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小儿肾母细胞瘤HSP70和HSP90α的表达及其意义

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中华小儿外科杂志 2005年第5期26卷 226-229页

作者：杨屹高红王常林侯英蔡炜嵩中国医科大学附属二院小儿外科沈阳110004 卫生部小儿先天畸形重点实验室

目的检测热休克蛋白70(heatshockprotein,HSP)和90α在小儿肾母细胞瘤组织中的表达,并探讨其临床意义。方法应用免疫组织化学方法及逆转录聚合酶链反应(RTPCR)技术检测20例肾母细胞瘤组织及瘤旁正常肾脏组织中HSP70和HSP90α的表达,其中... 详细信息

目的检测热休克蛋白70(heatshockprotein,HSP)和90α在小儿肾母细胞瘤组织中的表达,并探讨其临床意义。方法应用免疫组织化学方法及逆转录聚合酶链反应(RTPCR)技术检测20例肾母细胞瘤组织及瘤旁正常肾脏组织中HSP70和HSP90α的表达,其中男8例,女12例,年龄19个月至5岁,平均(22.5±13.7)个月。按NWTS3组织分型标准,20例肾母细胞瘤均为预后好的组织结构,包括间叶型5例,胚芽型9例,上皮型6例。临床分期Ⅰ期4例,Ⅱ期8例,Ⅲ期6例,Ⅳ期2例。结果免疫组化结果示HSP70和HSP90α在肿瘤组织中的阳性表达率(75.0%,15/20;80.0%,16/20)明显低于正常肾组织(100%,20/20;100%,20/20),P值分别为0.017和0.035,主要位于胚芽及上皮成分,而肿瘤基质均为阴性。对照组HSP70和HSP90α的表达位于肾小管上皮细胞、肾小球系膜细胞及内皮细胞胞浆内,均为强阳性。RTPCR结果示对照组HSP70和HSP90αmRNA的扩增产物条带多为阳性或强阳性,而在肾母细胞瘤中多为中度阳性或弱阳性表达。HSP70/βactin在对照组和肿瘤组分别为1.41±0.26和0.73±0.27(P=0.004),HSP90α/βactin在对照组和肿瘤组分别为0.95±0.04和0.61±0.13(P=0.0009)。相关分析表明HSP70和HSP90α蛋白和mRNA的表达均成正相关(r=0.694,P=0.001;r=0.720,P=0.001)。HSP70。

关键词： HSP90α HSP70 肾母细胞瘤逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR) 小儿 β-actin 其意义表达及免疫组织化学方法 protein 肾小管上皮细胞肾小球系膜细胞热休克蛋白阳性表达率 αmRNA 术后复发率对照组临床意义肾脏组织

COL1A1基因启动子区突变（-106C〉T）对其表达的影响

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中华小儿外科杂志 2010年第7期31卷 541-544页

作者：李连永赵群高红王莉莉中国医科大学附属盛京医院小儿骨科沈阳110104 卫生部小儿先天畸形重点实验室

目的探讨COL1A1基因启动子区突变（-106C〉T）对其表达的影响。方法PCR扩增正常人COL1A1基因转录起始点上游-1024＋36bp的启动子序列，片段长度为1060bp。经T／A克隆，连接酶切位点，再连接到PGL3-basic载体，得到野生型的PGL3-COL1A1... 详细信息

目的探讨COL1A1基因启动子区突变（-106C〉T）对其表达的影响。方法PCR扩增正常人COL1A1基因转录起始点上游-1024＋36bp的启动子序列，片段长度为1060bp。经T／A克隆，连接酶切位点，再连接到PGL3-basic载体，得到野生型的PGL3-COL1A1表达载体。再采用定点突变的方法，把-106位碱基的C突变成T，再连接到PGL3-basic载体，构建突变型的PGL3-COL1A1表达载体。用上述两种表达载体及PGL3-basic分别瞬时转染NIH3T3细胞。细胞培养48h后，测定各组细胞表达的荧光素酶的相对活性，以明确COL1A1启动子区-106位碱基C〉T突变对基因转录调控的影响。结果经琼脂糖凝胶及基因测序鉴定，证实载体构建成功。荧光素酶活性测定结果显示，在转染野生型PGL3-COL1A1表达载体的细胞组，荧光素酶的相对活性为3．8665，为阴性对照组（PGL3-basic）的4．8倍；转染突变型PGL3-COL1A1表达载体的细胞组，荧光素酶的相对活性为1．3917，为阴性对照组的1．7倍。COL1A1基因启动子-106位碱基C〉T突变后，其转录活性较野生型降低了64％。结论COL1A1基因启动子区-106C〉T突变可以在转录水平抑制该基因的表达。

关键词：髋发育不良先天性 COL1A1基因基因表达调控

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SIP1基因在先天性巨结肠症中的表达研究

中华小儿外科杂志 2012年第2期33卷 92-96页

作者：伍美弭杰高红中国医科大学附属盛京医院卫生部小儿先天畸形重点实验室沈阳110004

目的研究SIP1 （smad-interacting protein 1）基因在先天性巨结肠症（Hirschsprung Disease,HD）中的表达情况,探讨SIP1与HD发病的关系.方法利用荧光实时定量PCR（quantitative real-time PCR,qRT-PCR）、蛋白印迹（Western blot）和免疫组化方法检测30例HD狭窄段（无神经节细胞）和正常段（神经节细胞）肠管组织患儿SIP1的表达,并对其表达进行定量与比较分析.结果 SIP1在HD狭窄段肠管中mRNA表达为19.19±0.23,均高于正常段肠管中的表达11.06±1.12,差异有统计学意义（P＜0.05）.Western Blot结果显示,SIP1在HD狭窄段肠管中蛋白相对含量为53.73±0.49,明显高于正常段肠管蛋白含量18.32±1.54,差异有统计学意义（P＜0.05）.免疫组化结果显示,SIP1在HD狭窄段肠管中高表达,呈棕黄色；正常段肠管低表达,无色或淡黄色.结论 SIP1 mRNA与蛋白在HD狭窄段肠管中高表达,提示SIP1与HD的发生有密切关系,可能在先天性消化道畸形的肠道发育中具有重要作用.

关键词：先天性巨结肠 SIP1基因蛋白印迹免疫组织化学

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先天性马蹄内翻足的实验及临床初步观察

中华外科杂志 2005年第8期43卷 505-508页

作者：杜世新吉士俊孙开来汕头大学医学院第一附属医院骨科 515041 中国医科大学附属第二临床医院小儿骨科卫生部先天畸形重点实验室中国医科大学遗传教研室

目的　在动物模型和临床电生理检测基础上,探索先天性马蹄内翻足的病理与临床病变间的可能联系。方法　83只大白鼠从怀孕第10天起,将维甲酸石蜡油混悬液经胃管单次注入,以建立马蹄内翻足动物模型;应用躯体感觉诱发电位等电生理检测方法,... 详细信息

目的　在动物模型和临床电生理检测基础上,探索先天性马蹄内翻足的病理与临床病变间的可能联系。方法　83只大白鼠从怀孕第10天起,将维甲酸石蜡油混悬液经胃管单次注入,以建立马蹄内翻足动物模型;应用躯体感觉诱发电位等电生理检测方法,对48例(63足)先天性马蹄内翻足患儿的神经功能进行检测。结果　动物模型的马蹄内翻足发病率为53 7%。距骨持续停滞在胚胎阶段,距骨、跟骨间重叠不良和跟骨内翻,脊髓前角细胞有凋亡现象; 68 3%的患儿电生理检测异常,明确病变位点位于腰骶脊髓占48 8%。结论　先天性马蹄内翻足在胚胎发育期即有足的马蹄内翻,且畸形程度随生长发育而逐步加重。脊髓前角细胞凋亡可能同时诱发脊柱裂、肛门直肠畸形、先天性马蹄内翻足等疾患。

关键词：先天性马蹄内翻足初步观察躯体感觉诱发电位电生理检测方法实验动物模型脊髓前角细胞肛门直肠畸形胚胎发育期临床病变单次注入神经功能生长发育畸形程度细胞凋亡大白鼠经胃管混悬液石蜡油维甲酸发病率

SIP1单核苷酸多态性rs41292293和rs34961586与先天性巨结肠的关系

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中华小儿外科杂志 2009年第9期30卷 604-608页

作者：高红张娟吕良英张志波王维林中国医科大学附属盛京医院卫生部小儿先天畸形重点实验室沈阳110004

目的探讨SIP1基因单核苷酸多态性（Single Nucleotide Polymorphisms，SNPs）rs41292293和rs34961586与先天性巨结肠病（Hirschsprung disease，HSCR）关系，为评估HSCR患病风险奠定基础。方法提取病例组（HSCR患儿）和对照组（正常健康人）各180例外周血基因组DNA，聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）法扩增SIP1基因2个外显子（exon5-rs41292293和exon6-rs34961586），PCR产物用限制性内切酶HhaI和RsaI消化与测序，以进一步确定基因突变位点，应用X^2检验统计分析病例组和对照组等位基因频率、基因型频率及其患病风险。结果HSCR组与对照组SJP1 rs41292293 GA和GG基因型频率及A和G等位基因频率差异显著（P〈0.05），AA基因型高于GG基因型，AG在HSCR组中存在多态性，对照组与HSCRSNPs基因型分布GA、AA和GG分别为48．89％、35．00％和16．11％与37．78％、49．44％和12．78％，比较发现A（68．33％）和G（31．67％）等位基因频率有显著性差异（P〈0．05）；HSCR组与对照组SIPI rs34961586 GC和GG基因型频率及C和G等位基因频率差异显著（P〈0．05）,GG基因型显著高于CC基因型，GC在HSCR组中存在多态性，对照组与HSCRSNPs基因型分布GC、GG和CC分别为34．44％、56．11％和9．45％与46．11％、39．44％和14．45％，比较发现G（65．83％）和C（34．17％）等位基因频率有显著性差异（P〈0．05）。测序rs41292293第268和256位密码子核苷酸CCC→CGA和TGG→TGT杂合突变；rs3496i586第135位密码子核苷酸CCA—CAC、TGC→TTC和TGC—TGG杂合突变。结论SIP1 rs41292293和rs34961586与HSCR的发生有密切关系。为进一步研究该基因SNPs与其生理功能和疾病的关系提供基础资料。

关键词： Hirschsprung病 SIP1基因多态性单核苷酸等位基因

DIXDC1和AXIN2基因在先天性巨结肠症中的表达及意义

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中华小儿外科杂志 2013年第2期34卷 111-115页

作者：高红弭杰伍美贾慧敏张海兰黄英张志波王维林中国医科大学附属盛京医院卫生部小儿先天畸形重点实验室沈阳110004

目的分析DIXDC1和AXIN2基因在先天性巨结肠症（hirschsprung disease，HSCR）中的表达，探讨其在HSCR中的意义。方法采用蛋白印迹（Western blot）、免疫组化和荧光实时定量PCR（quantitative rea1-timePCR，qRT-PCR）方法检测60例HSCR患儿正常段（有神经节段肠管）和狭窄段（无神经节段肠管）中DIXDC1和AXIN2的表达，并对其表达进行定量与比较分析。结果DIⅪ）C1和AxIN2在HSCR狭窄段肠管中蛋白相对表达量为27．16±2．04和29．63±4．72，高于正常段肠管中的13．27±3．15和14．99±2．82，差异有统计学意义（DIⅪ）C1P〈O．041；AXIN2P〈0．035）。DIXDC1和AXIN2在HSCR狭窄段肠壁的肌间和黏膜下细胞胞质内呈强阳性反应，而在HSCR正常段肠壁的肌间和黏膜下细胞胞质内呈弱阳性或阴性。DIⅪ）C1和Ax1N2在HSCR狭窄段肠管中mRNA相对含量为22．34±1．23和25．77±2．06，高于正常段肠管中的12．53±1．47和13．98±1．62，差异有统计学意义（DIXDC1P〈O．033；AXIN2P〈O．029）。结论DIXDC1和AXIN2mR—NA与蛋白在HSCR肠管组织中的异常表达，可能与HSCR的发生关系密切，并可能在先天性消化道畸形的肠道发育中起一定作用。

关键词： Hirschsprung病 DIXDC1基因 AXIN2基因

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胃食管反流胃肌电活动变化的研究

中国医科大学学报 2003年第5期32卷 446-447,463页

作者：陈立天张继红李心元中国医科大学附属第二医院小儿外科中国医科大学血液研究室

目的 :探讨正常儿与胃食管反流 (GER)患儿的胃肌电活动特点 ,认识小儿GER的病因及病理生理特征 ,为治疗提供客观依据和指导。方法 :对 2 0例正常儿及 2 0例GER小儿进行胃电图监测 ,记录主功率 (DP)、主频率等指标。结果 :GER患儿主频值... 详细信息

目的 :探讨正常儿与胃食管反流 (GER)患儿的胃肌电活动特点 ,认识小儿GER的病因及病理生理特征 ,为治疗提供客观依据和指导。方法 :对 2 0例正常儿及 2 0例GER小儿进行胃电图监测 ,记录主功率 (DP)、主频率等指标。结果 :GER患儿主频值明显减低 ,胃电节律紊乱 ,以胃动过速为主。GER患儿大多存在胃动力障碍。结论 :胃动力障碍 ,胃 -幽门窦 -十二指肠蠕动不协调是造成GER的主要因素。

关键词：胃食管反流胃电图

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首届全国小儿实验外科与临床新技术会议纪要

中华小儿外科杂志 2007年第2期28卷 111-112页

作者：袁正伟王维林中国医科大学附属盛京医院小儿外科、卫生部小儿先天畸形重点实验室沈阳110004

为促进小儿外科实验技术和研究水平的提高，由《中华小儿外科杂志》与中国医科大学附属盛京医院卫生部小儿先天畸形重点实验室共同举办的首届全国小儿实验外科与临床新技术会议于2006年8月26-29日在沈阳召开。本次会议共收到论文104篇... 详细信息

为促进小儿外科实验技术和研究水平的提高，由《中华小儿外科杂志》与中国医科大学附属盛京医院卫生部小儿先天畸形重点实验室共同举办的首届全国小儿实验外科与临床新技术会议于2006年8月26-29日在沈阳召开。本次会议共收到论文104篇，其中专家讲座22篇，大会发言74篇（应用基础研究17篇，普外26篇，腹腔镜14篇，泌尿11篇，骨科6篇），会议交流8篇。参加会议的代表有来自香港和内地各个小儿外科中心的知名专家，其中包括中国工程院院士、中华小儿外科学会名誉主席、《中华小儿外科杂志》顾问、北京儿童医院张金哲教授，香港大学副校长、

关键词：小儿外科实验外科会议临床北京儿童医院中国工程院院士中国医科大学专家讲座

转化生长因子β2在发育性髋关节发育不良患儿关节囊的分布和表达

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中国当代儿科杂志 2010年第8期12卷 641-644页

作者：史立伟赵群张立军李连永高红中国医科大学附属盛京医院小儿外科辽宁沈阳110004 中国医科大学附属盛京医院卫生部小儿先天畸形重点实验室辽宁沈阳110004

目的探讨发育性髋关节发育不良(DDH)患儿和非DDH儿童TGF-β2在关节囊的免疫组化分布规律与水平差异,并比较TGF-β2在mRNA水平的表达差异,以探索髋关节松弛的原因。方法选取性别相同、年龄相近的8对DDH(发育性髋关节脱位)患儿与非DDH儿... 详细信息

目的探讨发育性髋关节发育不良(DDH)患儿和非DDH儿童TGF-β2在关节囊的免疫组化分布规律与水平差异,并比较TGF-β2在mRNA水平的表达差异,以探索髋关节松弛的原因。方法选取性别相同、年龄相近的8对DDH(发育性髋关节脱位)患儿与非DDH儿童进行配对研究,采用S-P法免疫组化技术和半定量RT-PCR技术检测关节囊中TGF-β2的分布规律与水平差异,以及mRNA水平的差异。结果分泌TGF-β2的成纤维细胞于贴近关节侧的滑膜层呈强阳性表达,内部纤维层阳性表达细胞稀疏,强度减弱。DDH组与对照组配对比较,纤维层中有阳性成纤维细胞百分比及局部染色的灰度值较对照组明显减少,差异有统计学意义,P<0.01。DDH组关节囊TGFβ2mRNA的表达较对照组减少,差异有统计学意义,P<0.05。结论 DDH患儿的髋关节松弛很可能与关节囊中TGF-β2的分布减少和表达异常有关。

关键词：发育性髋关节发育不良关节松弛关节囊转化生长因子儿童