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高活性脐带间充质干细胞干预老年树鼩衰老脾脏的作用与机制

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中国组织工程研究 2025年第19期29卷 4000-4010页

作者：叶丽田川赵晓娟陈梦蝶叶倩倩李强廖珠银李晔朱向情阮光萍何志旭舒莉萍潘兴华贵州医科大学基础医学院免疫学教研室组织工程与干细胞实验中心贵州省贵阳市550004 中国人民解放军联勤保障部队第九二〇医院干细胞与免疫细胞生物医药技术国家地方联合工程实验室云南省细胞治疗技术转化医学重点实验室昆明市干细胞与再生医学重点实验室基础医学实验室云南省昆明市650032 遵义医科大学附属医院儿科学教研室贵州省遵义市563100

背景:脾脏具有储血、造血和免疫功能,随着年龄增长,脾脏结构退变、功能衰退引起免疫系统功能受损,进而加速机体衰老进程,而高活性脐带间充质干细胞治疗树鼩脾脏衰老尚未见报道。目的:探讨高活性脐带间充质干细胞对树鼩脾脏衰老的干预作... 详细信息

背景:脾脏具有储血、造血和免疫功能,随着年龄增长,脾脏结构退变、功能衰退引起免疫系统功能受损,进而加速机体衰老进程,而高活性脐带间充质干细胞治疗树鼩脾脏衰老尚未见报道。目的:探讨高活性脐带间充质干细胞对树鼩脾脏衰老的干预作用及机制。方法:从剖腹产的新生树鼩脐带组织中分离、培养和获得高活性脐带间充质干细胞,三系分化试剂盒检测成脂、成骨、成软骨分化能力,流式细胞术检测细胞周期和表面标志物。以感染复数值分别为100,120,140,160,180,200的吉凯基因绿色荧光蛋白转染第2代高活性脐带间充质干细胞,筛选最佳转染条件;转染后的第4代高活性脐带间充质干细胞尾静脉输注给老年治疗组树鼩,青年对照组和老年模型组不予特殊处理,治疗4个月时取脾脏组织,苏木精-伊红染色观察脾脏组织结构;β-半乳糖苷酶染色检测衰老相关半乳糖苷酶活性;免疫组织化学染色检测p21和p53蛋白表达水平;Ki67和PCNA免疫荧光染色检测细胞增殖活性;免疫荧光染色检测脾脏自噬蛋白分子Beclin1和APG5L/ATG5表达水平;活性氧荧光染色检测脾脏组织的活性氧含量;CD3免疫荧光染色检测总T淋巴细胞比例变化;酶联免疫吸附实验检测脾脏组织白细胞介素1β和转化生长因子β1分泌水平;DAPI复染细胞核观察绿色荧光蛋白标记的高活性脐带间充质干细胞在脾脏组织的分布情况。结果与结论:①高活性脐带间充质干细胞呈核小短梭形、鱼群样生长,G_(0)/G_(1)期占比大,具有向成脂、成骨和成软骨分化潜能。②感染复数为140且转染72 h为吉凯基因绿色荧光蛋白标记树鼩高活性脐带间充质干细胞的最佳条件。③与老年模型组相比,老年治疗组树鼩脾脏组织细胞排列紧密,白髓面积增加(P0.05),脾脏组织衰老相关半乳糖苷酶活性水平降低(P0.05)。与青年对照组相比,以上检测指标在老年治疗组中均有显著差异(P<0.05)。④冰冻组织切片观察可见老年治疗组树鼩脾脏组织中有绿色荧光蛋白标记的绿色荧光细胞。结果表明:静脉输注高活性脐带间充质干细胞可迁移至脾脏组织,抑制活性氧产生,下调衰老相关蛋白分子表达,诱导细胞自噬,促进细胞增殖,降低慢性炎症,进而改善脾脏组织结构和功能。

关键词：高活性脐带间充质干细胞树鼩脾脏衰老免疫自噬炎症

胆甾醇基γ-聚谷氨酸载紫杉醇自组装纳米胶束的制备与性能

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生物医学工程学杂志 2018年第3期35卷 403-408页

作者：胡凡肖港王育川姚俊曹新南京医科大学分析测试中心南京211166 南京医科大学基础医学院生物技术系南京211166

本文采用两亲性胆甾醇基γ-聚谷氨酸纳米胶束(γ-PGA-graft-CH NMs)负载紫杉醇(PTX),考察了该胶束体系的载药性能与体内外特性。研究结果表明,γ-PGA-graft-CH NMs对PTX体现了良好的负载性能,最佳药载比为1/10,载药量达26.9%±0.8%,包封... 详细信息

本文采用两亲性胆甾醇基γ-聚谷氨酸纳米胶束(γ-PGA-graft-CH NMs)负载紫杉醇(PTX),考察了该胶束体系的载药性能与体内外特性。研究结果表明,γ-PGA-graft-CH NMs对PTX体现了良好的负载性能,最佳药载比为1/10,载药量达26.9%±0.8%,包封率88.6%±1.7%,对应载药纳米胶束(PTX/NMs)的粒径为(343.5±7.3)nm;体外释药结果显示,PTX/NMs能延缓PTX的释放,并具有p H敏感的释药特性和较低的细胞毒性;药代动力学研究表明,PTX/NMs在小鼠体内的消除半衰期(t1/2β)、血药浓度–时间曲线下面积(AUC)均明显大于PTX/聚氧乙烯蓖麻油注射剂(PTX/PCO),并具有较低的清除率(CL);PTX/NMs在肝脏和瘤体分布高于PTX/PCO,且对荷瘤小鼠具有良好的抑瘤效果。本研究针对将γ-PGA-graft-CH NMs用于抗肿瘤给药系统奠定了一定的基础。

关键词： γ-聚谷氨酸纳米胶束药物载体药代动力学抑瘤试验

Ⅱ型糖尿病大鼠神经视网膜组织中差异蛋白质分析

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分析化学 2010年第10期38卷 1462-1468页

作者：王亚冬童明庆崔毓贵张民英郭雪江王玲许志洋王富强南京医科大学第一附属医院南京医科大学基础医学院

以高脂饮食联合小剂量链脲菌素(Streptozotocin,STZ)注射方法诱导大鼠II型糖尿病(T2DM)模型为研究对象,采用比较蛋白质组学技术鉴定和分析早期糖尿病神经视网膜差异表达蛋白。通过联用液氮内研磨、冰浴超声、高速离心提取全蛋白技术,提... 详细信息

以高脂饮食联合小剂量链脲菌素(Streptozotocin,STZ)注射方法诱导大鼠II型糖尿病(T2DM)模型为研究对象,采用比较蛋白质组学技术鉴定和分析早期糖尿病神经视网膜差异表达蛋白。通过联用液氮内研磨、冰浴超声、高速离心提取全蛋白技术,提取每只大鼠神经视网膜全蛋白质总量约900μg。采用双向凝胶电泳(2-DE)分离技术,获得2500个以上可辩认的蛋白质斑点。通过蛋白质组学比对技术筛选出糖尿病状态下神经视网膜差异表达蛋白,用基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱(MALDI-TOF-MS/MS)和肽质量指纹图谱(PMF)鉴定出20个差异蛋白点。按照Gene Ontology(GO)分类体系,对差异蛋白归类分析,揭示其亚细胞定位和分子功能。应用Pathway Studio软件对差异表达蛋白的生物学意义进行分析,认为凋亡是早期糖尿病视网膜病变(Diabetic retinopathy,DR)重要的细胞事件;AnnexinΙ、CRYAB、mtHsp70蛋白是与病理过程相关的关键蛋白,对研究DR致病机制有重要意义。

关键词：大鼠神经视网膜比较蛋白质组学双向凝胶电泳基质辅助激光解析电离飞行时间质谱糖尿病

三酶焦测序体系的建立及其在唐氏综合征快速诊断中的应用

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遗传 2010年第5期32卷 517-523页

作者：刘夕群朱术会邹秉杰马寅姣周国华南京医科大学基础医学院南京210029 华东医学生物技术研究所南京210002

为了避免四酶焦测序体系中由于三磷酸腺苷双磷酸酶(apyrase)造成的测序结果偏差,文章建立了一种定量性能好的无三磷酸腺苷双磷酸酶的三酶焦测序体系。方法是将生物素修饰的DNA模板、荧光素酶和ATP硫酸化酶固定在磁性微球表面进行焦测序... 详细信息

为了避免四酶焦测序体系中由于三磷酸腺苷双磷酸酶(apyrase)造成的测序结果偏差,文章建立了一种定量性能好的无三磷酸腺苷双磷酸酶的三酶焦测序体系。方法是将生物素修饰的DNA模板、荧光素酶和ATP硫酸化酶固定在磁性微球表面进行焦测序反应,当加入一种dNTP进行焦测序反应完后,采用磁性分离技术,除去焦测序反应产生的ATP和剩余的dNTP,然后加入另一种dNTP进行测序,按同样的方法去除影响下一轮测序反应的成分,实现循环测序。此体系能准确判读待测DNA的碱基序列,且可定量测定单核苷酸序列多态性(SNP)中两种等位基因型的相对比值。文章成功检测了16例正常人和8例唐氏综合征患者样本中21号染色体上两个杂合率较高位点(rs1042917和rs4818219)的等位基因型比值,所得结果能够明确说明待测样本中来自于父方和母方的21号染色体数目是否相等。该法具有良好的定量性能,适合于SNP等位基因型的定量分析,可以用于唐氏综合征的快速检测。

关键词：腺苷双磷酸酶三酶焦测序体系唐氏综合征单核苷酸序列多态性

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刚地弓形虫蛋白质组学研究进展

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2015年第3期33卷 214-218,221页

作者：邱竞帆葛可王勇南京医科大学基础医学院病原生物学系南京210029

近10年,蛋白质组学技术广泛应用于刚地弓形虫研究中,研究结果为全面深入揭示该虫体的生命活动本质奠定了基础。目前,关于刚地弓形虫的整体蛋白质组学研究仅限于速殖子和卵囊阶段的蛋白质组学;亚蛋白质组学研究包括一些重要抗原,如可溶... 详细信息

近10年,蛋白质组学技术广泛应用于刚地弓形虫研究中,研究结果为全面深入揭示该虫体的生命活动本质奠定了基础。目前,关于刚地弓形虫的整体蛋白质组学研究仅限于速殖子和卵囊阶段的蛋白质组学;亚蛋白质组学研究包括一些重要抗原,如可溶性速殖子抗原、糖蛋白和免疫蛋白质组学研究等;差异蛋白质组学研究着眼于阐明不同虫株或不同虫种的差异蛋白。本文综述了弓形虫蛋白质组学的研究现状,详细阐述了弓形虫整体蛋白质组学、亚蛋白质组学和差异蛋白质组学的主要研究进展。此外,本文还概述了弓形虫蛋白质组学的生物信息学平台,并对弓形虫蛋白质组学的应用前景进行了展望。

关键词：刚地弓形虫蛋白质组学排泄-分泌抗原可溶性速殖子抗原

CRISPR基因编辑的脱靶效应应对策略综述

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基因组学与应用生物学 2020年第6期39卷 2921-2929页

作者：许元金玉翠乐珅南京医科大学基础医学院南京211166 南京医科大学基础医学院医学遗传学系南京211166

CRISPR/Cas9基因编辑系统是第三代基因编辑技术,在生物医学领域有着广泛的应用。该系统由sgRNA和Cas9蛋白组成,sgRNA与Cas9结合并引导Cas9到达DNA靶点,Cas9作为核酸内切酶对靶序列进行切割,形成DNA双链断裂(double strand break, DSB)。... 详细信息

CRISPR/Cas9基因编辑系统是第三代基因编辑技术,在生物医学领域有着广泛的应用。该系统由sgRNA和Cas9蛋白组成,sgRNA与Cas9结合并引导Cas9到达DNA靶点,Cas9作为核酸内切酶对靶序列进行切割,形成DNA双链断裂(double strand break, DSB)。DSB通过两种机制——非同源末端连接(nonhomologous end joining, NHEJ)和同源重组介导的修复(homology-directed repair, HDR)——进行修复,实现特定基因的敲除或插入。与锌指核酸酶(ZFNs)和转录激活因子样效应物核酸酶(TALENs)等基因编辑工具相比,CRISPR/Cas9在简便性、专一性等方面有很大优势,但脱靶效应一直是它在实际应用中面临的一个难题。目前已有许多针对脱靶效应的研究,科学家们已发现一些影响靶点专一性的因素,如sgRNA种子序列、PAM序列、Cas9蛋白、DSB修复通路等,并据此研发出降低脱靶效应的可行性策略。本综述就CRISPR/Cas9系统的作用原理、潜在的脱靶危害和降低脱靶效应的策略研究进行阐述。

关键词：基因编辑 CRISPR Cas sgRNA 脱靶效应

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PET薄膜的亲水改性研究

表面技术 2023年第4期52卷 374-380页

作者：丁蕊蕊潘均安阳范文苏昊橼陈志琪卓志宁丁华畅郑皙月周馨怡冯泳婷广州医科大学基础医学院生物医学工程系广州511436

目的探索对聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)薄膜亲水改性的制备工艺,研究其是否能有效提高PET薄膜表面的亲水性。方法将PET薄膜裁剪成1 cm×4 cm的矩形样条,样条放入盛有无水乙醇的离心管中超声清洗,经烘干后再放入叔丁基过氧化氢(TBHP)溶... 详细信息

目的探索对聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)薄膜亲水改性的制备工艺,研究其是否能有效提高PET薄膜表面的亲水性。方法将PET薄膜裁剪成1 cm×4 cm的矩形样条,样条放入盛有无水乙醇的离心管中超声清洗,经烘干后再放入叔丁基过氧化氢(TBHP)溶液中进行引发反应,引发完成的PET薄膜样条依次用无水乙醇、水超声清洗后放入PVP溶液进行改性,最后超声清洗并烘干放置24 h进行接触角测试与红外光谱测试,分别评价PET薄膜的亲水性与表面成分变化。结果使用不同PVP进行改性,PVP-K90对PET薄膜的改性效果最佳,接触角下降最明显,其接触角为21.3°。研究不同浓度TBHP对接触角的影响,随着TBHP浓度增加,接触角逐渐减小,TBHP浓度为1%时,其接触角为28°。探究不同浓度PVP-K90对接触角的影响,随着PVP-K90浓度增加,接触角呈现先减小后略有增大的变化趋势,PVP-K90浓度为5%时达到最小值(24.2°)。最佳配方和工艺为:5%PVP-K90+1%TBHP,温度80℃,转速600 r/min,反应时间1 h。PET薄膜的接触角从改性前的81.7°下降到改性后的29.5°,亲水性显著提高。亲水改性PET薄膜超声清洗20 min以上,接触角仍保持不变,红外光谱在3 427、1 608 cm^(-1)的特征峰明显增强,PVP以化学键合方式接枝在PET表面。结论以TBHP作引发剂,PVP-K90作改性剂,通过表面接枝方法可有效提高PET薄膜的亲水性。

关键词： PET薄膜聚乙烯吡咯烷酮亲水改性表面接枝接触角

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黏度法测定γ-聚谷氨酸含量

食品与发酵工业 2011年第2期37卷 176-178页

作者：姚俊孙荣斌魏钦俊曹新鲁雅洁南京医科大学基础医学院生物技术系江苏南京210029 南京医科大学药学院江苏南京210029

采用乌氏黏度计测定了不同浓度下γ-聚谷氨酸稀溶液的黏度,由哈金斯(Huggins)方程和克拉默(Kraemer)方程结合外推法求得室温下γ-聚谷氨酸在中性水溶液中的特性黏度[η]为7.830 L/g,并推导出由溶液的相对黏度ηr与增比黏度ηsp计算γ-... 详细信息

采用乌氏黏度计测定了不同浓度下γ-聚谷氨酸稀溶液的黏度,由哈金斯(Huggins)方程和克拉默(Kraemer)方程结合外推法求得室温下γ-聚谷氨酸在中性水溶液中的特性黏度[η]为7.830 L/g,并推导出由溶液的相对黏度ηr与增比黏度ηsp计算γ-聚谷氨酸溶液浓度的公式。依据溶液黏度与浓度的关系,可以简便、快速、准确地估算出γ-聚谷氨酸的浓度。

关键词： γ-聚谷氨酸黏度浓度

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中华耳鼻咽喉头颈外科杂志 2018年第11期53卷 830-837页

作者：陈智斌浦懋懋姚俊曹新程雷南京医科大学第一附属医院耳鼻咽喉科 210029 南京医科大学基础医学院生物技术系 211166

目的筛选内耳中靶向调控Notch信号通路的关键microRNA,验证其对Notch信号通路的调控作用。方法构建Notch信号通路相关基因与microRNA相互作用网络,筛选核心基因并提取Core-Notch子网络,再通过拓扑学分析与GO分析筛选对Notch信号通路具... 详细信息

目的筛选内耳中靶向调控Notch信号通路的关键microRNA,验证其对Notch信号通路的调控作用。方法构建Notch信号通路相关基因与microRNA相互作用网络,筛选核心基因并提取Core-Notch子网络,再通过拓扑学分析与GO分析筛选对Notch信号通路具有调控作用的关键microRNA,并在体内、外水平进行验证。结果以筛选的microRNA-384-5p(miR-384-5p)为研究对象,预测其对Notch信号通路具有较强调控作用。实验结果显示,miR.384-5p在小鼠脑与耳蜗组织中特异性表达;miR-384-5p-mimic转染HeLa细胞后,Notch1的表达水平显著下调;双荧光素酶报告基因检测进一步验证了miR-384-5p对Notch信号通路中Notch1和Dll4的负调控作用。结论基于构建的Core-Notch网络筛选内耳发育相关的microRNA,筛选出来的miR-384-5p分子可靶向调控Notch信号通路,可作为潜在的毛细胞修复的干预靶点。

关键词：受体,Notch 耳,内毛细胞,听觉 miR-384-5p