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siRNA作为基因治疗药物的研究难题

中国新药杂志 2007年第7期16卷 506-510页

作者：付洁宋海峰钱小红军事医学科学院放射与辐射医学研究所药物代谢与药物动力学实验室北京100850

RNA干扰(RNA i)现象的发现与研究,为基因治疗带来新的契机,虽然小干扰RNA(siRNA)较单链反义寡核苷酸显示了更好的稳定性与基因沉默效果,但却同样面临基因治疗药物存在的共同问题,如体内的靶向性与有效性、完善的定量分析方法等等。因此,... 详细信息

RNA干扰(RNA i)现象的发现与研究,为基因治疗带来新的契机,虽然小干扰RNA(siRNA)较单链反义寡核苷酸显示了更好的稳定性与基因沉默效果,但却同样面临基因治疗药物存在的共同问题,如体内的靶向性与有效性、完善的定量分析方法等等。因此,siRNA作为治疗药物还有诸多困难需要克服。目前的研究主要集中在:修饰方式与递送系统研究,以提高siRNA体内的稳定性与靶向性;siRNA定量分析方法学研究,以考察其体内药动学行为并进一步阐明其体内作用机制。

关键词： RNA干扰小干扰RNA 基因治疗药动学定量

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川芎嗪的肝微粒体代谢动力学及代谢表型研究

药学学报 2014年第3期49卷 374-379页

作者：谭妍庄笑梅沈国林李桦高月军事医学科学院毒物药物研究所北京100850 军事医学科学院放射与辐射医学研究所北京100850

应用体外人和大鼠肝微粒体以及重组人源代谢酶孵育体系,研究了中药有效成分川芎嗪(TMPz)的肝代谢动力学特征和代谢酶表型。将TMPz与加入不同辅酶的人(HLM)和大鼠肝微粒体(RLM)孵育,应用LC-MS/MS法测定其剩余浓度,考察TMPz的肝微粒体代... 详细信息

应用体外人和大鼠肝微粒体以及重组人源代谢酶孵育体系,研究了中药有效成分川芎嗪(TMPz)的肝代谢动力学特征和代谢酶表型。将TMPz与加入不同辅酶的人(HLM)和大鼠肝微粒体(RLM)孵育,应用LC-MS/MS法测定其剩余浓度,考察TMPz的肝微粒体代谢稳定性和酶动力学。在+NADPH和+NADPH+UDPGA的肝微粒体中,TMPz发生代谢转化。在同时加入NADPH和UDPGA的HLM和RLM中,TMPz的t1/2、Km和Vmax分别为(94.24±4.53)和(105.07±9.44)min、(22.74±1.89)和(33.09±2.74)μmol·L-1、以及(253.50±10.06)和(190.40±8.35)nmol·min-1·mg-1(protein)。TMPz在HLM的代谢消除略快于RLM,其氧化生成活性产物2-羟甲基-3,5,6-三甲基吡嗪(HTMP)后可进一步与葡糖醛酸结合。应用重组人源CYP酶及特异化学抑制剂法确定CYP1A2、2C9和3A4是参与川芎嗪Ⅰ相代谢的CYP同工酶,并介导了HTMP的生成。经整体归一化法得到CYP1A2、2C9和3A4的贡献率分别是19.32%、27.79%和52.90%。应用LC-MS/MS峰面积相对定量法,观察到UGT1A1、1A4和1A6是介导HTMP葡糖醛酸结合反应的主要尿苷二磷酸葡糖醛酸转移酶(UGT)亚型。上述结果表明,川芎嗪的肝脏代谢涉及多酶介导的Ⅰ相和Ⅱ相代谢。

关键词：川芎嗪细胞色素P450酶尿苷二磷酸葡糖醛酸转移酶药物-药物相互作用

酸解桥式酶联免疫吸附分析法对食蟹猴血清中治疗性单克隆抗体奥法木单抗的免疫原性研究

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中国药学杂志 2017年第1期52卷 14-19页

作者：王变珍邓承莲邹佳高柳村董斌宋海峰军事医学科学院放射与辐射医学研究所军事医学科学院药代动力学重点实验室北京100850 军科正源(北京)药物研究有限责任公司北京102206

目的以抗CD20全人单克隆抗体(Arzerra^(TM))为载体,建立并验证酸解桥式酶联免疫吸附分析法(Bridging ELISA),研究食蟹猴血清中该药物的抗药抗体(anti-drug antibodies,ADAs),了解该药物在猴体内的免疫原性。方法预先包被Arzerra^(TM)的... 详细信息

目的以抗CD20全人单克隆抗体(Arzerra^(TM))为载体,建立并验证酸解桥式酶联免疫吸附分析法(Bridging ELISA),研究食蟹猴血清中该药物的抗药抗体(anti-drug antibodies,ADAs),了解该药物在猴体内的免疫原性。方法预先包被Arzerra^(TM)的酶标板,先后加入生物素标记的Arzerra^(TM)和酸解待测样品,包被药物(Arzerra^(TM))和生物素标记药物(Biotin-Arzerra^(TM))与样品中ADAs形成"药物-ADAs-生物素标记药物"桥接复合物并显色。结果验证方法灵敏度为7.4 ng·mL^(-1),阳性对照批内、批间精密度不大于17.6%,筛选阈值(sereening cut point,SCP)为1.23,确证实验阈值(confirmatory cut point,CCP)为42.8%;同时,方法具有20倍药物耐受性[Drug-ADAs(40.0μg·mL^(-1);2.0μg·mL^(-1))]及3.2~100 000.0 ng·mL^(-1)内无钩状效应等特性。利用该桥式酶联免疫吸附分析法测定食蟹猴血清中抗药抗体(抗Arzerra^(TM)抗体),于给药后21 d检测到ADAs的产生。结论针对治疗性单克隆抗体的ADAs检测,Bridging ELISA法具有较高的灵敏度及较好的耐药性等特征,故不失为该类药物ADA检测的理想方法之一。

关键词：酸解桥式酶联免疫吸附分析法抗药抗体免疫原性

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核酸疫苗的药动学与安全性研究进展

中国新药杂志 2006年第5期15卷 337-340页

作者：付洁宋海峰军事医学科学院放射与辐射医学研究所药物代谢与药物动力学实验室北京100850

核酸疫苗是将编码某种抗原蛋白的外源基因(DNA或RNA)直接导入机体细胞内,通过宿主细胞的转录系统合成抗原蛋白,诱导宿主对该抗原蛋白的免疫应答,从而达到预防和治疗疾病的目的。作为一种新型疫苗,核酸疫苗迄今已有10余种被FDA批准进入... 详细信息

核酸疫苗是将编码某种抗原蛋白的外源基因(DNA或RNA)直接导入机体细胞内,通过宿主细胞的转录系统合成抗原蛋白,诱导宿主对该抗原蛋白的免疫应答,从而达到预防和治疗疾病的目的。作为一种新型疫苗,核酸疫苗迄今已有10余种被FDA批准进入非临床和临床试验,但其应用于人体的有效性、安全性、可接受性仍是值得关注的问题。基于对乙肝病毒DNA疫苗药动学的研究基础,结合近几年国内外相关研究,笔者对核酸疫苗的药动学与安全性进行综述。

关键词：核酸疫苗药动学生物分布安全性

两种重组抗CD20人源化单克隆抗体定量分析方法的比较及其在药代动力学研究中的应用

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分析化学 2014年第3期42卷 337-342页

作者：邓承莲邹佳欧伦董立厚宋海峰广西医科大学军事医学科学院放射与辐射医学研究所军事医学科学院药代动力学重点实验室

采用酶联免疫吸附分析（ELISA）与基于Wil2-S细胞的流式细胞术（FCA）两种方法对生物基质中的重组抗CD20人源化单克隆抗体（rh-anti-CD20zumab）进行定量分析,并对两种方法进行系统比较。方法学验证结果表明,两种方法均具有良好的特异... 详细信息

采用酶联免疫吸附分析（ELISA）与基于Wil2-S细胞的流式细胞术（FCA）两种方法对生物基质中的重组抗CD20人源化单克隆抗体（rh-anti-CD20zumab）进行定量分析,并对两种方法进行系统比较。方法学验证结果表明,两种方法均具有良好的特异性、精密度和准确度,但定量范围存在明显差异。ELISA法批内和批间精密度均小于19.5%,准确度为-18.2%;7.6%;FCA法批内和批间精密度均小于19.0%,准确度为-18.9%;8.4%。二者定量范围分别为0.04;.0 mg/L和3.1;00 mg/L,ELISA法的灵敏度显著高于FCA法。利用两种方法测定猕猴静脉滴注rh-anti-CD20zumab后的血药浓度-时间变化并进行药代动力学（PK）分析。结果表明,在给定剂量下,通过两种方法获得的PK结果具有良好的一致性。FCA法是一种细胞表面抗原靶向性抗体类药物PK研究及药效动力学（PD）研究的快捷、理想的方法。

关键词：抗CD20单克隆抗体人源化 ELISA 流式细胞术药代动力学

异鼠李素和阿魏酸在大鼠原代肝细胞的肝摄取性质

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中国药理学与毒理学杂志 2013年第3期27卷 411-417页

作者：沈国林庄笑梅谭妍原梅李桦高月军事医学科学院毒物药物研究所药物代谢研究室北京100850 军事医学科学院放射与辐射医学研究所药理毒理研究室北京100850

目的建立大鼠原代肝细胞摄取模型,评价异鼠李素和阿魏酸的肝细胞摄取性质。方法应用RT-qPCR技术测定0,0.5,2和4h悬浮培养原代大鼠肝细胞上摄取转运体有机阴离子转运多肽(Oatp)1和Oatp2,有机阴离子转运体(Oat)2和有机阳离子转运体(Oct)1... 详细信息

目的建立大鼠原代肝细胞摄取模型,评价异鼠李素和阿魏酸的肝细胞摄取性质。方法应用RT-qPCR技术测定0,0.5,2和4h悬浮培养原代大鼠肝细胞上摄取转运体有机阴离子转运多肽(Oatp)1和Oatp2,有机阴离子转运体(Oat)2和有机阳离子转运体(Oct)1的mRNA表达。应用已知底物非索非那定、普伐他汀、甲氨蝶呤和阿昔洛韦评价转运体的功能。将已知底物或受试药物在4℃和37℃分别与肝细胞孵育不同时间,LC-MS/MS定量测定细胞摄取量,考察温度和时间对底物摄取的影响。由浓度依赖的摄取实验,计算得到Km、Vmax和主动摄取率等参数。在肝细胞模型上,将转运体的阳性抑制剂与异鼠李素10μmol·L-1和阿魏酸50μmol·L-1共孵育2min,观察抑制剂对受试药转运的影响。结果悬浮培养大鼠原代肝细胞上表达有转运体Oatp1,Oatp2,Oat2和Oct1,并能介导已知底物的主动摄取。转运体的mRNA表达水平随着时间的延长而快速下降,4h的表达水平约为0h的10%。转运体对已知底物摄取活性也随时间呈下降趋势,但程度显著低于表达水平,4h的活性约为0h的28.7%～71.4%。在经验证的肝细胞模型上,异鼠李素的4℃和37℃摄取无显著差异,主动转运率为14.6%。阿魏酸在37℃的摄取量显著高于4℃,主动转运率为84.1%;Oct阳性抑制剂奎尼丁100μmol·L-1能显著抑制阿魏酸的肝摄取,抑制率为64.9%。结论成功建立了大鼠原代肝细胞摄取模型,并用底物进行了验证。异鼠李素通过被动扩散进入肝细胞,阿魏酸的肝细胞摄取则以主动转运为主。

关键词：异鼠李素阿魏酸肝细胞生物转运主动

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核酸杂交酶联桥接分析系统定量分析寡核苷酸

分析化学 2012年第4期40卷 503-509页

作者：孙云娟付洁王清清周磊董立厚欧伦高新宋海峰军事医学科学院放射与辐射医学研究所药理毒理研究室药代动力学重点实验室

建立了基于核酸杂交及连接酶和核酸内切酶的酶联桥接分析(ELBA)系统,用于生物基质中反义寡核苷酸(ODN)药物的定量分析。对ELBA系统中的亲和素包被、俘获探针/检测探针浓度、T4DNA连接酶及S1核酸酶用量、碱性磷酸酶底物反应时间等条件进... 详细信息

建立了基于核酸杂交及连接酶和核酸内切酶的酶联桥接分析(ELBA)系统,用于生物基质中反义寡核苷酸(ODN)药物的定量分析。对ELBA系统中的亲和素包被、俘获探针/检测探针浓度、T4DNA连接酶及S1核酸酶用量、碱性磷酸酶底物反应时间等条件进行了优化,确定使用中性亲和素包被的酶标板,俘获探针与检测探针浓度比为2∶3,S1酶为40U/孔,显色15min为最优条件,并考察了生物基质效应和稀释效应对方法的影响,建立了猕猴血浆中反义寡核苷酸的定量方法,并进行方法学确证,方法学定量范围为0.10～6.25nmol/L。本方法成功应用于反义硫代寡核苷酸药物在低剂量(1mg/kg)静脉滴注后的药代动力学研究,成为生物基质中寡核苷酸类药物定量分析的有效手段。

关键词：寡核苷酸药代动力学定量核酸杂交酶联桥接分析系统

自动化在线固相萃取HPLC/MS/MS法分析比格犬血浆中的葛根素含量

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军事医学科学院院刊 2007年第3期31卷 246-249页

作者：李小双王清清孙效欧伦朱宝珍尚明美宋海峰军事医学科学院放射与辐射医学研究所药物代谢与药物动力学实验室北京100850

目的：建立自动化在线固相萃取HPLC/MS/MS法测定犬血浆中葛根素的含量,研究葛根素制剂在比格犬体内的药代动力学。方法：分析流动相为甲醇-乙腈-0.1%甲酸溶液（25∶25∶50,v/v/v）,流速为0.2 ml/min,分析色谱柱为Grace Vydac C8柱。在... 详细信息

目的：建立自动化在线固相萃取HPLC/MS/MS法测定犬血浆中葛根素的含量,研究葛根素制剂在比格犬体内的药代动力学。方法：分析流动相为甲醇-乙腈-0.1%甲酸溶液（25∶25∶50,v/v/v）,流速为0.2 ml/min,分析色谱柱为Grace Vydac C8柱。在线固相萃取流动相为乙腈-0.1%甲酸溶液（5∶95,v/v）,流速为2.0 ml/min,固相萃取柱的填料为Zobax C18（50μm）。配有电喷雾离子源（ESI）的线性离子阱LTQ质谱仪用于定量分析葛根素,采用选择离子反应监测（SRM）方式,用于定量分析的离子反应分别为m/z 415.2→m/z 195.2（葛根素）。结果：线性范围0.39-400 ng/ml（r2〉0.999）,最低定量限为0.39 ng/ml。日内、日间精密度（RSD%）分别小于7.6%和6.4%,低、中、高3个浓度的QC样品准确度分别平均为-0.51%,1.20%,-2.31%。单样品分析时间为6.5 min。结论：所建立的在线固相萃取HPLC/MS/MS法样品处理简便、分析测试速度快、灵敏度高、线性范围宽、精密度和准确度满足药代动力学研究的需要,可用于非临床和临床药代动力学研究。

关键词：液-质联用在线固相萃取葛根素药代动力学

炎症诱发的药物代谢酶表型变化及其机制研究进展

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国际药学研究杂志 2015年第5期42卷 541-550页

作者：庄笑梅军事医学科学院毒物药物研究所药物代谢研究室北京100850

炎症状态与人类大多数疾病密切相关。炎症导致药物代谢酶表型的改变可影响药物在体内的代谢和处置,进而影响药效,特别是可增加药物不良反应的风险。近年来研究已证实,炎性因子水平的升高与包括Ⅰ相、Ⅱ相代谢酶在内的多种药物代谢酶的... 详细信息

炎症状态与人类大多数疾病密切相关。炎症导致药物代谢酶表型的改变可影响药物在体内的代谢和处置,进而影响药效,特别是可增加药物不良反应的风险。近年来研究已证实,炎性因子水平的升高与包括Ⅰ相、Ⅱ相代谢酶在内的多种药物代谢酶的下调有密切关系,涉及的机制不仅包括炎性细胞因子的释放,还包括与炎症相关信号通路的调控、药物代谢酶转录(后)水平的调控等。本文系统回顾了炎症状态下多种药物代谢酶表达水平和活性的变化及其相关机制,期望在疾病状态下,为根据药物代谢酶表型的个体化安全用药提供信息和研究思路。

关键词：炎症药物代谢酶细胞因子代谢表型变化