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牛奶中喹诺酮类药物残留的AlphaLISA检测方法的研究

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食品工业科技 2024年第14期45卷 264-270页

作者：马立才邢维维于莹贾良曦秦誉金兴丁亚芳北京维德维康生物技术有限公司北京100095

本文旨在建立一种可检测牛奶中喹诺酮类药物(Quinolones,QNS)残留的均相光激化学发光免疫分析方法(Amplifiedluminescent proximity homogeneous assay linkedimmune sorbent assay,AlphaLISA)。采用EDC/NHS活泼酯法在诺氟沙星分子连接6-氨基己酸作为间隔臂,制备生物素修饰诺氟沙星半抗原(Biotin-6AS-NOR),并在受体微球上偶联QNS单克隆抗体,Biotin-6AS-NOR可与牛奶样品中的QNS竞争结合喹诺酮抗体;通过优化受体微球的QNS抗体偶联量,Biotin-6AS-NOR及供/受体微球的用量等参数,以及牛奶样品的稀释方案,建立了牛奶中QNS残留的AlphaLISA检测方法。采用1:5牛奶样品稀释方案,所建立牛奶中QNS残留的AlphaLISA检测方法的检出限和定量限分别为0.19 ng/mL和0.46 ng/mL,回收率在85.97%~110.11%之间,日内和日间变异系数均小于10%,与诺氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星、氧氟沙星、培氟沙星、达氟沙星和洛美沙星的交叉反应率均高于70%。本研究所建立AlphaLISA检测方法具有灵敏度和准确度高、重复性好等优点,且在整个检测过程中不需要繁琐洗涤操作,具有较高的应用和推广价值。

关键词：喹诺酮类半抗原生物素 AlphaLISA

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新型分离纯化技术在天然产物中的应用

化学进展 2024年第5期36卷 667-678页

作者：李文蔚朱子煜浩天瑞霖谢瑶罗爱芹梁阿新北京理工大学生命学院分子医学与生物诊疗工业和信息化部重点实验室北京100081 北京东方红航天生物技术股份有限公司北京100043

天然产物是自然界生物在长久进化过程中经自然选择所保留下来的次生代谢物,因其丰富的药用价值而被广泛应用于多个领域,随着现代科学的发展,对于天然产物高纯度产品的需求也在不断增加。传统的分离方法通常存在有机溶剂消耗大、分离效... 详细信息

天然产物是自然界生物在长久进化过程中经自然选择所保留下来的次生代谢物,因其丰富的药用价值而被广泛应用于多个领域,随着现代科学的发展,对于天然产物高纯度产品的需求也在不断增加。传统的分离方法通常存在有机溶剂消耗大、分离效果差、成本高、周期长等缺点,严重制约了天然产物在各领域的发展使用。新型分离纯化技术的出现为天然产物的提取、分离和应用提供了新的思路。本文在总结现有文献的基础上,对天然产物的新型分离纯化方法进行了综述,最后对天然产物分离纯化的研究瓶颈和未来发展方向进行了总结与讨论。

关键词：天然产物分离纯化

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病毒滴度测定的新兴及改良方法进展

生物技术进展 2024年第3期14卷 377-387页

作者：杜丽萍徐明明官艳东周沙沙张杰北京义翘神州科技股份有限公司检测部北京100176

病毒滴度测定是生物制药行业重要的分析方法,广泛应用于病毒类生物制品的开发和生产、病毒清除灭活工艺验证、外源病毒检测等领域,以确保病毒类生物制剂的活性和有效性,以及生物制品的病毒安全性。因此,建立快速、简单且准确的病毒滴定... 详细信息

病毒滴度测定是生物制药行业重要的分析方法,广泛应用于病毒类生物制品的开发和生产、病毒清除灭活工艺验证、外源病毒检测等领域,以确保病毒类生物制剂的活性和有效性,以及生物制品的病毒安全性。因此,建立快速、简单且准确的病毒滴定检测方法尤为重要。总结了检测病毒滴度的传统方法、新兴以及改良方法的特点、原理及具体应用,并比较了各自的优缺点。一些新兴方法,如微滴式数字PCR、病毒定量毛细管电泳、化学发光ISH-PNA测定、激光力细胞学等改进了传统方法耗时耗力、重复性差、准确性低、结果主观性大的缺点,达到了快速、灵敏、自动化程度高、精密度高、结果更加稳健且客观的优点,但部分新方法仪器昂贵或者未广泛使用,需要根据实验目的选择合适的病毒滴定方法。

关键词：生物制药病毒清除/灭活验证病毒感染性病毒滴定

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采用高效液相色谱-高分辨质谱研究脂多糖诱导的兔炎症急性期模型代谢组学

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质谱学报 2024年第5期45卷 666-672页

作者：陈金栋王高雨陈俊苗邱一凡王文艳烟台大学药学院新型制剂与生物技术药物研究山东省高校协同创新中心分子药理和药物评价教育部重点实验室山东烟台264010 美国AB SCIEX公司北京代表处北京100015

本研究对新西兰白兔低剂量递增给予脂多糖(lipopolysaccharide,LPS),诱导炎症急性反应期模型,收集给予LPS前、给予LPS 2天和7天后的尿液样本,采用超高效液相色谱-高分辨质谱(UPLC-HRMS)技术检测,并进行非靶向代谢组学分析。利用主成分分... 详细信息

本研究对新西兰白兔低剂量递增给予脂多糖(lipopolysaccharide,LPS),诱导炎症急性反应期模型,收集给予LPS前、给予LPS 2天和7天后的尿液样本,采用超高效液相色谱-高分辨质谱(UPLC-HRMS)技术检测,并进行非靶向代谢组学分析。利用主成分分析(PCA)和偏最小二乘法判别分析(PLS-DA)法筛选差异代谢物,并通过KEGG数据库进行差异代谢通路分析。结果表明,给予LPS 2天和7天后,白兔尿液中的差异代谢物与给药前相比有显著差异,分别鉴定出41和161个差异代谢物,主要与类固醇激素生物合成通路显著相关(p生物合成通路上调,这为炎症急性反应期有关靶标验证和疾病治疗提供了信息。

关键词：代谢组学脂多糖(LPS) 差异代谢物类固醇激素高效液相色谱-高分辨质谱(UPLC-HRMS)

海洋细菌假交替单胞菌DL-6来源β-N-乙酰己糖胺酶异源表达及酶学表征

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食品科学 2024年第16期45卷 68-76页

作者：刘向歌赵子琪吴家葳于爽迟乃玉王晓辉大连大学生命健康学院辽宁大连116622 辽宁省海洋微生物工程技术研究中心辽宁大连116622 大连大学医学院辽宁大连116000 北京百奥赛图基因生物技术有限公司北京102206

从海洋细菌假交替单胞菌(Pseudoalteromonas sp.)DL-6中克隆β-N-乙酰己糖胺酶基因(PsHex),扩增至pET-28a(+),并成功在大肠杆菌BL21(DE3)中异源表达,经镍-次氮基三乙酸亲和层析纯化得到纯蛋白。结果表明:PsHex编码876个氨基酸,分子质量... 详细信息

从海洋细菌假交替单胞菌(Pseudoalteromonas sp.)DL-6中克隆β-N-乙酰己糖胺酶基因(PsHex),扩增至pET-28a(+),并成功在大肠杆菌BL21(DE3)中异源表达,经镍-次氮基三乙酸亲和层析纯化得到纯蛋白。结果表明:PsHex编码876个氨基酸,分子质量约99.46 kDa,理论等电点5.65,序列对比分析表明,Ps Hex属于糖苷水解酶GH20家族;Ps Hex蛋白最适温度30℃,最适pH 8.5,比活力11.30 U/mg,且在20℃、pH 7.5时稳定性最高;重组蛋白可降解琼脂、葡聚糖、可溶性淀粉、卡拉胶等多种底物;Na^(+)、Mg^(2+)、Fe^(3+)、K^(+)、Ca^(2+)、二硫苏糖醇、吐温-80、乙二胺四乙酸、β-巯基乙醇对酶有激活作用;Ps Hex以对硝基苯基-β-D-乙酰氨基葡萄糖苷为底物的米氏常数(K_(m))为2.523 mol/L、转化效率(K_(cat))为79.035 min^(-1)、最大反应速率(v_(max))为2.081 U/mg、K_(cat)/K_(m)=31.326。该研究为酶法降解几丁质产生N-乙酰葡萄糖胺的生产应用提供了理论参考。

关键词： β-N-乙酰己糖胺酶假交替单胞菌表达与纯化酶学性质

采用UPLC-HRMS进行脂多糖诱导的兔炎症急性期模型代谢组学研究

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质谱学报 2024年

作者：陈金栋王高雨陈俊苗邱一凡王文艳烟台大学药学院新型制剂与生物技术药物研究山东省高校协同创新中心分子药理和药物评价教育部重点实验室美国ABSCIEX公司北京代表处

研究了脂多糖（lipopolysaccharide）诱导的炎症急性反应期新西兰白兔模型尿液代谢组学，以筛选差异代谢通路，为炎症治疗提供新的思路。对新西兰白兔低剂量递增给予兔LPS，诱导炎症急性反应期模型，收集给予LPS前、给予LPS 2天和7天后... 详细信息

研究了脂多糖（lipopolysaccharide）诱导的炎症急性反应期新西兰白兔模型尿液代谢组学，以筛选差异代谢通路，为炎症治疗提供新的思路。对新西兰白兔低剂量递增给予兔LPS，诱导炎症急性反应期模型，收集给予LPS前、给予LPS 2天和7天后的尿液样本，采用超高效液相色谱-高分辨质谱（UPLC-HRMS）技术进行样品检测，并进行非靶向代谢组学分析。利用主成分分析（PCA）法和偏最小二乘法判别分析（PLS-DA）筛选差异代谢物，并通过KEGG数据库进行差异代谢通路分析。结果表明，给予LPS 2天和7天后白兔尿液中的差异代谢物与给药前比较有显著差异，分别鉴定出41和161个差异代谢物，主要与类固醇激素生物合成通路显著相关（p生物合成通路上调，为炎症急性反应期有关靶标验证和疾病的治疗提供了重要信息。

关键词：代谢组学脂多糖(LPS) 差异代谢物类固醇激素

提升酶型时间-温度指示器热稳定性的酶工程策略研究进展

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食品科学 2024年

作者：彭华康张焕芝王晨跃王垚清华大学工程物理系北京大学人民医院妇产科深圳市清生元生物技术股份有限公司

食品安全关乎消费者的身体健康。酶型时间-温度指示器可监测食品生产后的全程热累积量并产生直观的颜色变化指示食品的保质期，成为研究热点；但酶的热稳定性限制了其推广和应用。酶工程可以通过固定化、定向进化以及理性设计等策略提... 详细信息

食品安全关乎消费者的身体健康。酶型时间-温度指示器可监测食品生产后的全程热累积量并产生直观的颜色变化指示食品的保质期，成为研究热点；但酶的热稳定性限制了其推广和应用。酶工程可以通过固定化、定向进化以及理性设计等策略提高酶的热稳定性。近年来机器学习等人工智能方法也被应用于酶工程，在复杂酶结构预测和热稳定性等问题中表现出独特的优势，为酶分子设计提供了新的可能。本文介绍了酶工程改善酶热稳定性的主要策略，着重引述了酶型时间-温度指示器常用酶的热稳定性改造，并展望其未来发展方向。

关键词：酶型时间-温度指示器酶工程定向进化理性设计辅助设计

猪圆环病毒2型(PCV2)质粒标准物质研制

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中国动物传染病学报 2024年

作者：张媛王传彬顾小雪毕一鸣徐琦原霖高旭年李尔华钟凤然周智倪建强孙雨李琦翟新验刘玉良中国动物疫病预防控制中心普道(北京)标准技术有限公司广州邦德盛生物科技有限公司

针对目前我国尚无猪圆环病毒2型（PCV2）核酸标准物质的现状和实际需求，本研究选取08TJ株PCV2为原料，通过分子生物学等技术，研制了PCV2（08TJ株）质粒标准物质。利用所建立的数字PCR方法对其进行均匀性检验和稳定性评估，并委托8家... 详细信息

针对目前我国尚无猪圆环病毒2型（PCV2）核酸标准物质的现状和实际需求，本研究选取08TJ株PCV2为原料，通过分子生物学等技术，研制了PCV2（08TJ株）质粒标准物质。利用所建立的数字PCR方法对其进行均匀性检验和稳定性评估，并委托8家实验室进行合作定值和3家单位试用。结果表明，所研制的标准物质组内和组间均无统计学差异，样品均匀性良好；在-20℃、4℃、25℃和37℃条件下可分别稳定保存12个月、120 d、14 d和9 d；反复冻融10次后仍稳定；该标准物质标准值±扩增不确定度为（1.1±0.2）×104copies/μL，与实际样品互通性良好。综上所述，本研究所研制的标准物质均匀性和稳定性良好，定值准确，对提升我国PCV2实验室检测技术水平等具有重要现实意义。

关键词：猪圆环病毒标准物质均匀性稳定性

胶原蛋白肽对人牙周膜成纤维细胞损伤的保护作用

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工业微生物 2024年第2期54卷 176-178页

作者：刘爱青王海燕邹国庆李鹏程宋萃闫征北京盛美诺生物技术有限公司北京100062 北京电子科技职业学院北京100176

文章以脂多糖(LPS)为致病因子,通过刺激人牙周膜成纤维细胞(h PDLFs)建立模型,研究胶原蛋白肽(CP)对口腔的保护作用及其可能机制。结果表明,100 mg/mL以上质量浓度的CP能有效降低LPS对hPLDFs的毒性,显著提高h PLDFs的增殖能力,同时也能... 详细信息

文章以脂多糖(LPS)为致病因子,通过刺激人牙周膜成纤维细胞(h PDLFs)建立模型,研究胶原蛋白肽(CP)对口腔的保护作用及其可能机制。结果表明,100 mg/mL以上质量浓度的CP能有效降低LPS对hPLDFs的毒性,显著提高h PLDFs的增殖能力,同时也能有效降低TLR4和NF-κB的表达量,对炎症因子的分泌产生明显的影响。作用机理可能是,CP作为一种信号分子作用于TLR4,通过抑制TLR4和NF-κB的表达来抑制LPS引起的炎症反应,从而促进hPDLFs增殖。

关键词：口腔修护牙周膜成纤维细胞胶原蛋白肽炎症因子