猪IZUMO2蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

作     者：刘松柏 李菊 蒋明财 朱文俊 张新科 李莉 卫恒习 张守全 

作者机构：华南农业大学动物科学学院国家生猪种业工程技术研究中心广东省农业动物基因组学与分子育种重点实验室广东广州510642 

出 版 物：《中国畜牧杂志》 (Chinese Journal of Animal Science)

年 卷 期：2024年第60卷第8期

页      面：399-404页

学科分类：0905[农学-畜牧学] 09[农学] 

基　　金：国家自然科学基金(32272873) 广东省现代农业生产体系(2023KJ126) 

主　　题：猪 IZUMO2蛋白 原核表达 切胶纯化 多克隆抗体 

摘      要：IZUMO2蛋白是公猪精液中与其繁殖性能密切相关的一种蛋白。为进一步确定IZUMO2蛋白在公猪组织和细胞上的表达定位,本试验通过cDNA末端快速扩增(Rapid Amplification of cDNA Ends,RACE)技术验证猪IZUMO2核苷酸CDS全长序列,构建原核表达质粒pET-28a-IZUMO2,并在大肠杆菌中异源表达。将IZUMO2重组蛋白免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体,利用间接ELISA和Western Blot测定多克隆抗体效价及特异性反应。结果表明:猪IZUMO2核苷酸CDS序列全长为627 bp,信号肽序列为60 bp,成功构建pET-28a-IZUMO2原核表达载体;Western Blot和SDS-PAGE结果表明,IZUMO2重组蛋白分子质量为22ku,主要以包涵体形式存在,最佳表达条件是0.4mmol/L的IPTG诱导4h;切胶纯化回收的蛋白满足免疫需求,制备的多克隆抗体效价达1:128 000,可以特异性识别猪IZUMO2重组蛋白。本研究验证了猪IZUMO2核苷酸的CDS全长序列,制备了猪IZUMO2原核蛋白和猪IZUMO2多克隆抗体,为IZUMO2蛋白的表达定位以及功能探究提供了试验基础。