CD47胞外区蛋白多克隆抗体的制备

作     者：刘海静 苏雨萌 王芊艺 LIU Haijing;SU Yumeng;WANG Qianyi

作者机构：北京亦庄国际生物医药科技有限公司北京100176 

出 版 物：《国际免疫学杂志》 (International Journal of Immunology)

年 卷 期：2024年第47卷第1期

页      面：19-24页

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 10[医学] 

主　　题：CD47 胞外区蛋白 多克隆抗体 

摘      要：目的制备和鉴定抗CD47胞外区蛋白多克隆抗体。方法通过逆转录PCR(reverse transcription-PCR,RT-PCR)扩增CD47分子胞外区基因序列,分别重组到原核表达载体pET32a(+)和pET31b(+)中,利用大肠杆菌表达CD47蛋白,并优化异丙基硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导蛋白表达工艺,表达出CD47蛋白。用纯化的CD47蛋白免疫Balb/c小鼠,获得小鼠多克隆抗体,使用亲和层析法纯化CD47多抗,并对多抗进行酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)效价检测和Western blot特异性鉴定。结果成功构建pET32a(+)-CD47和pET31b(+)-CD47重组质粒。按照实验设置不同条件诱导表达蛋白后,选出最佳表达载体pET32a(+)-CD47。在大肠杆菌中获得表达最佳蛋白表达工艺。表达制备CD47蛋白,经过五次免疫后,得到CD47多抗。用ELISA法检测制备多抗的效价能达到1∶128000。Western blot检测结果显示,自制的CD47多抗能准确检测出小鼠心脏组织样品。结论成功制备了CD47胞外区蛋白多抗,为进一步研究CD47生物学功能奠定了基础。