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心肌缺血动物实验技术方法在机能实验教学中的创新

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中国实验诊断学 2019年第6期23卷 1108-1109页

作者：李天舒邓建环康劲松吉林大学基础医学院机能科学实验中心吉林长春130021 吉林大学白求恩第一医院肝胆胰内科吉林大学基础医学院病理生理学系

心肌缺血动物模型的制备方法很多,目前应用比较广泛的是结扎左冠状动脉前降支复制心肌缺血模型[1]。根据多年科研与教学实验,发现如果实验动物外科手术顺利,术后抗感染和术后营养达到标准,给药组大鼠实际死亡量很小,而且各种生理功能指... 详细信息

心肌缺血动物模型的制备方法很多,目前应用比较广泛的是结扎左冠状动脉前降支复制心肌缺血模型[1]。根据多年科研与教学实验,发现如果实验动物外科手术顺利,术后抗感染和术后营养达到标准,给药组大鼠实际死亡量很小,而且各种生理功能指标均能恢复,实验动物甚至日常活动跟正常对照组,假手术组一样。但是同样的药物治疗对于人类心肌缺血患者尤其是长期慢性患者来说,治疗的效果不佳,有些人不得不接受支架,搭桥手术。

关键词：心肌缺血实验动物血液黏度医学生机能实验动物病理模型

SNCA和PARK16多态性与中国辽宁地区汉族帕金森病人的关联分析

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中国病理生理杂志 2012年第10期28卷 1879-1883页

作者：罗莎田小菲周懿舒李冯锐朱兰卉罗晓光任艳庞灏中国医科大学法医学院辽宁沈阳110001 东北师范大学生命科学学院吉林长春130024 河北北方学院基础医学院法医系河北张家口075000 中国医科大学附属第一医院神经内科辽宁沈阳110001

目的:探究SNCA基因rs3857059和PARK16基因rs16856139单核苷酸多态性(SNPs)的频率分布及与帕金森病的关联性。方法:本研究以214名中国辽宁地区汉族健康个体和213名帕金森病患者为研究对象,借助多重PCR及单一的限制性内切酶消化后的限制... 详细信息

目的:探究SNCA基因rs3857059和PARK16基因rs16856139单核苷酸多态性(SNPs)的频率分布及与帕金森病的关联性。方法:本研究以214名中国辽宁地区汉族健康个体和213名帕金森病患者为研究对象,借助多重PCR及单一的限制性内切酶消化后的限制性片段长度多态性(RFLP)分析技术,对上述2种帕金森病易感基因中的2个SNPs位点进行等位基因多态性调查,并将所得的对照及病例组数据进行相关统计分析。结果:多重PCR-RFLP法成功地检测出2个SNPs位点的所有基因型。基因频率数据显示rs3857059位点的G等位基因频率在帕金森病患者组高于对照组,差异有统计学意义(2=7.592,P<0.01,OR=0.677,95%CI=0.517～0.888);rs16856139位点的T等位基因频率在帕金森病患者组低于对照组,差异有统计学意义(2=11.511,P<0.01,OR=0.390,95%CI=0.227～0.669),这些结果提示本研究调查的2个SNPs构成了帕金森病患病的危险因素。结论:帕金森病易感基因SNCA的rs3857059和PARK16的rs16856139位点基因频率分布在中国辽宁地区汉族群体中与帕金森病相关。

关键词：帕金森病基因 SNCA 基因,PARK16

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医学留学生病理生理学教学方法改革初探

中国实验诊断学 2017年第5期21卷 934-934,F0003页

作者：郭丽荣张连波李洪岩康劲松苏静孟艳刘亚男张勇李扬吉林大学基础医学院病理生理教研室吉林长春130021 吉林大学中日联谊医院

近年来越来越多的医学留学生选择来华求学。自2000年以来,医学留学生人数持续增长,在所有学科中排列第二位;医学留学生本科教育已经成为医学高等教育非常重要的组成部分,在提高学校综合实力和国际影响力方面发挥了巨大作用。吉林大学基... 详细信息

近年来越来越多的医学留学生选择来华求学。自2000年以来,医学留学生人数持续增长,在所有学科中排列第二位;医学留学生本科教育已经成为医学高等教育非常重要的组成部分,在提高学校综合实力和国际影响力方面发挥了巨大作用。吉林大学基础医学院自2005年以来开始招收国际留学生,这些留学生大部分来自于印度、尼泊尔,索马里等国家,对这些留学生授课采用英语授课,十多年来,取得了很好的效果,同时也总结了一些经验,为提高留学生授课水平,

关键词：医学高等教育学校综合实力病理生理学英语授课授课水平教学方法教学内容教学效果本科教育桥梁课程

利用多光子显微成像和荧光寿命显微镜定量分析卵巢癌的病理状况

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利用多光子显微成像和荧光寿命显微镜定量分析卵巢癌的病理状况

作者：赵天宇吉林大学

学位级别：硕士

背景:卵巢癌为妇科三大恶性肿瘤之一,其病死率为女性生殖道恶性肿瘤之首,且发病率呈逐年上升趋势。70%的卵巢癌患者确诊时已处于晚期,然而早期发现并得到有效治疗后,5年生存率可高达90%,晚期卵巢癌5年生存率不足30%。因此,找到灵敏度和... 详细信息

背景:卵巢癌为妇科三大恶性肿瘤之一,其病死率为女性生殖道恶性肿瘤之首,且发病率呈逐年上升趋势。70%的卵巢癌患者确诊时已处于晚期,然而早期发现并得到有效治疗后,5年生存率可高达90%,晚期卵巢癌5年生存率不足30%。因此,找到灵敏度和特异性均较高的卵巢癌早期诊断方法,对于降低患者死亡率、改善预后具有重要意义。目前临床上卵巢癌的常用检查方法包括临床症状、血清肿瘤标记物、影像学检查,因存在多种局限性,现仍无法达到早期检测出卵巢癌所需的灵敏性。一直以来,组织病理学检查作为确诊卵巢癌的唯一“金标准”,但由于卵巢癌早期无明显临床症状,且组织病理学为有创性检查,其准确度受病理科医生经验以及染色技术等多因素的制约,因此不能作为早期卵巢癌筛查的常规方法。组织癌变是一个连续的、多阶段的发展过程,癌细胞的增值、代谢、分化与正常细胞不同,以及出现侵袭和转移行为,而这些变化正是早期诊断疾病的理论依据。所以,在基于切片的卵巢癌病理分析中,迫切需要一种无标记的新技术,既能快速定位病灶区域,又能将组织结构及生化成分信息“可视化”。近年来,光学显微成像技术越来越多地应用于生物医学研究,在大脑成像、消化道肿瘤以及乳腺癌病理诊断等方面已经取得了一系列较好的研究成果。光学成像作为检测肿瘤疾病的方法具有诸多优势,包括快速、高分辨率、非侵入性等。本实验将多模态光学系统与两种算法相结合,使丰富的病理信息通过非标记光学技术检测出来。本实验由吉林省科技厅国际合作处(编号20170414035GH)资助,采用双光子激发荧光、二次谐波产生和荧光寿命显微镜来检测生物组织的内源性荧光基团信号,结合快速傅里叶变换和灰度共现矩阵两种算法对图像中的信号进一步分析,基于光学显微成像筛选找到卵巢癌组织区别于其它卵巢良性病变组织的光学特征,探索光学成像技术应用于卵巢癌诊断的可行性,为实现卵巢癌早期诊断奠定实验理论基础。目的:采用多光子显微成像和荧光寿命成像技术对实验样本成像,记录不同病理状况下卵巢组织的上皮细胞光学形态、双光子荧光光谱、胶原二次谐波信号和荧光寿命特性,结合快速傅里叶变换和灰度共现矩阵两种算法处理图像,建立分析算法模型进一步分析,识别卵巢癌组织不同于其它病变类型的光学差异,基于“光学标志物”探索光学成像技术应用于卵巢癌诊断的可行性,为早期、快速地实现卵巢癌诊断奠定实验理论基础。材料与方法:实验样品为吉林大学白求恩第三医院病理科提供的12位患者(32-75岁)的卵巢组织病理切片,每例病理各2张切片,共计24张病理切片。按照病理结果,分为正常卵巢组织切片(2张)、良性病变卵巢组织切片(4张)、高级别浆液性卵巢癌组织切片(IIA-IVB期)(18张)。采用双光子激发荧光、二次谐波产生和荧光寿命成像显微成像技术对所有病理切片成像,记录每张切片的上皮细胞光学形态、双光子荧光光谱、胶原二次谐波信号和荧光寿命特性,结合快速傅里叶变换和灰度共现矩阵两种算法对图像处理、分析,基于成像的筛选找出卵巢癌组织不同于其它卵巢病变组织的光学差异,分析卵巢癌的病理状况。结果:1.通过双光子激发荧光与二次谐波成像协同分析正常卵巢组织,可看到高度组织的上皮细胞在胶原蛋白主导的基质上方形成单层,由此可以区分出上皮与细胞外基质,得到具有胶原蛋白定位的细胞结构。2.高级别浆液性卵巢癌的双光子激发荧光图像可以看出上皮细胞宽度明显变宽,测量卵巢良性病变组织和高级别浆液性卵巢癌的上皮细胞宽度,计数细胞核数,可区分卵巢良性病变和高级别浆液性卵巢癌。3.二次谐波图像可将卵巢癌组织中的胶原分为三类:TACS-1:分布在肿瘤边界,排列不规则,结构随机性,可以作为定位较小的肿瘤区域的标记物;TACS-2:主要平行于肿瘤边界,在肿瘤周围呈细长的规则结构,形态的改变系肿瘤生长导致的间质拉伸引起的。TACS-3:与组织边界有明显的倾斜度,粗糙较厚,形状不规则,分布在肿瘤区域。这一结论可以用来确定肿瘤的大小,揭示了肿瘤细胞的迁移和侵袭方向。4.利用双光子荧光成像和荧光寿命分析肿瘤区域和坏死区域发现:坏死组织区域的荧光信号强度大约是肿瘤组织的3倍,NADH和FAD在坏死组织中的荧光寿命总是短于肿瘤组织。结论:基于“光学标志物”探索光学成像技术应用于卵巢癌诊断是可行的,为早期、快速地实现卵巢癌诊断奠定了实验理论基础。

关键词：卵巢癌多光子显微成像荧光寿命显微镜病理诊断

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《动物解剖学》创新示范课程的思考

畜牧与兽医 2020年第9期52卷 143-145页

作者：李赫李建平宋斯伟宋德光兰云刚张巧灵吉林大学动物医学学院吉林长春130062 吉林农业科技学院动物科技学院吉林吉林132101

《动物解剖学》是一门对有机体全部概貌认知的课程,是畜牧兽医专业学生进入大学后学习的第一门学科基础课,该课程的掌握程度直接影响学生对后续病理学、生理学、临床诊断、治疗等专业课的学习以及获得基层养殖场饲养管理、畜禽疫病防治... 详细信息

《动物解剖学》是一门对有机体全部概貌认知的课程,是畜牧兽医专业学生进入大学后学习的第一门学科基础课,该课程的掌握程度直接影响学生对后续病理学、生理学、临床诊断、治疗等专业课的学习以及获得基层养殖场饲养管理、畜禽疫病防治等工作的资本。因此,对枯燥乏味的《动物解剖学》进行创新性改革一直是畜牧兽医类院校解剖学老师追求和探索的目标。目前,本教研室老师已制作了牛运动系的三维动画并应用于前几届学生的《动物解剖学》教学中,得到学生与院领导的一致认可。同时,教研室将尝试制作"微课"、开设开放性实验、进行翻转式教学、开展技能大赛等创新改革,真正实现"教、学、做"相结合的《动物解剖学》课程教学新模式。

关键词：动物解剖学创新改革翻转教学技能大赛三维动画

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急性脊髓损伤的治疗现状与研究进展

吉林医学 2013年第13期34卷 2535-2536页

作者：秦绪强谭树镇曲扬张树泉赵宝林吉林大学白求恩第三医院骨科

急性脊髓损伤(spinal cord injury,SCI 对于患者和医务工作者来说是最具灾难性和最令人泄气的疾病之一,它往往给患者及家属带来很大的负担,患者生活质量明显下降,甚至不能自理.随着对这种疾病病理生理学的认识、影像学技术的发展,药物... 详细信息

急性脊髓损伤(spinal cord injury,SCI 对于患者和医务工作者来说是最具灾难性和最令人泄气的疾病之一,它往往给患者及家属带来很大的负担,患者生活质量明显下降,甚至不能自理.随着对这种疾病病理生理学的认识、影像学技术的发展,药物及手术治疗方式的不断改进,这类患者似乎看到了一线曙光.应用大剂量甲基氢化泼尼松methylprednisolone,MP进行冲击治疗SCI作为标准治疗方案已经使用了十余年的时间,大量的临床试验并没有取得人们想要的结果,反而在治疗过程中增加了并发症的发生率,近期很多基础研究证明MP能够抑制神经母细胞( neural progenitor cells ,NPCs)的增殖,于是SCI患者是否应用MP进行冲击治疗再一次成为人们争论的焦点.令人欣喜的是随着基因工程及生物工程的发展,人们开始探索应用生物工程技术治疗SCI,并且已经获得了初步的胜利.

关键词：急性脊髓损伤药物治疗甲强龙并发症基因工程/生物工程

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寰椎椎弓根螺钉置入的应用解剖学研究

寰椎椎弓根螺钉置入的应用解剖学研究

作者：王建华吉林大学

学位级别：硕士

目的：对寰椎椎弓根进行解剖测量，更加深入了解其解剖，为临床椎弓根螺钉选择提供数据支持，同时对寰椎选定准确的进钉点，找到恒定的进钉参考系，并测量螺钉钉道与所选参考系的角度关系,从而确定正确的进钉方向，为寰椎椎弓根螺钉准... 详细信息

目的：对寰椎椎弓根进行解剖测量，更加深入了解其解剖，为临床椎弓根螺钉选择提供数据支持，同时对寰椎选定准确的进钉点，找到恒定的进钉参考系，并测量螺钉钉道与所选参考系的角度关系,从而确定正确的进钉方向，为寰椎椎弓根螺钉准确置入提供理论指导。方法：吉林大学白求恩医学部基础医学院解剖教研室提供的20具全套颈椎干燥骨标本（剔除畸形、骨折及病理性破坏的标本）。标本忽略年龄、性别、身高、体重等差别的影响。取其中寰椎共20个椎体标本。分别对20个标本两侧徒手行椎弓根钉螺置入。取寰椎侧块下方内外缘的中点在后弓上的投影距椎动脉沟底部后弓最薄处的垂直距离2mm处为置入螺钉的进钉点A，过寰椎侧块腹侧上方内外缘中点和进钉点A的失状面，通过此失状面的寰椎侧块上下缘中点为出钉点B。选择合适直径及长度的螺钉，直视下沿预先设定好的进钉方向置入。取出螺钉并将克氏针插入钉道代替螺钉中轴线，使用量角器测量：螺钉中轴线与正中矢状面形成的的横向角（X）;螺钉中轴线与寰椎所在平面所形成的纵向角（Y）。使用游标卡尺和直尺分别测量：寰椎椎动脉沟底部后弓最薄处的高度(h);寰椎椎动脉沟底部后弓最薄处的宽度(w);寰椎进钉点与后结节之间的垂直距离(S1);钉道全长(AB);寰椎侧块背侧下方内外缘之间的距离S2。使用SPSS软件统计分析数据。结果：（1）寰椎椎动脉沟底部后弓最薄处的宽度大于高度(w＞h），经t检验有差异性（P＜0.05）。（2）寰椎进钉点与后结节之间的垂直距离为21.2±3.5mm。（3）寰椎钉道全长(AB)为26.1±4.4mm。（4）寰椎侧块背侧下方内外缘之间的距离S2为11.1±1.1mm。（5）寰椎置钉的横向角（X）为10.9°±5.2°;纵向角（Y）为4.1°±0.7°。结论：取寰椎侧块下方内外缘的中点在后弓上的投影距椎动脉沟底部后弓最薄处的垂直距离2mm处为置入螺钉的进钉点;置钉取横向角6°～16°、纵向角3°～5°;选择直径为3.5mm，长度为21.7～30.5mm的螺钉安全、客观、可靠。

关键词：寰椎椎弓根螺钉解剖

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高脂血症的免疫缺陷小鼠模型的构建

高脂血症的免疫缺陷小鼠模型的构建

作者：王兆卫吉林大学

学位级别：硕士

背景及目的:高脂血症又称血脂谱异常症,是指血浆中总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白中其中一种或多种水平升高。临床上,又可以根据发病原因可以分为先天发病和后天发病两类。先天高血脂症大多数是由于家族性遗传低密度脂蛋白受体基因... 详细信息

背景及目的:高脂血症又称血脂谱异常症,是指血浆中总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白中其中一种或多种水平升高。临床上,又可以根据发病原因可以分为先天发病和后天发病两类。先天高血脂症大多数是由于家族性遗传低密度脂蛋白受体基因缺陷导致的,分为单基因高脂血症和散发性或多基因高脂血症,后天高脂血症的主要致病因素是高脂高热量饮食的不良生活习惯和一些疾病等。高脂血症的病理生理过程复杂,高脂血症的最主要后果是导致脂质在血管内皮沉积,引起动脉粥样硬化和心脑血管方面的疾病。高脂血症对我国国民健康已造成重大影响,据统计,我国约有9000万人患有高脂血症。因此,开展高脂血症的病理机制研究对于有效治疗、预防高脂血症及相关疾病十分重要。高脂血症患者体内免疫系统会出现慢性炎症和异常活化状态,这与糖尿病、动脉粥样硬化等伴发疾病的发生和发展密切相关。早期报道发现肥胖小鼠的内脏脂肪组织中大量表达TNF-α,揭示了肥胖所引发高血脂、糖尿病与慢性炎症之间的联系。早期的研究主要集中在天然免疫细胞的异常活化在脂代谢异常相关疾病进程中的作用。在分子水平上,高脂血症会使巨噬细胞以及其他免疫细胞蓄积胆固醇,导致Toll样受体(TLR)和炎症小体活化;在细胞水平上,TLR信号的激活会引起胆固醇外排减少,会使胆固醇更加积聚,增强机体炎症反应。这些天然免疫系统慢性活化已被证明与动脉粥样硬化和胰岛素抵抗的病理机理密切相关。近期的研究显示适应性免疫系统慢性活化也在高脂血症及相关伴发疾病的病理过程中起着重要作用。例如,在动脉粥样硬化斑块中积聚的T细胞多表现为Th1亚型,可产生IFN-γ和TNF-α等炎性因子,而活化的T和B淋巴细胞存在于坏死性脂肪细胞周围,可诱发胰岛素抵抗。动物模型是研究高脂血症免疫病理机制并研发相关新药的重要工具。近年出现了具有人免疫系统的人源化小鼠模型,因此可在该模型的基础上直接研究部分人免疫系统相关疾病的病理过程,该模型广泛应用于感染、肿瘤、移植、自身免疫病、再生医学等领域,成为沟通基础研究和临床应用的桥梁。研究人员采用近交系LDLR-KO C57BL/6J小鼠作为金标准,然而这种小鼠有很强的T细胞亚群偏向,不能完全适用更为复杂的人的免疫系统的研究。并且小鼠和人类免疫系统具有很大的差异,这导致从普通小鼠模型中获得的研究成果常无法解释人类的生理或病理问题。免疫系统人源化小鼠模型为研究高胆固醇对人体免疫细胞功能的作用提供了一条新的途径。经过约30年的发展,主要有两类免疫系统人源化小鼠模型应用最为广泛。一种是给免疫缺陷小鼠幼崽注射人源脐带血CD34细胞建立的免疫系统人源化小鼠模型;另一种免疫系统人源化小鼠模型是在人胚胎胸腺移植给免疫缺陷小鼠的同时,尾静脉注射CD34人胚胎肝细胞移植,这种免疫系统人源化小鼠模型也称为BLT小鼠。第二种免疫系统人源化小鼠被认为是研究人免疫相关疾病的最佳体内模型之一。近期研究表明:通过对NSG小鼠进行高脂喂养和前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶/kexin 9型-腺相关病毒8(adeno-associated virus 8–proprotein convertase subtilisin/kexin type 9,AAV8-PCSK9)的感染,可以用于模拟高血脂条件下的人免疫功能异常。但该方法较为复杂,不易于推广应用。因此,本研究选择对NOD/SCID小鼠进行LDLR基因敲除,使其LDLR表达量减少,使小鼠体内LDL-C含量升高,以此作为后期免疫系统人源化的基础。该方法与目前已报道的策略相比,简单且长效。研究方法:1.选择了NOD SCID小鼠作为基因编辑的基础,通过使用显微注射和Crispr/Cas9技术,将小鼠低密度脂蛋白受体基因的外显子2-18敲除。用PCR技术鉴定得到了LDLR基因缺陷的杂合子后代小鼠。2.检测后代野生型和杂合子小鼠的血脂及体重。3.使用病理HE染色,检测并确定了杂合子小鼠的后代胚胎吸收情况。研究结果:1.得到了后代LDLR基因缺陷的杂合子小鼠。2.检测得到的杂合子小鼠血脂相对于野生型小鼠有升高。3.发现了后代胚胎吸收的情况。研究结论:运用Crispr/Cas9技术,敲除NOD SCID小鼠的LDLR基因,得到的杂合子后代相对于野生型血脂升高。

关键词：高脂血症免疫系统人源化小鼠 LDLR 胆固醇水平 Crispr/Cas9

利用TALEN技术构建猪内源性基因Tiki1打靶猪模型

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农业生物技术学报 2019年第10期27卷 1858-1868页

作者：吴彩霞刘朝明颜泉梅欧阳振赵宇张全军樊娜娜赖良学吉林大学动物医学学院中国科学院广州生物医药与健康研究院

Tiki1基因(TraB domain containing protein 2A)在蛙(Xenopus laevis)头部诱导发生过程中起着决定性的作用,但Tiki1在哺乳动物乃至人(Homo sapiens)的早期发育中的功能尚不清楚,与人类在生理学、病理学上都极为相近的猪(Sus scrofa)成... 详细信息

Tiki1基因(TraB domain containing protein 2A)在蛙(Xenopus laevis)头部诱导发生过程中起着决定性的作用,但Tiki1在哺乳动物乃至人(Homo sapiens)的早期发育中的功能尚不清楚,与人类在生理学、病理学上都极为相近的猪(Sus scrofa)成为研究Tiki1功能的理想哺乳动物模型。本研究利用转录激活因子样效应物核酸酶(transcription activator-like effector nuclease, TALEN)基因编辑技术针对猪内源性基因Tiki1外显子4设计了1对TALEN质粒,并在猪孤雌激活胚胎水平上进行了TALEN质粒的体外活性检测,比较了设计的TALEN质粒以不同浓度注射时打靶效率及对胚胎发育的影响,并进行了细胞的转染和筛选,结合体细胞核移植技术构建了Tiki1基因打靶猪模型。本研究共计构建了1 922枚基因编辑克隆胚胎并植入8头代孕母猪子宫内,其中3头怀孕到期并顺利分娩,共计获得12头活猪和1头死胎,经酶切鉴定和测序鉴定结果表明其中有4头属于预期的Tiki1基因打靶阳性猪模型。将Tiki1基因打靶阳性猪模型和WT配种,经过足月后顺产分娩获得5头F1代成活仔猪,进一步测序鉴定基因敲除情况,结果表明构建的Tiki1基因打靶阳性猪模型是可以生殖系遗传的,不是嵌合体。本研究首次采用TALEN技术对猪基因组内源性基因Tiki1进行定点修饰,成功且高效率地构建了猪内源性基因Tiki1敲除的大动物模型,为实现大动物高效的基因编辑提供了有力的工具,也为将来建立各种生物医药模型和农业基因改良猪提供了技术基础。

关键词：转录激活因子样效应物核酸酶(TALEN)基因编辑技术 Tiki1 基因打靶猪模型