环境的安全。