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鸭坦布苏病毒单克隆抗体的制备和治疗效果分析

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中国兽医杂志 2024年第2期60卷 27-31页

作者：王丹娜乌兰李三兆丰华生物科技(南京)有限公司北京生物医药科技中心北京大兴102600

为了制备、筛选和评价治疗鸭坦布苏病毒(DTMUV)感染的中和抗体,本试验克隆DTMUV E基因,连接至原核表达载体pET-30a(+),转化至大肠杆菌(***)DH5α感受态,提取质粒,鉴定重组质粒pET30-E,转化*** BL21感受态,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IP... 详细信息

为了制备、筛选和评价治疗鸭坦布苏病毒(DTMUV)感染的中和抗体,本试验克隆DTMUV E基因,连接至原核表达载体pET-30a(+),转化至大肠杆菌(***)DH5α感受态,提取质粒,鉴定重组质粒pET30-E,转化*** BL21感受态,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后,通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析E蛋白表达,使用镍柱亲和层析纯化E蛋白,将E蛋白与弗氏佐剂混合、乳化,免疫6周龄雌性BALB/c小鼠3次后,取小鼠脾脏,分离脾细胞,在聚乙二醇(PEG)的作用下,将脾细胞与SP2/0细胞融合,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)筛选分泌抗E蛋白抗体的杂交瘤细胞株,通过Western blot进行单克隆抗体鉴定,通过间接免疫荧光技术检测DTMUV,病毒中和试验评价单克隆抗体中和DTMUV感染的能力,并评价单克隆抗体治疗DTMUV感染小鼠的能力。结果显示,含质粒pET30-E的*** BL21经诱导后可在裂解的沉淀物中表达E蛋白;制备的E蛋白单克隆抗体4A1可以与E蛋白发生免疫反应,不与鸭A型肝炎病毒、呼肠孤病毒、新城疫病毒、细小病毒和H9亚型禽流感病毒发生交叉反应;4A1株杂交瘤细胞株分泌的抗体对DTMUV具有中和活性,且能够很好地识别DTMUV并与之发生中和反应,可完全清除感染小鼠血液中的DTMUV。结果表明,本试验制备的单克隆抗体4A1在应对DTMUV感染方面具有潜在治疗价值。

关键词：鸭坦布苏病毒单克隆抗体中和活性治疗效果

基因递送中阳离子脂质体结构对转染效率及细胞毒性的影响研究进展

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中国药理学与毒理学杂志 2024年第3期38卷 220-231页

作者：邢浩宇孙洁芳董慧胜高千龙潘琪霏马茜李迎云南中医药大学中药学院云南昆明650500 北京茵诺医药科技有限公司北京100915

阳离子脂质体在基因治疗和基因沉默领域被广泛应用,其数量繁多,结构多样,有优化和改善基因递送行为的功能,随着基因治疗研究的逐渐深入,新型阳离子脂质体也被不断开发。阳离子脂质体主要有4个组成部分,即亲水的阳离子头部、疏水的脂质... 详细信息

阳离子脂质体在基因治疗和基因沉默领域被广泛应用,其数量繁多,结构多样,有优化和改善基因递送行为的功能,随着基因治疗研究的逐渐深入,新型阳离子脂质体也被不断开发。阳离子脂质体主要有4个组成部分,即亲水的阳离子头部、疏水的脂质尾部、连接键以及辅助脂质,每个部分的结构对基因递送中阳离子脂质的转染效率和细胞毒性具有重要影响。可电离阳离子脂质细胞毒性较低,已有产品上市。本综述可为阳离子脂质体的设计提供一个概念框架,为阳离子脂质体的选择提供一定理论支持。

关键词：阳离子脂质体可电离脂质结构转染效率细胞毒性

脂质纳米药物体内过程影响因素及药动学检测技术研究进展

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中国药理学与毒理学杂志 2024年第9期38卷 701-709页

作者：董慧胜邢浩宇高千龙潘琪菲马茜李迎孙洁芳云南中医药大学中药学院云南昆明650500 北京茵诺医药科技有限公司北京100915

过去30年,纳米药物递送系统(NDDS)成为与创新药物并驾齐驱且具有广泛应用前景的药物研发方向。然而,对NDDS体内过程基本认知的缺乏、有限的药动学相关研究手段及无法有效支持上游药物构建和下游药理毒理评价,成为了NDDS临床转化的技术... 详细信息

过去30年,纳米药物递送系统(NDDS)成为与创新药物并驾齐驱且具有广泛应用前景的药物研发方向。然而,对NDDS体内过程基本认知的缺乏、有限的药动学相关研究手段及无法有效支持上游药物构建和下游药理毒理评价,成为了NDDS临床转化的技术瓶颈。脂质纳米药物(LND)具有良好生物相容性,是工业转化最为成功的NDDS。本文围绕LND理化性质(粒径、形状、表面电位)、LND进入体内后表面蛋白冠组成及免疫系统和病理状态等体内微环境对药物吸收、分布、释放的影响进行综述,总结LND体内过程调控机制,介绍基于先进的光谱和质谱技术对生物基质中LND的动态载体粒子/解聚分子比,动态游离/包裹态药物比进行时空分布的解析方法,最后对该研究领域目前存在的问题和未来发展方向进行概括,以期为NDDS体内过程解析研究提供参考。

关键词：脂质纳米药物递送系统药动学活体成像探针液质联用

茯苓运化颗粒治疗2型糖尿病大鼠的非靶向代谢组学分析

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中国实验方剂学杂志 2024年

作者：田孟尧罗珂珂王梦晓胡天宝李洪梅何宗源杨立新郝莉雨司南刘玉洋边宝林王宏洁周严严中国中医科学院中药研究所北京精医和生医药科技有限公司

目的：基于非靶向代谢组学技术分析茯苓运化颗粒对2型糖尿病（T2DM）大鼠血清内源性差异代谢物的调控作用，明确茯苓运化颗粒发挥改善T2DM作用的代谢调控途径。方法：70只SPF级大鼠，雌雄各半，随机分为空白组、模型组、茯苓运化颗粒高... 详细信息

目的：基于非靶向代谢组学技术分析茯苓运化颗粒对2型糖尿病（T2DM）大鼠血清内源性差异代谢物的调控作用，明确茯苓运化颗粒发挥改善T2DM作用的代谢调控途径。方法：70只SPF级大鼠，雌雄各半，随机分为空白组、模型组、茯苓运化颗粒高、中、低剂量组(以生药计，20.70、10.35、5.18 g·kg-1)及阳性药组(盐酸吡格列酮片8.1 mg·kg-1)。除空白组外，其余均以高糖高脂饲料喂养联合腹腔注射链脲佐菌素（STZ）方法构建T2DM大鼠模型。造模成功后，给药组灌胃给予相应药物治疗，空白组及模型组灌胃给予等体积生理盐水，1次/d，给药28 d。给药期间检测各组大鼠空腹血糖、糖化血红蛋白（GHbA1c）水平，给药结束后采用苏木素-伊红（HE）染色观察大鼠肝组织的病理形态变化。采用超高效液相色谱-线性离子阱-静电场轨道阱高分辨质谱法（UPLC-LTQ-Orbitrap MS）检测大鼠血清内源性代谢物水平，通过主成分分析（PCA）和正交偏最小二乘法-判别分析（OPLS-DA）处理数据，筛选变量重要性投影（VIP）值>1，P1的差异代谢物，并进行通路富集分析。通过绘制受试者工作特征（ROC）曲线对筛选得到的差异代谢物进行诊断评价。结果：与空白组比较，模型组大鼠空腹血糖水平显著升高（P<0.01），GHbA1c含量有增高趋势，大鼠胰腺组织明显损伤，胰岛数量减少，胰岛β细胞明显减少、萎缩、肿大；与模型组比较，茯苓运化颗粒高剂量组和阳性药组大鼠给药2周后，空腹血糖明显降低（P<0.05，P<0.01），茯苓运化颗粒高剂量组大鼠GHbA1c含量明显降低（P<0.05），茯苓运化颗粒高、中、低剂量组大鼠胰腺组织病变减轻。非靶向代谢组学结果显示，空白组和模型组筛选到甘油磷酸胆碱、牛磺去氧胆酸、11顺视黄醇等46个差异代谢物发生明显变化，提示T2DM主要影响了大鼠体内初级胆汁酸生物合成、D-氨基酸代谢、类固醇激素生物合成、甘油磷脂代谢等生物过程。茯苓运化颗粒干预后，8个差异代谢物的水平明显回调，通路富集分析发现，药物干预主要涉及D-氨基酸代谢，视黄醇的新陈代谢，甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸的代谢，色氨酸代谢等代谢途径。ROC曲线进一步分析发现，11顺视黄醇、D-哌啶酸、D-丝氨酸、硫酸对甲酚4个特征性差异标志物对于茯苓运化颗粒治疗T2DM具有较高的诊断价值。结论：茯苓运化颗粒可改善T2DM大鼠症状，其机制可能与调节差异代谢物，调控氨基酸类代谢通路和视黄醇代谢通路相关。

关键词：茯苓运化颗粒 2型糖尿病超高效液相色谱-线性离子阱-静电场轨道阱质谱法(UPLC-LTQ-Orbitrap MS) 非靶向代谢组学受试者工作特征曲线

测定地克珠利混悬液中的聚山梨酯20含量和枸橼酸含量的方法

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中国兽药杂志 2024年第2期58卷 58-65页

作者：李芳孙立亚杨丽英百美达医药科技(北京)有限公司石家庄050000

利用反相高效液相色谱法和蒸发光检测器快速便捷地测定地克珠利混悬液中聚山梨酯20和枸橼酸的成分及含量。吐温20方法:HPLC条件,Thermo U3000。流速:0.5 mL/min。流动相A:水,流动相B:乙腈。用梯度洗脱。ELSD 6000,漂移管温度:115℃。气... 详细信息

利用反相高效液相色谱法和蒸发光检测器快速便捷地测定地克珠利混悬液中聚山梨酯20和枸橼酸的成分及含量。吐温20方法:HPLC条件,Thermo U3000。流速:0.5 mL/min。流动相A:水,流动相B:乙腈。用梯度洗脱。ELSD 6000,漂移管温度:115℃。气体流速:2 L/min,稀释剂:乙腈。枸橼酸方法:橼酸的色谱条件:色谱柱:Tech Mate ST C18250 mm×4.6 mm,5μm,流动相:A;20 mmol磷酸氢二钠(用磷酸调节pH至3.0)B:色谱甲醇。流动相A∶B=95∶5。流速:1.0 mL/min,柱温:30℃紫外检测波长:UV 210 nm。该方法经过验证,有较好的精密度,线性及回收率等验证结果。该方法可以实现准确的定量分析,可作为一个可靠的检测方法。

关键词：地克珠利混悬液聚山梨酯20 吐温20 枸橼酸柠檬酸

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CD47胞外区蛋白多克隆抗体的制备

国际免疫学杂志 2024年第1期47卷 19-24页

作者：刘海静苏雨萌王芊艺北京亦庄国际生物医药科技有限公司北京100176

目的制备和鉴定抗CD47胞外区蛋白多克隆抗体。方法通过逆转录PCR(reverse transcription-PCR,RT-PCR)扩增CD47分子胞外区基因序列,分别重组到原核表达载体pET32a(+)和pET31b(+)中,利用大肠杆菌表达CD47蛋白,并优化异丙基硫代半乳糖苷(is... 详细信息

目的制备和鉴定抗CD47胞外区蛋白多克隆抗体。方法通过逆转录PCR(reverse transcription-PCR,RT-PCR)扩增CD47分子胞外区基因序列,分别重组到原核表达载体pET32a(+)和pET31b(+)中,利用大肠杆菌表达CD47蛋白,并优化异丙基硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导蛋白表达工艺,表达出CD47蛋白。用纯化的CD47蛋白免疫Balb/c小鼠,获得小鼠多克隆抗体,使用亲和层析法纯化CD47多抗,并对多抗进行酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)效价检测和Western blot特异性鉴定。结果成功构建pET32a(+)-CD47和pET31b(+)-CD47重组质粒。按照实验设置不同条件诱导表达蛋白后,选出最佳表达载体pET32a(+)-CD47。在大肠杆菌中获得表达最佳蛋白表达工艺。表达制备CD47蛋白,经过五次免疫后,得到CD47多抗。用ELISA法检测制备多抗的效价能达到1∶128000。Western blot检测结果显示,自制的CD47多抗能准确检测出小鼠心脏组织样品。结论成功制备了CD47胞外区蛋白多抗,为进一步研究CD47生物学功能奠定了基础。

关键词： CD47 胞外区蛋白多克隆抗体

复合预混合饲料和维生素预混合饲料中的脂溶性维生素和水溶性维生素的含量测定方法

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天津化工 2024年第1期38卷 73-77页

作者：李芳孙立亚杨丽英成晓迅百美达医药科技(北京)有限公司河北050000

用反相HPLC建立一种快速测定脂溶性维生素(VA棕榈酸酯、VD3和VE醋酸酯)和一种快速测定水溶性维生素(维生素B1、维生素B2、维生素B6、烟酰胺)的方法,本方法具有快速、简便、高效、分离度及回收率高等特点,极大地提高了多种维生素样品中... 详细信息

用反相HPLC建立一种快速测定脂溶性维生素(VA棕榈酸酯、VD3和VE醋酸酯)和一种快速测定水溶性维生素(维生素B1、维生素B2、维生素B6、烟酰胺)的方法,本方法具有快速、简便、高效、分离度及回收率高等特点,极大地提高了多种维生素样品中脂溶性维生素和水溶性维生素的含量测定。同时测定出羟苯甲酯和羟苯丙酯的含量,为多种维生素产品的稳定性提供了依据。

关键词：多种维生素脂溶性维生素水溶性维生素羟苯甲酯羟苯丙酯高效液相色谱法

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管理会计视角下企业财务管理转型分析

老字号品牌营销 2024年第1期 117-119页

作者：牛红琴北京和心诺泰医药科技有限公司北京100020

随着市场经济的不断发展和竞争的日益激烈,企业财务管理成为不可忽视的重要内容。财务管理是企业整体管理的核心,它对企业经营决策、利润管理和成长发展起着至关重要的作用。在这样一个背景下,企业需要深入了解财务管理的关键要素,并运... 详细信息

随着市场经济的不断发展和竞争的日益激烈,企业财务管理成为不可忽视的重要内容。财务管理是企业整体管理的核心,它对企业经营决策、利润管理和成长发展起着至关重要的作用。在这样一个背景下,企业需要深入了解财务管理的关键要素,并运用现代化的管理理念和技术手段,不断完善和优化财务管理,使企业能够更好地应对市场变化和竞争压力。本文主要对管理会计视角下企业的财务管理转型进行了分析,并提出了一些建议和措施。

关键词：管理会计企业财务转型

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皮肤局部外用制剂体外透皮试验的评价研究

中国药物评价 2024年第2期41卷 165-171页

作者：姚青刘莹王晓芳高宁王苗新领先医药科技发展有限公司北京100094

目的:汇总体外透皮试验(In Vitro Permeation Test,IVPT)的设计要求和评价方法,并以Excel中函数公式计算IVPT,助力评价皮肤局部外用制剂仿制药研发质量与疗效。方法:对比美国食品药品管理局(Food and Drug Administration,FDA)、欧洲药... 详细信息

目的:汇总体外透皮试验(In Vitro Permeation Test,IVPT)的设计要求和评价方法,并以Excel中函数公式计算IVPT,助力评价皮肤局部外用制剂仿制药研发质量与疗效。方法:对比美国食品药品管理局(Food and Drug Administration,FDA)、欧洲药品管理局(European Medicines Agency,EMA)、日本医药品医疗器械综合机构(Pharmaceuticals and Medical Devices Agency,PMDA)及国家药品监督管理局(National Medical Products Administration,NMPA)相关指导原则中IVPT设计要求及评价方法,并以Excel软件中函数公式计算IVPT,与SAS软件计算结果进行比较。结果:相比于EMA和PMDA对皮肤局部外用制剂仿制药IVPT的评价标准,FDA的评价标准更适合我们对仿制药IVPT进行评价,也较容易被我国药监部门所接受。体外透皮试验除皮肤膜选择PMDA推荐的大鼠、小鼠或猪等至少任何一种动物的腹部或背部外,其他设计可参考FDA指导原则相关建议。对于IVPT结果,Execl软件函数公式计算结果与SAS软件计算结果一致。结论:可优先采用FDA的皮肤局部外用制剂仿制药IVPT指导原则设计试验,并以其评价标准进行等效性评价。此外,本研究已验证Excel替代SAS软件准确计算IVPT,可用于判断皮肤局部外用制剂仿制药研发质量及生物等效性。

关键词：皮肤局部外用制剂体外透皮试验 Excel软件生物等效性评价方法