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地黄宝源颗粒治疗糖尿病药效评价及基于UHPLC-LTQ-Orbitrap MS的成分分析和体内分布

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中国中药杂志 2024年第10期49卷 2783-2797页

作者：田孟尧王梦晓罗珂珂胡天宝李洪梅霍姝含郝莉雨司南高文雅刘玉洋边宝林王宏洁周严严中国中医科学院中药研究所北京100700 北京精医和生医药科技有限公司北京100176

地黄宝源颗粒是北京名老中医胡天宝使用并推荐治疗2型糖尿病的处方,目前已证实该方临床疗效确切。此方由7味药组成,化学组成较为复杂。该研究旨在开展地黄宝源颗粒化学成分分析,评价其治疗糖尿病药效并分析给药后血浆、肝脏、肾脏成分分... 详细信息

地黄宝源颗粒是北京名老中医胡天宝使用并推荐治疗2型糖尿病的处方,目前已证实该方临床疗效确切。此方由7味药组成,化学组成较为复杂。该研究旨在开展地黄宝源颗粒化学成分分析,评价其治疗糖尿病药效并分析给药后血浆、肝脏、肾脏成分分布,为其药效物质研究提供参考依据。研究采用UHPLC-LTQ-Orbitrap MS对地黄宝源颗粒的主要化学成分进行分析,色谱分离采用Waters ACQUITY Premier HSS T3色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm),流动相为0.1%甲酸水(A)-乙腈(B),梯度洗脱,流速0.3 mL·min^(-1);采用电喷雾离子源(ESI)在正、负离子模式下采集数据。在此基础上,糖尿病大鼠造模方法采用高糖高脂饲料喂养和腹腔注射链脲佐菌素(streptozocin,STZ) 35 mg·kg^(-1),给予地黄宝源颗粒后对空腹血糖、糖化血红蛋白等指标进行药效学评价,并对给药后血浆、肝脏及肾脏中的成分进行鉴定。根据准分子离子与二级碎片离子,结合对照品质谱特征及文献报道,从地黄宝源颗粒中共鉴定了191个成分,包括29个生物碱类,24个黄酮类,22个有机酸类,16个氨基酸类,13个环烯醚萜类,11个甾体皂苷类,9个糖类,8个苯乙醇苷类,8个核苷类,2个苯丙素类,49个其他类成分。灌胃给药后,在大鼠血浆、肝脏、肾脏中分别鉴定出83、109、98个化学成分。通过对地黄宝源颗粒化学成分鉴定及大鼠给药后体内成分分析,为后续地黄宝源颗粒的药效物质基础研究及进一步的临床应用提供科学依据。

关键词：地黄宝源颗粒糖尿病 UHPLC-LTQ-Orbitrap MS 成分鉴定入血成分组织分布

鸭坦布苏病毒单克隆抗体的制备和治疗效果分析

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中国兽医杂志 2024年第2期60卷 27-31页

作者：王丹娜乌兰李三兆丰华生物科技(南京)有限公司北京生物医药科技中心北京大兴102600

为了制备、筛选和评价治疗鸭坦布苏病毒(DTMUV)感染的中和抗体,本试验克隆DTMUV E基因,连接至原核表达载体pET-30a(+),转化至大肠杆菌(***)DH5α感受态,提取质粒,鉴定重组质粒pET30-E,转化*** BL21感受态,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IP... 详细信息

为了制备、筛选和评价治疗鸭坦布苏病毒(DTMUV)感染的中和抗体,本试验克隆DTMUV E基因,连接至原核表达载体pET-30a(+),转化至大肠杆菌(***)DH5α感受态,提取质粒,鉴定重组质粒pET30-E,转化*** BL21感受态,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后,通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析E蛋白表达,使用镍柱亲和层析纯化E蛋白,将E蛋白与弗氏佐剂混合、乳化,免疫6周龄雌性BALB/c小鼠3次后,取小鼠脾脏,分离脾细胞,在聚乙二醇(PEG)的作用下,将脾细胞与SP2/0细胞融合,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)筛选分泌抗E蛋白抗体的杂交瘤细胞株,通过Western blot进行单克隆抗体鉴定,通过间接免疫荧光技术检测DTMUV,病毒中和试验评价单克隆抗体中和DTMUV感染的能力,并评价单克隆抗体治疗DTMUV感染小鼠的能力。结果显示,含质粒pET30-E的*** BL21经诱导后可在裂解的沉淀物中表达E蛋白;制备的E蛋白单克隆抗体4A1可以与E蛋白发生免疫反应,不与鸭A型肝炎病毒、呼肠孤病毒、新城疫病毒、细小病毒和H9亚型禽流感病毒发生交叉反应;4A1株杂交瘤细胞株分泌的抗体对DTMUV具有中和活性,且能够很好地识别DTMUV并与之发生中和反应,可完全清除感染小鼠血液中的DTMUV。结果表明,本试验制备的单克隆抗体4A1在应对DTMUV感染方面具有潜在治疗价值。

关键词：鸭坦布苏病毒单克隆抗体中和活性治疗效果

紫龙金片对Ⅲ~Ⅳ期非小细胞肺癌患者生存期的影响

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中草药 2024年第18期55卷 6276-6282页

作者：游佳凤于明薇吴桐桐李姝蒙张兴涵张怀锐刘强郭秋香王笑民杨国旺首都医科大学附属北京中医医院北京100010 世界中医药学会联合会评价中心北京100101 北京市天之力医药科技开发有限公司北京100028

目的探讨紫龙金片对Ⅲ~Ⅳ期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者生存期影响及其特点。方法利用前瞻性、观察性真实世界队列研究方法,以治疗中是否应用紫龙金片将患者分为暴露队列和非暴露队列,收集患者基本信息、人口... 详细信息

目的探讨紫龙金片对Ⅲ~Ⅳ期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者生存期影响及其特点。方法利用前瞻性、观察性真实世界队列研究方法,以治疗中是否应用紫龙金片将患者分为暴露队列和非暴露队列,收集患者基本信息、人口学资料、肿瘤疾病学资料、肿瘤治疗资料、生活质量等,根据紫龙金片暴露与否、紫龙金片暴露强度及亚组分析等方面,对纳入患者进行生存分析。结果最终纳入393例患者,其中暴露队列259例,非暴露队列134例。生存分析显示,暴露队列预估平均生存期为41.72个月,非暴露队列为33.42个月,两组差异具有统计学意义(P4个月),其中低暴露队列197例,高暴露队列62例,高暴露队列预估平均生存期高于低暴露队列约8.8个月(P65岁、男性、既往有吸烟史、无过敏史、无家族史、肺鳞癌、III期、接受西医系统治疗、无中草药治疗的患者中,紫龙金片暴露队列较非暴露队列生存期存在统计学差异(P65岁、男性、既往有吸烟史、无过敏史及家族史、肺鳞癌、III期、经西医系统治疗但无中草药治疗的患者生存较易从紫龙金片暴露中获益。

关键词：非小细胞肺癌真实世界研究紫龙金片生存分析暴露强度

盐酸达泊西汀片在中国健康受试者的生物等效性研究

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中国临床药理学杂志 2024年第21期 3153-3157页

作者：肖功胜孙宇宏单娜党艳妮惠大永苗琳琳刘瑞霞娄安锋郭嘉华刘峰陕西国际商贸学院医药学院陕西步长制药有限公司河南(郑州)中汇心血管病医院Ⅰ期临床试验研究室天津汉一医药科技有限公司

目的评价盐酸达泊西汀片仿制药与原研药在中国健康受试者中单剂量空腹和餐后条件下给药的生物等效性。方法用单中心、随机、开放、单次给药、两制剂、两周期、双交叉试验设计。空腹和餐后试验各入组36例受试者。在空腹或餐后条件下，... 详细信息

目的评价盐酸达泊西汀片仿制药与原研药在中国健康受试者中单剂量空腹和餐后条件下给药的生物等效性。方法用单中心、随机、开放、单次给药、两制剂、两周期、双交叉试验设计。空腹和餐后试验各入组36例受试者。在空腹或餐后条件下，单次口服盐酸达泊西汀片受试制剂和参比制剂60 mg,用液相色谱串联质谱法测定血浆中达泊西汀的浓度。用Phoenix WinNonlin 8.0软件计算主要药代动力学（PK）参数。结果空腹组的盐酸达泊西汀片受试制剂和参比制剂主要PK参数：达泊西汀Cmax分别为（449.36±203.01）和（432.85±199.75） ng·mL-1,AUC0-t分别为（2 400.96±1 392.58）和（2 251.82±1 225.84） ng·mL-1·h, AUC0-∞分别为（2 529.94±1 498.05）和（2 371.06±1 305.22） ng·mL-1·h。餐后组的盐酸达泊西汀片受试制剂和参比制剂主要PK参数：达泊西汀Cmax分别为（651.29±179.38）和（672.83±249.42） ng·mL-1,AUC0-t分别为（3 391.27±1 358.73）和（3 314.53±1 360.39） ng·mL-1·h, AUC0-∞分别为（3 630.79±1 605.89）和（3 549.22±1 526.61） ng·mL-1·h。在空腹和餐后条件下，受试制剂与参比制剂主要PK参数的90%置信区间均在80.00%～125.00%,表明盐酸达泊西汀片受试制剂和参比制剂在空腹状态和餐后给药时均具有生物等效性。结论盐酸达泊西汀片仿制药与原研药在中国健康受试者体内具有生物等效性。

关键词：盐酸达泊西汀片生物利用度生物等效性健康受试者液相色谱-串联质谱

基因递送中阳离子脂质体结构对转染效率及细胞毒性的影响研究进展

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中国药理学与毒理学杂志 2024年第3期38卷 220-231页

作者：邢浩宇孙洁芳董慧胜高千龙潘琪霏马茜李迎云南中医药大学中药学院云南昆明650500 北京茵诺医药科技有限公司北京100915

阳离子脂质体在基因治疗和基因沉默领域被广泛应用,其数量繁多,结构多样,有优化和改善基因递送行为的功能,随着基因治疗研究的逐渐深入,新型阳离子脂质体也被不断开发。阳离子脂质体主要有4个组成部分,即亲水的阳离子头部、疏水的脂质... 详细信息

阳离子脂质体在基因治疗和基因沉默领域被广泛应用,其数量繁多,结构多样,有优化和改善基因递送行为的功能,随着基因治疗研究的逐渐深入,新型阳离子脂质体也被不断开发。阳离子脂质体主要有4个组成部分,即亲水的阳离子头部、疏水的脂质尾部、连接键以及辅助脂质,每个部分的结构对基因递送中阳离子脂质的转染效率和细胞毒性具有重要影响。可电离阳离子脂质细胞毒性较低,已有产品上市。本综述可为阳离子脂质体的设计提供一个概念框架,为阳离子脂质体的选择提供一定理论支持。

关键词：阳离子脂质体可电离脂质结构转染效率细胞毒性

脂质纳米药物体内过程影响因素及药动学检测技术研究进展

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中国药理学与毒理学杂志 2024年第9期38卷 701-709页

作者：董慧胜邢浩宇高千龙潘琪菲马茜李迎孙洁芳云南中医药大学中药学院云南昆明650500 北京茵诺医药科技有限公司北京100915

过去30年,纳米药物递送系统(NDDS)成为与创新药物并驾齐驱且具有广泛应用前景的药物研发方向。然而,对NDDS体内过程基本认知的缺乏、有限的药动学相关研究手段及无法有效支持上游药物构建和下游药理毒理评价,成为了NDDS临床转化的技术... 详细信息

过去30年,纳米药物递送系统(NDDS)成为与创新药物并驾齐驱且具有广泛应用前景的药物研发方向。然而,对NDDS体内过程基本认知的缺乏、有限的药动学相关研究手段及无法有效支持上游药物构建和下游药理毒理评价,成为了NDDS临床转化的技术瓶颈。脂质纳米药物(LND)具有良好生物相容性,是工业转化最为成功的NDDS。本文围绕LND理化性质(粒径、形状、表面电位)、LND进入体内后表面蛋白冠组成及免疫系统和病理状态等体内微环境对药物吸收、分布、释放的影响进行综述,总结LND体内过程调控机制,介绍基于先进的光谱和质谱技术对生物基质中LND的动态载体粒子/解聚分子比,动态游离/包裹态药物比进行时空分布的解析方法,最后对该研究领域目前存在的问题和未来发展方向进行概括,以期为NDDS体内过程解析研究提供参考。

关键词：脂质纳米药物递送系统药动学活体成像探针液质联用

茯苓运化颗粒治疗2型糖尿病大鼠的非靶向代谢组学分析

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中国实验方剂学杂志 2024年第23期 195-204页

作者：田孟尧罗珂珂王梦晓胡天宝李洪梅何宗源杨立新郝莉雨司南刘玉洋边宝林王宏洁周严严中国中医科学院中药研究所北京精医和生医药科技有限公司

目的：基于非靶向代谢组学技术，分析茯苓运化颗粒对2型糖尿病（T2DM）大鼠血清内源性差异代谢物的调控作用，明确茯苓运化颗粒发挥改善T2DM作用的代谢调控途径。方法：70只SD级大鼠，雌雄各半，随机分为空白组、模型组、茯苓运化颗粒... 详细信息

目的：基于非靶向代谢组学技术，分析茯苓运化颗粒对2型糖尿病（T2DM）大鼠血清内源性差异代谢物的调控作用，明确茯苓运化颗粒发挥改善T2DM作用的代谢调控途径。方法：70只SD级大鼠，雌雄各半，随机分为空白组、模型组、茯苓运化颗粒高、中、低剂量组（以生药量计，20.70、10.35、5.18 g·kg-1）及阳性药组（盐酸吡格列酮片8.1 mg·kg-1）。除空白组外，其余各组均以高糖高脂饲料喂养联合腹腔注射链脲佐菌素（STZ）构建T2DM大鼠模型。造模成功后，给药组灌胃给予相应药物治疗，空白组及模型组灌胃等体积生理盐水，1次/d，共给药28 d。给药期间检测各组大鼠空腹血糖、糖化血红蛋白A1c(GHbA1c)水平，给药结束后采用苏木素-伊红（HE）染色观察大鼠胰腺组织的病理形态变化。采用超高效液相色谱-线性离子阱-静电场轨道阱高分辨质谱法（UPLC-LTQ-Orbitrap MS）检测大鼠血清内源性代谢物水平，通过主成分分析（PCA）和正交偏最小二乘法-判别分析（OPLS-DA）处理数据。利用人类代谢组数据库（HMDB）和京都基因与基因组百科全书（KEGG）鉴定差异代谢物，筛选变量重要性投影（VIP）值>1,P数（FC）1的差异代谢物，并通过MetaboAnalyst 5.0对筛选的差异代谢物进行代谢通路富集分析。通过受试者工作特征（ROC）曲线对筛选得到的差异代谢物进行诊断评价。结果：与空白组比较，模型组大鼠空腹血糖水平显著升高（P数量减少，胰岛β细胞明显减少、萎缩、肿大；与模型组比较，茯苓运化颗粒高剂量组和阳性药组大鼠给药2周后，空腹血糖明显降低（P<0.05,P<0.01），茯苓运化颗粒高剂量组大鼠GHbA1c含量明显降低（P<0.05），茯苓运化颗粒高、中、低剂量组大鼠胰腺组织病变减轻。非靶向代谢组学结果显示，与空白组比较，模型组共有46个差异代谢物发生明显变化；通路富集分析发现，T2DM主要影响了大鼠体内初级胆汁酸生物合成、D-氨基酸代谢、类固醇激素生物合成、甘油磷脂代谢等生物过程。与模型组比较，茯苓运化颗粒高剂量组中8个差异代谢物的水平明显回调，通路富集分析发现，主要涉及D-氨基酸代谢，视黄醇的新陈代谢，甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸的代谢，色氨酸代谢等代谢途径。ROC曲线进一步分析发现，11-顺视黄醇、D-哌啶酸、D-丝氨酸、硫酸对甲酚4个特征性差异标志物对于茯苓运化颗粒治疗T2DM具有较高的诊断价值。结论：茯苓运化颗粒可改善T2DM大鼠症状，其机制可能与调节差异代谢物，调控氨基酸类代谢和视黄醇代谢等通路相关。

关键词：茯苓运化颗粒 2型糖尿病超高效液相色谱-线性离子阱-静电场轨道阱质谱法(UPLC-LTQ-Orbitrap MS) 非靶向代谢组学受试者工作特征曲线

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测定地克珠利混悬液中的聚山梨酯20含量和枸橼酸含量的方法

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中国兽药杂志 2024年第2期58卷 58-65页

作者：李芳孙立亚杨丽英百美达医药科技(北京)有限公司石家庄050000

利用反相高效液相色谱法和蒸发光检测器快速便捷地测定地克珠利混悬液中聚山梨酯20和枸橼酸的成分及含量。吐温20方法:HPLC条件,Thermo U3000。流速:0.5 mL/min。流动相A:水,流动相B:乙腈。用梯度洗脱。ELSD 6000,漂移管温度:115℃。气... 详细信息

利用反相高效液相色谱法和蒸发光检测器快速便捷地测定地克珠利混悬液中聚山梨酯20和枸橼酸的成分及含量。吐温20方法:HPLC条件,Thermo U3000。流速:0.5 mL/min。流动相A:水,流动相B:乙腈。用梯度洗脱。ELSD 6000,漂移管温度:115℃。气体流速:2 L/min,稀释剂:乙腈。枸橼酸方法:橼酸的色谱条件:色谱柱:Tech Mate ST C18250 mm×4.6 mm,5μm,流动相:A;20 mmol磷酸氢二钠(用磷酸调节pH至3.0)B:色谱甲醇。流动相A∶B=95∶5。流速:1.0 mL/min,柱温:30℃紫外检测波长:UV 210 nm。该方法经过验证,有较好的精密度,线性及回收率等验证结果。该方法可以实现准确的定量分析,可作为一个可靠的检测方法。

关键词：地克珠利混悬液聚山梨酯20 吐温20 枸橼酸柠檬酸

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CD47胞外区蛋白多克隆抗体的制备

国际免疫学杂志 2024年第1期47卷 19-24页

作者：刘海静苏雨萌王芊艺北京亦庄国际生物医药科技有限公司北京100176

目的制备和鉴定抗CD47胞外区蛋白多克隆抗体。方法通过逆转录PCR(reverse transcription-PCR,RT-PCR)扩增CD47分子胞外区基因序列,分别重组到原核表达载体pET32a(+)和pET31b(+)中,利用大肠杆菌表达CD47蛋白,并优化异丙基硫代半乳糖苷(is... 详细信息

目的制备和鉴定抗CD47胞外区蛋白多克隆抗体。方法通过逆转录PCR(reverse transcription-PCR,RT-PCR)扩增CD47分子胞外区基因序列,分别重组到原核表达载体pET32a(+)和pET31b(+)中,利用大肠杆菌表达CD47蛋白,并优化异丙基硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导蛋白表达工艺,表达出CD47蛋白。用纯化的CD47蛋白免疫Balb/c小鼠,获得小鼠多克隆抗体,使用亲和层析法纯化CD47多抗,并对多抗进行酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)效价检测和Western blot特异性鉴定。结果成功构建pET32a(+)-CD47和pET31b(+)-CD47重组质粒。按照实验设置不同条件诱导表达蛋白后,选出最佳表达载体pET32a(+)-CD47。在大肠杆菌中获得表达最佳蛋白表达工艺。表达制备CD47蛋白,经过五次免疫后,得到CD47多抗。用ELISA法检测制备多抗的效价能达到1∶128000。Western blot检测结果显示,自制的CD47多抗能准确检测出小鼠心脏组织样品。结论成功制备了CD47胞外区蛋白多抗,为进一步研究CD47生物学功能奠定了基础。

关键词： CD47 胞外区蛋白多克隆抗体