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蝽防御素应用于断奶仔猪饲粮中的耐受性及影响

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动物营养学报 2024年第1期36卷 210-223页

作者：安肖凯李帅胡胜兰王丽杨雪芬王文策肖昊华南农业大学动物科学学院广州510642 广东省农业科学院动物科学研究所农业部华南动物营养与饲料重点实验室畜禽育种国家重点实验室岭南现代农业科学与技术广东省实验室茂名分中心广东省畜禽育种与营养研究重点实验室广州510640

本试验通过对断奶仔猪生长性能、脏器指数、血清生化指标、抗氧化能力、机体免疫、肠道健康等指标的检测,探究蝽防御素(THA)在断奶仔猪饲粮中的耐受性及影响。选取平均初始体重为(6.05±0.03)kg的21日龄杜×长×大断奶仔猪108头,采用完... 详细信息

本试验通过对断奶仔猪生长性能、脏器指数、血清生化指标、抗氧化能力、机体免疫、肠道健康等指标的检测,探究蝽防御素(THA)在断奶仔猪饲粮中的耐受性及影响。选取平均初始体重为(6.05±0.03)kg的21日龄杜×长×大断奶仔猪108头,采用完全随机分组试验设计,根据体重随机分为3组,每组6个重复,每个重复6头猪,公母各占1/2。对照组饲喂玉米-豆粕型基础饲粮,试验组饲喂在基础饲粮中分别添加400、4000 mg/kg THA的试验饲粮,试验期28 d。试验期间每2周称重,观察试验猪临床症状,记录每个重复的采食量。试验结束后,挑选每个重复中最接近该重复平均体重的猪进行屠宰采样。结果表明:1)与对照组相比,饲粮中添加400 mg/kg THA能显著提高断奶仔猪平均日采食量(P0.05)。2)与对照组相比,饲粮中添加400和4000 mg/kg THA对断奶仔猪的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏指数均无显著影响(P>0.05)。3)与对照组相比,饲粮中添加400和4000 mg/kg THA对血常规指标均无显著影响(P>0.05)。4)与对照组相比,饲粮中添加400 mg/kg THA可显著降低血清中白蛋白的含量(P组相比,饲粮中添加400和4000 mg/kg THA对仔猪的血清抗氧化指标均无显著影响(P>0.05)。6)与对照组相比,饲粮中添加4000 mg/kg THA可显著提高血清中白细胞介素-8(IL-8)的含量(P组相比,饲粮中添加400和4000 mg/kg THA对仔猪空肠黏膜中紧密连接蛋白基因相对表达量均无显著影响(P>0.05)。8)与对照组相比,饲粮中添加400 mg/kg THA可显著提高仔猪回肠中淀粉酶的活性(P组相比,饲粮中添加400 mg/kg THA可显著增加空肠绒毛高度(P<0.05)。饲粮中添加4000 mg/kg THA对断奶仔猪肠道形态无不利影响,同时对肾脏和肝脏没有损伤。添加THA可提高断奶仔猪免疫力,改善肠道形态,提高小肠消化吸收能力。综上所述,饲粮中添加400 mg/kg THA能降低断奶仔猪腹泻,改善肠道健康,而饲粮中添加4000 mg/kg THA对断奶仔猪属于安全水平。

关键词：抗菌肽蝽防御素断奶仔猪耐受性

山羊circFDXR的鉴定及其在卵巢颗粒细胞中高效表达的研究

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中国畜牧兽医 2024年第6期51卷 2330-2341页

作者：刘杰李之瀚郭聪慧冯光杭薛文哲刘德武柳广斌孙宝丽郭勇庆邓铭邹娴李耀坤华南农业大学动物科学学院广州510642 华南农业大学畜禽育种国家地方联合工程研究中心广州510642 华南农业大学广东省农业动物基因组学与分子育种重点实验室广州510642 广东省农业科学院动物科学研究所畜禽育种国家重点实验室广东省畜禽育种与营养研究重点实验室广州510640

【目的】鉴定山羊环状RNA(circular RNA,circRNA)铁氧还蛋白还原酶(circFDXR)的表达,建立其在山羊原代卵巢颗粒细胞中的高效表达方式。【方法】利用PCR扩增、DNA测序、RNase R酶消化、实时荧光定量PCR鉴定circFDXR的环状性质。通过核质... 详细信息

【目的】鉴定山羊环状RNA(circular RNA,circRNA)铁氧还蛋白还原酶(circFDXR)的表达,建立其在山羊原代卵巢颗粒细胞中的高效表达方式。【方法】利用PCR扩增、DNA测序、RNase R酶消化、实时荧光定量PCR鉴定circFDXR的环状性质。通过核质分离、荧光原位杂交(FISH)检测circFDXR亚细胞定位。利用同源重组将circFDXR的线性序列无缝克隆至慢病毒载体pLC5-ciR,转染至293T细胞包装病毒后进行病毒滴度测定,并确定最佳感染复数(MOI),并以最佳MOI感染山羊原代卵巢颗粒细胞,通过实时荧光定量PCR检测过表达效率,并测序验证circFDXR是否正确环化。【结果】山羊circFDXR主要定位于卵巢颗粒细胞的细胞质中,耐受RNase R酶的消化。成功构建circFDXR慢病毒过表达载体,浓缩病毒滴度为5.49×10~9 TU/mL,感染山羊卵巢颗粒细胞的最佳MOI为100。实时荧光定量PCR结果显示,与对照组相比,过表达组circFDXR表达量极显著升高(P<0.01),测序结果显示过表达的circFDXR可以正确环化。【结论】circFDXR主要定位于卵巢颗粒细胞的细胞质中,相比线性RNA具有更高的稳定性。利用慢病毒包装的circFDXR在山羊原代卵巢颗粒细胞中可以正确环化,本试验结果为进一步研究circFDXR在山羊原代卵巢颗粒细胞中的功能奠定了理论基础。

关键词：山羊 circFDXR 慢病毒包装卵巢颗粒细胞

Dkk2基因对雌性小鼠卵泡发育过程的功能探究

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中国畜牧杂志 2024年

作者：谈峰陈高贵陈亚茹陈大可彭先文苗义良梅书棋周佳伟李凤娥华中农业大学农业农村部猪遗传育种重点实验室农业动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室动物胚胎工程及分子育种湖北省重点实验室湖北省农业科学院畜牧兽医研究所湖北洪山实验室

卵巢颗粒细胞的生长对哺乳动物卵泡发育至关重要，本研究旨在探究Dkk2对雌性小鼠卵泡发育的影响，并对其潜在的调控机制进行分析。运用Crispr-cas9的方法构建Dkk2基因敲除C57BL/6小鼠，通过免疫荧光、免疫组化和蛋白免疫印迹等实验探究... 详细信息

卵巢颗粒细胞的生长对哺乳动物卵泡发育至关重要，本研究旨在探究Dkk2对雌性小鼠卵泡发育的影响，并对其潜在的调控机制进行分析。运用Crispr-cas9的方法构建Dkk2基因敲除C57BL/6小鼠，通过免疫荧光、免疫组化和蛋白免疫印迹等实验探究了Dkk2基因敲除对小鼠卵泡发育的影响及其作用机制。结果显示：相比野生型小鼠，Dkk2基因敲除小鼠的产仔数和原始卵泡显著减少、卵泡闭锁显著升高；抑制Dkk2的表达会显著促进小鼠卵巢颗粒细胞凋亡，抑制细胞增殖；对8周龄Dkk2基因敲除小鼠的卵巢组织进行转录组测序发现，Dkk2可能通过Wnt信号通路调控卵巢颗粒细胞的增殖和凋亡。本研究揭示了Dkk2在小鼠卵泡发育过程中的作用，可为哺乳动物繁殖性状的遗传改良提供新的靶基因。

关键词： Dkk2 Wnt 卵巢颗粒细胞凋亡卵泡发育产仔数小鼠

ALV-J感染对鸡脾脏巨噬细胞天然免疫因子的影响

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中国家禽 2024年第3期46卷 44-50页

作者：张曦谢婷婷冯敏张细权华南农业大学动物科学学院广东广州510642 农业农村部鸡遗传育种与繁殖重点试验室广东广州510642

为探究J亚群禽白血病病毒(Avian leukosis virus subgroup J,ALV-J)对鸡脾脏巨噬细胞天然免疫反应的影响,试验利用密度梯度离心法和贴壁法,从鸡脾脏组织中分离得到单核细胞,并通过显微镜观察培养至24 h、72 h、120 h单核细胞的分化过程... 详细信息

为探究J亚群禽白血病病毒(Avian leukosis virus subgroup J,ALV-J)对鸡脾脏巨噬细胞天然免疫反应的影响,试验利用密度梯度离心法和贴壁法,从鸡脾脏组织中分离得到单核细胞,并通过显微镜观察培养至24 h、72 h、120 h单核细胞的分化过程;通过PCR扩增ALV-J特异性引物H5/H7,验证脾脏巨噬细胞对ALV-J的易感情况;同时,通过qPCR验证感染ALV-J后鸡原代脾脏巨噬细胞中炎性因子、干扰素及肿瘤抑制因子的表达。结果显示:单核细胞分化至第120 h形成形态正常的巨噬细胞,通过流式细胞技术检测鸡巨噬细胞表面特异性标记蛋白发现,84.9%的细胞为KUL01阳性细胞;鸡原代脾脏巨噬细胞对ALV-J易感,并且ALV-J可整合进鸡原代脾脏巨噬细胞基因组中;对感染ALV-J的鸡脾脏巨噬细胞进行形态观察,发现ALV-J感染导致鸡脾脏巨噬细胞形态逐渐萎缩直至死亡;ALV-J感染6 h、12 h、24 h及48 h可诱导鸡原代脾脏巨噬细胞炎性因子(IL-1β、IL-6)的表达显著上调,在ALV-J感染24 h、48 h诱导肿瘤抑制因子(TNF-α)的表达显著上调(P基因(CH25H、STAT1、PKR)表达,后期(感染48 h)抑制部分干扰素刺激基因(OAS、STAT1、ZAP、Mx、PKR)的表达。研究表明ALV-J感染鸡原代脾脏巨噬细胞早期可诱发强烈的天然免疫反应,后期可能通过抑制IFN-β及部分干扰素刺激基因的表达实现免疫逃逸。

关键词：鸡鸡原代脾脏巨噬细胞 ALV-J感染天然免疫因子

白羽王鸽CAPN11基因SNPs鉴定及其对屠宰性状的影响

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农业生物技术学报 2024年第10期32卷 2381-2390页

作者：向进龙霞庞金兰成敏张依裕杨阿明贵州大学动物科学学院/高原山地动物遗传育种与繁殖重点实验室/贵州省动物遗传育种与繁殖重点实验室黔西市农业农村局贵州裕黔农业生物科技发展有限公司

白羽王鸽（Columba livia）是重要的经济禽类，探究其钙蛋白酶11 （calpain 11, CAPN11）基因多态性与屠宰性状的关系，对其屠宰性状的遗传改良和经济性状提升具有重要意义。本研究采用PCR直接测序法对白羽王鸽CAPN11基因SNP进行筛查，... 详细信息

白羽王鸽（Columba livia）是重要的经济禽类，探究其钙蛋白酶11 （calpain 11, CAPN11）基因多态性与屠宰性状的关系，对其屠宰性状的遗传改良和经济性状提升具有重要意义。本研究采用PCR直接测序法对白羽王鸽CAPN11基因SNP进行筛查，并分析SNP位点与白羽王鸽屠宰性状的关联性。通过鉴定白羽王鸽的CAPN11基因的SNPs发现，在外显子6区的第636和738位发现g.3641644 C>T和g.3641746 C>T 2个同义突变，均存在3种基因型，优势基因型和优势等位基因均为CT和C,0.252检验显示，2个SNPs位点的基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡状态（P>0.05）；连锁不平衡分析显示，2个SNPs位点之间不满足D'>0.80,r2>0.33，表明不存在强连锁不平衡效应；关联性分析显示，g.3641644 C>T位点对宰前活重的影响达到显著水平（PT位点对白羽王鸽的宰前活重、屠体重、全净膛重、胸肌重和腿肌重等屠宰性状的影响均达到了显著水平（P实验群体中共检测到4种单倍型和10种双倍型，双倍型H2H2 （CCTT）个体的宰前活重、屠体重、全净膛重和腿肌重均显著高于其他9种双倍型（P基因的mRNA二级结构变化，可能会影响转录和翻译效率，进而影响屠宰性能。综上，CAPN11基因能够作为潜在候选基因用于改善白羽王鸽屠宰性状，为加速白羽王鸽育种选育进程提供一定的理论依据，为提升品种屠宰性状的分子标记选育工作提供参考。

关键词：白羽王鸽钙蛋白酶11基因(CAPN11) SNPs 屠宰性状

好氧堆肥对畜禽粪便氟喹诺酮类抗性基因消减的研究进展

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黑龙江畜牧兽医 2024年第2期 22-27页

作者：陆婷婷刘卿黄楷雯张欣林海尧普梓伦吴银宝华南农业大学动物科学学院广州510642 岭南现代农业科学与技术广东省实验室茂名分中心广东茂名525000 广东省农业动物基因组学与分子育种重点实验室广州510642

在畜禽养殖业中,氟喹诺酮类抗菌药(fluoroquinolones antibiotics, FQs)的广泛使用导致氟喹诺酮类抗性基因(fluoroquinolones resistance genes, FRGs)在环境中传播,对环境生态造成威胁。目前,好氧堆肥是去除FRGs的有效手段之一。笔者... 详细信息

在畜禽养殖业中,氟喹诺酮类抗菌药(fluoroquinolones antibiotics, FQs)的广泛使用导致氟喹诺酮类抗性基因(fluoroquinolones resistance genes, FRGs)在环境中传播,对环境生态造成威胁。目前,好氧堆肥是去除FRGs的有效手段之一。笔者综述了畜禽粪便好氧堆肥中不同因素[FQs、微生物群落、可移动遗传元件(mobile genetic elements, MGEs)、环境因素(温度、pH值、含水量、碳氮比、电导率等)和重金属]对FRGs去除效果的影响,旨在为FRGs的有效控制提供参考。

关键词：畜禽粪便好氧堆肥氟喹诺酮类抗菌药氟喹诺酮类抗性基因

PB试验结合BBD响应面法优化纳豆γ-聚谷氨酸发酵条件

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食品工业科技 2024年第1期45卷 208-215页

作者：严德林黄雷邱婧陈世浪梅芷晴张凯旋杨存义高向阳华南农业大学食品学院广东省功能食品活性物重点实验室广东广州510642 华南农业大学广州都柏林国际生命科学与技术学院广东广州510642 华南农业大学农学院广东省分子育种重点实验室广东广州510642

为探究发酵纳豆γ-聚谷氨酸(poly-γ-glutamic acid,γ-PGA)产量和感官品质的最佳发酵条件,本实验以纳豆发酵后的γ-PGA产量和感官评价的综合评分为指标,利用单因素实验、Plackett-Burman试验设计、最陡爬坡试验和Box-Behnken响应面法... 详细信息

为探究发酵纳豆γ-聚谷氨酸(poly-γ-glutamic acid,γ-PGA)产量和感官品质的最佳发酵条件,本实验以纳豆发酵后的γ-PGA产量和感官评价的综合评分为指标,利用单因素实验、Plackett-Burman试验设计、最陡爬坡试验和Box-Behnken响应面法优化纳豆发酵工艺。确定纳豆的最佳发酵条件为:大豆浸泡pH7.2,发酵温度37.10℃,发酵时间24.20 h,接种量4.00%,装瓶量19.90%,在此优化条件下,γ-PGA产量达3.65 mg/g,感官评分为31.67,综合评分为10.04,实验结果与模型预测值无显著性差异,稳定可靠。

关键词：纳豆 γ-聚谷氨酸感官评价 Plackett-Burman 试验设计 Box-Behnken 响应面法

PGC介导的TMEM182基因敲除性腺嵌合体鸡的制备

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中国家禽 2024年第9期46卷 18-25页

作者：温华强陈家辉黄振文钟菁陈庚华聂庆华张细权张德祥陆阳清罗文华南农业大学动物科学学院广东广州510642 广东省农业动物基因组学与分子育种重点实验室广东广州510642 广西大学动物科学技术学院广西南宁530004

为深入研究TMEM182基因在鸡体内的功能和表现,试验采用原始生殖细胞介导法,利用CRISPR/Cas9介导的HMEJ基因编辑技术,对体外培养的原始生殖细胞TMEM182基因进行敲除,以期产生TMEM182基因缺陷性腺嵌合体鸡。选择3个sgRNA靶向TMEM182基因... 详细信息

为深入研究TMEM182基因在鸡体内的功能和表现,试验采用原始生殖细胞介导法,利用CRISPR/Cas9介导的HMEJ基因编辑技术,对体外培养的原始生殖细胞TMEM182基因进行敲除,以期产生TMEM182基因缺陷性腺嵌合体鸡。选择3个sgRNA靶向TMEM182基因的第二外显子,利用T7E1进行基因打靶效率检测。对体外培养的PGCs进行外源基因mCherry定点插入,引起TMEM182基因插入突变,通过流式分选获得mCherry+PGCs。将mCherry+PGCs注射到发育至2.5 d的受体鸡胚,观察外源PGCs的性腺整合情况。结果显示:TMEM182-sgRNA1的打靶效率最高;通过将sgRNA1与模板质粒共转染PGCs,得到能稳定表达红色荧光的mCherry+PGCs;孵化第6天,在受体鸡胚性腺能明显观察到发出红色荧光的PGCs,最终孵化出10只小鸡。研究表明:利用CRISPR/Cas9技术对鸡PGCs进行基因编辑,制备性腺嵌合体鸡是一种高效、稳定的制备基因编辑鸡的方法。

关键词：鸡 CRISPR/Cas9 PGCs TMEM182基因基因编辑

猪IZUMO2蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

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中国畜牧杂志 2024年第8期60卷 399-404页

作者：刘松柏李菊蒋明财朱文俊张新科李莉卫恒习张守全华南农业大学动物科学学院国家生猪种业工程技术研究中心广东省农业动物基因组学与分子育种重点实验室广东广州510642

IZUMO2蛋白是公猪精液中与其繁殖性能密切相关的一种蛋白。为进一步确定IZUMO2蛋白在公猪组织和细胞上的表达定位,本试验通过cDNA末端快速扩增(Rapid Amplification of cDNA Ends,RACE)技术验证猪IZUMO2核苷酸CDS全长序列,构建原核表达... 详细信息

IZUMO2蛋白是公猪精液中与其繁殖性能密切相关的一种蛋白。为进一步确定IZUMO2蛋白在公猪组织和细胞上的表达定位,本试验通过cDNA末端快速扩增(Rapid Amplification of cDNA Ends,RACE)技术验证猪IZUMO2核苷酸CDS全长序列,构建原核表达质粒pET-28a-IZUMO2,并在大肠杆菌中异源表达。将IZUMO2重组蛋白免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体,利用间接ELISA和Western Blot测定多克隆抗体效价及特异性反应。结果表明:猪IZUMO2核苷酸CDS序列全长为627 bp,信号肽序列为60 bp,成功构建pET-28a-IZUMO2原核表达载体;Western Blot和SDS-PAGE结果表明,IZUMO2重组蛋白分子质量为22ku,主要以包涵体形式存在,最佳表达条件是0.4mmol/L的IPTG诱导4h;切胶纯化回收的蛋白满足免疫需求,制备的多克隆抗体效价达1:128 000,可以特异性识别猪IZUMO2重组蛋白。本研究验证了猪IZUMO2核苷酸的CDS全长序列,制备了猪IZUMO2原核蛋白和猪IZUMO2多克隆抗体,为IZUMO2蛋白的表达定位以及功能探究提供了试验基础。

关键词：猪 IZUMO2蛋白原核表达切胶纯化多克隆抗体